少腹逐瘀汤加减方对寒凝血瘀型痛经模型大鼠干预的研究

2018-05-16孟桐宇

反射疗法与康复医学 2018年6期

孟桐宇

辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032

少腹逐瘀汤出自《医林改错》，本书由清代医家王清任编写。其方组成：小茴香七粒炒，干姜二分炒，元胡一钱，没药一钱炒，当归三钱，川芎一钱，官桂一饯，赤芍二钱，蒲黄三钱生，灵脂二钱炒，水煎服。少腹逐瘀汤，此方治少腹积块疼痛，或有积块不疼痛，或疼痛而无积块，或少腹胀满，或经血见时，先腰痠少腹胀，或经血一月见三、五次，接连不断，断而又来，其色或紫，或黑，或块，或崩漏兼少腹疼痛，或粉红兼白带，皆能治之，效不可尽述[1]。该研究在原方上又进行了加减，药物组成如下小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、没药（研）6 g、当归 9 g、川芎 6 g、官桂 3 g、赤芍6 g、蒲黄 9 g、五灵脂（炒）6 g、丹参 15 g、香附 10 g、乌药10 g、甘草6 g。为了探讨少腹逐瘀汤加减方对寒凝血瘀型痛经模型大鼠干预，该文从PGE2及血小板粘附性的指标探讨少腹逐瘀汤加减方治疗寒凝血瘀痛经的作用机制研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物选用3月龄的SPF级健康 Wistar雌鼠48只，均200 g左右。所有大鼠均性成熟但未交配。于SPF 级动物房内饲养，室内温度(24±1)℃，湿度(50±5)%，光照。使用清洁级大鼠全营养饲料，自由饮用清水。

1.1.2 实验药物少腹逐瘀汤加减方（小茴香（炒）7粒、干姜（炒）0.6 g、胡索 3 g、没药（研）6 g、当归 9 g、川芎6 g、官桂 3 g、赤芍 6 g、蒲黄 9 g、五灵脂（炒）6 g、丹参15 g、香附 10 g、乌药 10 g、甘草 6 g）

1.1.3 实验药物制备少腹逐瘀汤加减方一副共90 g,分别用8倍量蒸馏水高温煎煮3次，20 min/次。合并3次药物溶液，过滤并减压浓缩到与原药质量1∶1（g：mL）的体积量。依据《药理实验方法学》中体表面积折算大鼠每日给药剂量，将人的临床用药剂量换算成大鼠的剂量。经计算少腹逐瘀加减方人临床用药1.5 g/kg。

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物分组处理将处于发情期的雌性大鼠随机分为6组:空白对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组（临床剂量）、中药高剂量组，阳性药对照组，每组8只，共48只动物。除空白对照组外，其余各组大鼠制备寒凝血瘀痛经大鼠病证结合动物模型：用0～4℃冰水浸泡大鼠，1 次/d，6 min/次，连续 35 d，以寒冷刺激诱导形成寒凝血淤症模型，同时大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液0.03 mg/只/d,使子宫同步化，制造原发性痛经模型。于造模的第15天开始分别给予中药低剂量组、中药中剂量组（临床剂量）、中药高剂量组少腹逐瘀加减方灌胃；阳性药对照组以安瑞克布洛芬灌胃；空白对照组、模型组用等量生理盐水灌胃，1 次/d，连续 35 d。

1.2.2 指标检测 ①扭体反应：连续灌胃35 d，最后一日给药1 h后，各组腹腔注射缩宫素2 U/只，观察30 min内大鼠扭体次数并计算扭体潜伏期、扭体次数抑制率。扭体潜伏期=开始扭体时间-注射缩宫素时间；扭体抑制率=（模型组扭体均数-，给药组扭体均数）/模型组扭体均数×100%。跟据Schmauss提出的行为学评分标准，统计大鼠扭体次数、大鼠扭体潜伏期时间（min）及扭体抑制率。②血小板粘附性的指标：造模后,各组大鼠均注射10%水合氯醛溶液(0.3 mL/kg)麻醉,采血,将血液置于含肝素或乙二胺四乙酸二钾 (测血细胞比容时)的真空采血管中,混匀,离心,采用全自动血流变测试仪迅速检测大鼠的全血黏度。③大鼠血清中PG含量：大鼠腹腔静脉取血，约5 mL,4℃，2 500 r/min,离心15 min,取上清液，置于-80℃冰箱内保存，ELISA试剂盒检测血清中PGE2。④大鼠子宫匀浆NO含量：取双侧子宫以冰冻的生理盐水洗净拭干称重，制成10%的子宫组织匀浆，以 1 800 r/min，低温离心15 min，取上清液，按NO试剂盒说明书的实验步骤严格操作。

1.3 统计方法

各组数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，用（±s）表示计量资料，进行 t检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

①少腹逐瘀汤加减方对寒凝血瘀型大鼠扭体反应次数的影响,与空白对照组相比，其余5组均有扭体反应且扭体次数、扭体评分明显增高（P<0.01)，说明大鼠痛经模型制备成功。与模型组比较，阳性药对照组、中药低剂量组、中药中剂量组（临床剂量）及中药高剂量组的扭体潜伏期明显延长(P<0.05)，扭体次数明显减少(P<0.01)，见表 1。

表1 少腹逐瘀汤加减方对大鼠的扭体反应的影响程度（±s）