大蒜粗提取液对储藏期梨黑斑病的抑菌作用研究

[摘要]以苹果梨为试验材料，研究大蒜粗提取液对梨黑斑病室内毒力测定和梨果实体内损伤接种的影响，结果表明：大蒜粗提取液在200mL/L抑制率高达90.65%，菌落的普遍生长量为7mm，毒力最强EC50为6.304mL/L;大蒜粗提取液对梨黑斑病菌有抑制作用，200mL/L浓度蒜粗提取液抑菌效果最好。

[关键词]梨黑斑病菌;贮藏期梨;大蒜粗提取液

[中图分类号]S436.612   [文献标识码]A

梨黑斑病是由丝孢纲丝孢目链格孢属真菌（Alternaria kikuchiana）引起的梨树主要病害之一，每年对梨生产造成较大危害，同梨黑星病和轮纹病共称为我国梨树的三大病害。采收前果实体内抗病性的存在，因而无症状表现，采收以后，随着贮藏期的延长，果实逐渐衰老，抗性降低，症状便逐渐显现，采前烂果率可达30%～50%，在贮藏后期该病的发病率可达37%。

目前，生产上防治梨黑斑病主要依靠化学药剂。由于长期使用单一杀菌剂会诱导病，致使原物产生抗药性而使得菌效果降低，即使再次喷洒高浓度的农药也不能防治梨黑斑病，反而导致大量的农药留在了植株对人体生命安全没有保障。这就迫使我们运用生物防治的方法抑制梨黑斑病菌成为目标和发展方向。

大蒜均属百合科葱属，研究表明大蒜都是高效的杀虫、抑菌资源。大蒜提取液中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎过程中产生的，主要为大蒜酶酶解蒜氨酸产生的大蒜素和大蒜素进一步分解产生的其他含硫化合物，其成分多达18种以上，且易挥发成分抑菌活性最好。目前，采用大葱、大蒜提取物对梨黑斑病的抑制尚未见报道。

本试验选用不同浓度的大蒜粗提取液，分别通过体内提取物选择对梨黑斑病抑制的最佳浓度，以期为大蒜提取物防治梨黑斑病提供依据，为新型生物防腐剂的开发提供理论依据。

1    材料与方法

1.1    材料

试验所用大蒜均购于菜市场。

供试病原菌为梨贮藏期黑斑病，采自衡水旧城村梨园带病的苹果梨果，贮藏 15 d后取病组织分离得到梨黑斑病菌，经魏景超真菌鉴定手册鉴定为梨黑斑病病菌（Alternaria kikuchiana）。培养基为 PDA 培养基。

1.2    试验方法

蒜研磨液的制备。将从室外购回的大蒜（去外表皮）分别在无菌的环境中，用75%的酒精棉球擦拭其表面，晾干。用灭菌的解剖刀和镊子去除表皮（注意不要污染内部组织），挑取内部组织0.1g，放入灭菌的研钵中加1mL无菌水充分研磨，静置。

1.3    对菌丝生长的抑制活性测定（采用菌丝生长速率法）

在无菌条件下，用移液枪（枪头预先灭菌）分别吸取4、8、12、16、20ml大蒜粗提取液，分别加入100mL的PDA培养基中（PDA培养基制备参照方中达方法进行），震荡摇匀后趁热倒入直径90mm的培养皿内。预先培养梨黑斑病原菌，病原菌的培养参照方中达方法进行。用灭过菌的直径为6mm的打孔器在菌落边缘钻取菌饼，接种于含有杀菌剂的PDA培养基的中央，菌丝面向下，每皿接种1个菌饼，每个处理3次，25℃光照培养箱培养，每天用十字交叉法测量供试真菌菌落生长直径，共培养观察6d的结果。观测每天菌落的生长量曲线和计算菌丝生长抑菌率。对照处理指正常PDA培养基未加入抑菌物质，70%乙醇处理指取70%乙醇1mL加入100mL的PDA培养基中。

1.4    处理已经记录的试验数据

采用Microsoft Excel2010软件处理，以药剂质量浓度的对数为横坐标、抑制率几率值为纵坐标作图，得到毒力回归方程及有效抑制中浓度（EC50）值。

2    結果与分析

2.1    大蒜提取物对病原菌菌丝生长速率的影响

由图1可知，大蒜提取物对梨黑斑病菌菌丝生长均有不同程度地抑制作用，提取物浓度的增大，菌落直径减小，且同种提取物对菌落生长的抑制作用在不同浓度之间存在差异。在不含药剂的PDA平板上，随着观察时间的延长，菌丝长度逐渐增加，在接菌饼24h后菌丝生长达到4mm左右。低浓度植物提取物，即小于40mL/L和80mL/L处理不明显抑制菌丝伸长，菌丝长度与对照变短不明显。随着植物提取物浓度升高120mL/L时，对菌丝生长的抑制率增大，达到30%。结果表明，大蒜粗提取液对菌丝生长速率的影响大，在40mL/L浓度下菌落直径生长约20mm，在最大200mL/L浓度下仅生长约7 mm。

2.2    大蒜提取物对梨黑斑病菌丝的抑制作用

由表1可知，大蒜粗提取液不同的浓度均对梨黑斑病菌的生长有不同的抑制程度。在浓度200 mL/L大蒜粗提取液的抑制率高达90.65%，同时在40、80、120、160 mL/L的质量浓度下，抑制率均大于70%。

2.3    大蒜粗提取液对病原菌丝的毒力测定

由表2可知，大蒜粗提取液对病原菌的毒力最强EC50为6.304 mL/L。

3    结论与讨论

大蒜粗提取液对梨黑斑病的菌落生长、菌丝伸长和梨果实病斑扩展均具有不同程度的抑制作用，随着浓度的增加抑制作用越强。其中，对菌落生长抑菌效果最好的为200 mL/L大蒜粗提取液的抑制率高达90.65%，同时在40、80、120、160 mL/L的质量浓度下，抑制率均大于70 %，对病原菌的毒力最强EC50为6.304 mL/L。大蒜粗提取液体内损伤接种实验抑制率相比离体培养实验的抑制率略低，但随着浓度的增加抑制作用越强，其中200 mL/L的大蒜粗提取液抑菌作用最好，抑菌率为70.97 %，毒力最强EC50为47.319 mL/L。

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