肺肉瘤样癌高表达PD⁃L1、RAB1A及其临床意义

张子涵 张中冕 李静 胡超帆 陈天东

1郑州大学第二附属医院肿瘤科（河南 450014）；2郑州大学第一附属医院病理科（河南 450014）

肺肉瘤样癌（pulmonary sarcomatoid carcinoma，PSC）是一组分化极差，含有肉瘤或肉瘤样分化的非小细胞肺癌（NSCLCs），占所有肺癌的0.1%～0.4%［1-2］。PD⁃L1和PD⁃1是一对免疫抑制性因子，PD1/PD⁃L1通路的激活可使肿瘤细胞逃避机体免疫监视和杀伤，目前针对PD⁃1/PD⁃L1的免疫检查点抑制剂在肺癌治疗中显示出了令人瞩目的成就［3］。RAB1A属于小分子三磷酸鸟苷（GTP）结合蛋白，研究发现RablA在舌癌、结直肠癌和肝癌组织中呈高表达，且能够调控肿瘤细胞的生物学行为［4⁃6］，然而目前有关RablA 与肺癌的关系少见报道。由于肺肉瘤样癌较罕见，国内外研究尚不充分［7］，对放化疗不敏感，预后差，故肺肉瘤样癌的治疗已成为亟待解决的问题，结合目前以PD⁃1抑制剂为主［2］的免疫治疗彰显巨大的疗效，欲通过免疫组化检测PD⁃L1对比普通肺癌，探讨肺肉瘤样癌是否可采取免疫治疗受益，同时对新兴指标RAB1A做进一步探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取郑州大学第一附属医院病理科2012年1月1日至2016年9月1日手术切除或穿刺活检的蜡块标本，经3名有经验的病理医师确诊。肺肉瘤样癌40例，肺鳞癌18例，肺腺癌23例，以肺鳞癌和腺癌为对照组。所有标本病理确诊前均未接受抗肿瘤治疗，且有完整的病例资料。

1.2 检测试剂及方法鼠抗人PD⁃L1单克隆抗体（17A10101）购自北京中杉金桥生物技术开发有限公司，兔抗人RAB1A单克隆抗体（11671⁃1⁃AP）购自武汉三鹰生物技术有限公司，SP免疫组化试剂盒（鼠/兔GK500511A）购自基因科技上海股份有限公司。实验过程严格按说明书进行。PD⁃L1的判定标准为阳性细胞占比≥10%为阳性，＜10%为阴性。参照文献［8］根据染色强度评分判定RAB1A为高表达和低表达，以阳性细胞百分比（1～100）乘以染色强度评分（0～3）得到最终分数（0～300分），以170作为截点判定RAB1A高表达和低表达。

1.3 统计学方法先行不同类型患者的PD⁃L1、RAB1A表达情况差异性比较分析，然后对肺肉瘤样癌的患者进行随访，分析患者的预后情况及影响因素。采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料采用表示，计量资料采用独立样本t检验；计数资料采用频数或率的形式表示，比较采用Pearson卡方检验。患者预后影响因素分析采用Cox回归进行单因素和多因素分析，采用Kaplan⁃Meier法绘制生存曲线。显著性水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同类型组织中PD⁃L1、RAB1A表达情况肺肉瘤样癌组织和肺鳞癌、腺癌组织中的PD⁃L1阳性表达均定位于胞膜（图1），RAB1A高表达定位于胞质（图2）；肺肉瘤样癌、疾病对照两组之间PD⁃L1阳性率、RAB1A高表达率差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 肺肉瘤样癌患者中不同临床特征对PD⁃L1、RAB1A表达影响比较不同PD⁃L1、RAB1A表达情况的年龄和Ki⁃67情况及不同性别、吸烟史、肿块部位、分期的PD⁃L1、RAB1A表达情况，结果显示差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

图1 PD⁃L1阳性表达在肺肉瘤样癌组织及疾病对照组Fig.1 Positive expression of PD⁃L1 in PSC and disease control group

图2 RAB1A高表达在肺肉瘤样癌组织及疾病对照组Fig.2 High expression of RAB1A in PSC and disease control group

表1 不同类型组织中PD⁃L1、RAB1A表达情况比较Tab.1 The expression of PD⁃L1 and RAB1A in different types of tissues 例（%）

表2 不同临床特征对PD⁃L1、RAB1A表达影响Tab.2 Effect of different clinical features on PD⁃L1 and RAB1A expression例（%）

2.3 肺肉瘤样癌患者预后影响因素的单因素分析不同临床特征和PD⁃L1、RAB1A表达对预后的影响分析如表3所示，分析结果显示，对于预后PFS，年龄、分期、RAB1A（P＜ 0.05）为影响预后PFS的影响因素。对于预后OS，分析结果显示年龄、分期、PD⁃L1和RAB1A（P＜ 0.05）为预后OS的影响因素，见表3。

2.4 肺肉瘤样癌患者预后影响因素的多因素分析根据单因素分析结果，将有意义的因素进一步多因素Cox回归，分析结果显示，对于预后PFS，年龄、RAB1A（P＜0.05）为肺肉瘤样癌患者预后PFS的独立影响因素，不同RAB1A表达情况的预后PFS生存曲线如图3所示；对于预后OS，年龄和PD⁃L1（P＜0.05）为肺肉瘤样癌患者OS的独立影响因素，不同PD⁃L1表达情况的预后OS生存曲线如图4所示。

表3 肺肉瘤样癌患者预后影响因素的单因素分析Tab.3 Univariate analysis of prognostic factors in patients with pulmonary sarcomatoid carcinoma

表4 肺肉瘤样癌患者预后影响因素的多因素分析Tab.4 Multivariate analysis of prognostic factors in patients with lung sarcomatoid carcinoma

3 讨论

最近研究［11-12］表明PD⁃1抑制剂无论在一线、二线及以后的NSCLC治疗中均显示出了超过化疗的疗效。用免疫组织化学法检测［3］高表达PD⁃L1的NSCLC患者，PD⁃1/PD⁃L1定向治疗有较好的应答效应［9］。本研究显示，肺肉瘤样癌组织中PD⁃L1的阳性表达率（67.50%）显著高于疾病对照（肺鳞癌、腺癌）组织（P＜0.05），这与之前法国的一项研究相符［10］。进一步多因素分析结果示，PD⁃L1（P=0.006）为肺肉瘤样癌患者OS的独立影响因素，这表明PD⁃L1的表达是肺肉瘤样癌预后不良的预测指标。Poplar研究提示在晚期NSCLC患者中，随着PD⁃L1表达水平的升高，使用Nivolumab治疗的客观缓解率、无进展生存期和总生存期也显著提高［13］；目前关于肺肉瘤样癌患者使用PD⁃1抑制剂疗效的研究较少，本研究对比肺鳞癌、腺癌，提示肺肉瘤样癌中高表达PD⁃L1，结合Poplar研究，提示或许肺肉瘤样癌使用PD⁃1抑制剂获益更大，这为肺肉瘤样癌［4］的治疗提供了新的思路，但缺乏具体直接实验数据支持，仍需大样本前瞻性研究进一步证实。

图3 不同RAB1A表达情况的无进展生存曲线Fig.3 Progression⁃free survival curves for different RAB1A expression

图4 不同PD⁃L1表达情况的总生存曲线Fig.4 Overall survival curves for different PD⁃L1 expression

RAB1A是GTPases的Ras超家族成员之一，能调控肿瘤细胞的生物学行为［4］。本研究显示，RAB1A在肺肉瘤样癌的高表达（70.00%）高于疾病对照组（P＜0.05）。而WANG等［8］的一项研究提示RAB1A的表达与肺癌组织学类型无关，与本研究结果不同，考虑WANG等的研究未纳入肺肉瘤样癌做对比，也可能受肿瘤异质性、样本量差异等因素影响。本研究首次在肺肉瘤样癌中研究RAB1A的表达，进一步多因素分析结果示，RAB1A（P=0.016）为肺肉瘤样癌患者预后PFS的独立影响因素，这表明RAB1A的高表达是肺肉瘤样癌预后不良的预测指标。既往研究提示在结肠癌［5］、肝癌、三阴性乳腺癌中高表达的RAB1A可特异性地激活mTORC1，通过活化mTOR通路促进肿瘤的增殖、侵袭和进展，表明Rab1A可能是个性化治疗的一个有价值的治疗目标［14-15］。但RAB1A作用于肺癌发生发展的机制目前仍不明确，仍需要更进一步的深入研究。

综上所述，肺肉瘤样癌中高表达PD⁃L1、RAB1A作为影响肺肉瘤样癌患者生存的独立影响因素，均可促进肿瘤进展，二者的表达在肺肉瘤样癌的预后预测方面具有重要意义，或许提示肺肉瘤样癌患者是免疫治疗的潜在受益人群。

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