肺腺癌表皮生长因子受体基因突变与血清肿瘤标志物的关系

鄢丽敏 张志勇 闫继东 刘丽云 夏庆安 崔永兴

唐山市工人医院1病理科，2胸外科（河北唐山 063000）

肺癌是我国发病率和死亡率均占首位的恶性肿瘤，肺腺癌是其中最常见的组织学类型，约占肺癌的半数［1-2］。随着对肺腺癌分子生物学机理的深入研究，以表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）为靶点的分子靶向药物在治疗中的作用日渐突显，可相应延长患者无进展生存时间［3］。但由于临床上开展基因检测的医院有限以及昂贵的检测和用药费用，国内仅少部分肺腺癌患者接受EGFR基因检测和靶向治疗。此外，血清肿瘤标志物是预测患者术后复发、转移以及化疗疗效的重要指标［4］。有研究［4-5］显示，肺腺癌患者血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）水平与EGFR突变有关，还有人提出血清CEA水平升高提示患者EGFR抑制剂耐药。但是相关研究的样本量较小，并且多针对手术标本，而大多肺癌患者就诊时已是晚期，丧失手术机会。本文选取我院病理科2015年8月至2017年7月期间行EGFR基因突变及血清肿瘤标志物检测的162例不同标本类型的肺腺癌患者，进一步分析EGFR基因突变与血清标志物CEA、甲胎蛋白（alpha fetal protein，AFP）、神经元特异性烯醇化酶（neuron spe⁃cific enolase，NSE）、糖类抗原（carbohydrate antigen 19⁃9，CA19⁃9）水平之间的关系。从而为肺腺癌患者行EGFR基因检测及对应靶向治疗提供相对优势人群。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2015年8月至2017年7月于河北省唐山市工人医院病理科行EGFR基因突变检测的肺腺癌患者。患者送检病理标本包含手术切除标本、支气管镜活检、肺穿刺活检、远处转移部位取检（例如转移淋巴结穿刺、脑转移癌灶切除标本等）以及胸水。

1.2 EGFR基因检测EGFR基因突变检测在我院病理科分子实验室进行。采用突变扩增阻滞系统（amplification refractory mutation system，ARMS）方法对EGFR基因的18至21号外显子的41个位点进行检测。检测选用美国罗氏（Cobas EGFR Mutation Test V2）检测试剂盒，操作严格按照产品说明书进行，应用阴性、阳性及空白对照进行质控。所有标本检测前均进行石蜡包埋切片，并HE染色，进一步评估细胞含量，确保每例标本细胞含量≥100。

1.3 血清肿瘤标志物检测所有肿瘤标志物检测均采集患者EGFR基因突变检测前清晨空腹静脉血标本。采用电化学发光免疫法检测血清CEA、AFP、NSE、CA19⁃9情况，临床正常值分别为CEA：0 ～ 4.7 ng/mL，CA19⁃9：0 ～ 34 U/mL，AFP：0 ～ 7ng/mL，NSE：0 ～ 29.13 ng/mL。

1.4 统计学分析采用统计学软件SPSS 20.0对数据进行统计学分析。EGFR突变与各项临床资料的关系，EGFR突变与血清肿瘤标志物及CEA浓度梯度之间的关系采用χ2检验，设定P≤0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 EGFR基因突变检测结果共161例肺腺癌患者进行了EGFR基因突变检测，阴性88例，阳性73例，阳性率45.34%。其中21外显子L858R点突变42例（占阳性例数的57.53%），19外显子缺失22例（占阳性例数的30.14%），20外显子插入突变3例，18G719X突变1例，同时含上述两种突变者5例（图1）。不同标本类型之间，EGFR基因突变率差异无统计学意义（P=0.056）（表1）。

2.2 EGFR基因突变与血清肿瘤标志物的关系如表2所示，血清CEA水平高于正常值的患者，EGFR基因突变率较高（χ2=7.207，P=0.007），而其他血清肿瘤标志物，包括CA19⁃9、AFP、NSE在EGFR基因突变阳性与阴性间差异无统计学意义（P＞0.05）。

图1 EGFR基因突变检测结果Fig.1 EGFR mutation status of the 161 studed patients

表1 不同标本类型的EGFR基因突变情况Tab.1 EGFR mutation status in different specimens type（n=161）

表2 EGFR基因突变与血清肿瘤标志物的关系Tab.2 The relationship of the EGFR mutation status and serum tumor markers

2.3 EGFR基因突变与CEA水平梯度的关系如表3所示，依照血清CEA水平，将患者分成CEA ≤ 5 ng/mL、5 ng/mL＜CEA≤20 ng/mL、20 ng/mL＜CEA≤50 ng/mL、CEA＞50 ng/mL四组，EGFR突变率分别为37.96%、43.48%、66.67%、80.00%，且四组之间差别有统计学意义（χ2=12.428，P=0.006）。随着血清肿瘤标志物CEA水平的升高，EGFR基因突变率呈现上升趋势。

表3 EGFR基因突变与CEA水平梯度的关系Tab.3 The relationship of the EGFR mutation status and serum CEA levels

3 讨论

EGFR基因突变是NSCLC靶向治疗的重要靶点之一，美国国立综合癌症网络（National Compre⁃hensive Cancer Network，NCCN）指南提出：对于晚期、复发或转移性肺腺癌患者均行EGFR基因突变检测［6］。EGFR基因突变是一种肿瘤特异性体细胞遗传改变，其突变仅见于肿瘤组织，而在正常组织中则不表达［7］。

根据以往文献［8-9］报道，在亚洲地区，约半数肺腺癌患者存在EGFR基因突变，而最常见的突变类型是19外显子缺失和21外显子L858R点突变［10］。在本项研究中，EGFR突变阳性率为45.34%（73/161），其中21外显子L858R点突变42例，19外显子缺失22例，分别占突变总数的57.53%（42/73）和30.14%（22/73）。与既往文献报道相符。

手术切除样本是进行EGFR基因检测的最佳样本资源，而很多肺腺癌患者在局部取材明确诊断时已失去手术机会，因而无法获取手术样本，因此有必要选择更多的样本类型，来开拓EGFR基因检测途径。与以往研究不同，笔者利用的样本类型包括手术标本、支气管镜、肺穿刺活检标本、转移性肿瘤以及胸水石蜡包埋标本，而不同样本类型之间，EGFR阳性率无显著性差别。由此可见，在手术标本无法获得的时候，活检组织、转移性肿瘤组织以及细胞石蜡包埋标本都可以作为EGFR基因检测的样本来源［11-13］。

CEA是一种酸性糖蛋白，在肺腺癌中表达较多，可以使肿瘤细胞在微循环中集聚，同时具有免疫抑制作用，致使肿瘤转移机会增加［14］。近年来，有文献报道了血清CEA与肺癌组织EGFR基因突变的关系。CAI研究了296例手术肺腺癌患者血清CEA水平与EGFR基因突变之间的关系，发现血清CEA值较高的患者EGFR突变率也较高，当CEA≥20 ng/mL 时，EGFR 的突变率为 65.47%［14］。徐琳等［15］对78例NSCLC患者的EGFR基因突变与CEA表达相关性分析，发现CEA高于正常值时，患者具有更高的EGFR基因突变率，而与CA125、CA19⁃9阳性表达无相关性。张连民等［16］的研究认为CEA水平是预测EGFR基因突变的独立因素，并且随着CEA水平的增高，EGFR基因突变率也逐步上升。本文比较了肺腺癌患者EGFR基因突变与肺癌常用血清肿瘤标志物CEA、CA19⁃9、AFP、NSE之间的关系，发现CEA高于正常值的患者EGFR突变率较高，且随着CEA水平增高，EGFR基因突变率也出现上升的趋势（血清CEA≤5 ng/mL、5＜CEA≤20 ng/mL、20＜CEA≤50 ng/mL及CEA＞50 ng/mL时的EGFR阳性率分别为37.96%、43.48%、66.67%和80.00%）。而其他三项标记物与EGFR突变之间的差异无统计学意义。

日本曾有一项研究对105例应用吉非替尼（EGFR抑制剂）治疗的NSCLC患者进行回顾性分析，发现血清CEA高于正常值的患者对吉非替尼的治疗更敏感，生存期更长［17］。笔者推测这与CEA高于正常水平的患者有较高的EGFR突变率有关。

综上所述，当患者血清CEA水平高于正常值时，EGFR突变的可能性大，并且CEA水平越高，EGFR突变的可能性越大。血清CEA水平增高的患者是EGFR基因检测的优势人群。在手术标本无法获得的情况下，活检组织、转移性肿瘤组织以及细胞石蜡包埋标本都可以作为EGFR基因检测的样本来源。当然，本文病例仅来源于我院，研究数量有限，在以后的工作中，笔者会及时增补数据，同时增加对血液样本的EGFR基因突变检测，做更为全面的研究及分析，为临床研究提供更好的参考数据。

［1］FERLAY J，SOERJOMATARAM I，ERVIK M，et al.Cancer incidence and mortality worldwide：sources，methods and ma⁃jor patterns in GLOBOCAN 2012［J］.Int J Cancer，2015 ，136（5）：E359⁃386.

［2］CHEN W，ZHENG R，BAADE P D，et al.Cancer statistics in China，2015［J］.CA Cancer J Clin，2016，66（2）：115⁃132.

［3］潘莹，龚五星，梁翠微，等.晚期非小细胞肺腺癌维持化疗临床研究［J］.实用医学杂志，2017，33（7）：1130⁃1132.

［4］杨铮雯，邵润霞.胸水和血清CEA、CYFRA⁃21、NSE、SCC⁃Ag测定对肺癌的诊断价值［J］.实用医学杂志，2015，31（20）：3334⁃3337.

［5］GAO Y，SONG P，LI H，et al.Elevated serum CEA levels are associated with the explosive progression of lung adenocarcino⁃ma harboring EGFR mutations［J］.BME Cancer，2017，17（1）：484⁃490.

［6］ZORNOSA C，VANDERGRIFT J L，KALEMKERIAN G P，et al.First⁃Line Systemic therapy practice patterns and concor⁃dance with NCCN guidelines for patients diagnosed with meta⁃static NSCLC treated at NCCN institutions［J］.J Natl Compr Canc Netw，2012，10（7）：847⁃856.

［7］TAKAMOCHI K，OH S，MATSUNAGA T，et al.Prognostic impacts of EGFR mutation status and subtype in patients with surgically resected lung adenocarcinoma［J］.J Thorac Cardio⁃vasc Surg，2017，154（5）：1768⁃1774.

［8］HONG S H，KIM Y S，LEE J E，et al.Clinical characteristics and continued epidermal growth factor receptor（EGFR）tyro⁃sine kinase inhibitor administration in EGFR⁃mutated non⁃small cell lung cancer with skeletal metastasis［J］.Cancer Res Treat.2016，48（3）：1110⁃1119.

［9］TOMOTA M，AYABE T，CHOSA E，et al.Epidermal growth factor receptor mutations in Japanese men with lung adenocarci⁃nomas［J］.Pac J Cancer Prev，2014，15（24）：10627⁃10630.

［10］GAZDAR AF.EGFR mutations in lung cancer：Different fre⁃quencies for different folks［J］.J Thorac Oncol.2014，9（2）：139⁃140.

［11］LINDEMAN N I，CAGLE P T，BEASLEY M B，et al.Molecu⁃lar testing guideline for selection of lung cancer patients for EG⁃FR and ALK tyrosine kinase inhibitors：guideline from the Col⁃lege of American Pathologists，International Association for the Study of Lung Cancer，and Association for Molecular Pathology［J］.J Thorac Oncol.2013，8（7）：823⁃859.

［12］GOTO K，SATOUCHI M，ISHII G，et al.An evaluation study of EGFR mutation tests utilized for non⁃small⁃cell lung cancer in the diagnostic setting［J］.Ann Oncol.2012，23（11）：2914⁃2919.

［13］李志阳，张志杰，谭小军，等.非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变的异质性［J］.实用医学杂志，2017，33（6）：983⁃985.

［14］CAI Z.Relationship between serum carcinoembryonic antigen level and epidermal growth factor receptor mutations with the in⁃fluence on the prognosis of non⁃small⁃cell lung cancer patients［J］.Onco Targets Ther，2016，27（9）：3873⁃3878.

［15］徐琳，郑明峰，张稷，等.EGFR突变基因检测与肿瘤标志物相关性研究［J］.医学研究杂志，2011，40（8）：79⁃81.

［16］张连民，郝李刚，张华，等.血清癌胚抗原与非小细胞肺癌患者EGFR突变的关系及其对预后的影响［J］.中国肿瘤临床，2014，41（17）：1075⁃1079.

［17］OKAMOTO T，NAKAMURA T，IKEDA J，et al.Serum car⁃cinoembryonic antigen as a predictive marker for sensitivity to gefitinid in advanced non⁃small cell lung cancer［J］.Eur J Can⁃cer，2005，41（9）：1286⁃1290.