雌激素受体β表达评估老年直肠癌术后放化疗疗效的价值

吴 阳 居 培 余红民

(徐州医学院附属医院放疗科，江苏 徐州 221002)

结直肠癌好发于中老年人群，是我国常见消化系统恶性肿瘤之一〔1〕。近年来,随着人民生活水平的不断提高,饮食习惯和饮食结构的改变及人口的老龄化,我国结直肠癌的发病率和死亡率均保持上升趋势，且大多数患者发现时已属中晚期〔2〕。在结直肠癌构成中，直肠癌约占60%〔3〕。术后放化疗为Ⅱ ～Ⅲ期直肠癌的标准治疗手段〔4〕。雌激素受体(ER)有2种形式：ERα和ERβ。在结直肠癌细胞株中ERα亚型不表达,而ERβ亚型高表达〔5〕,ERβ在结直肠癌中即使少量表达，也能起到保护效应，而ERα的生理作用与ERβ相反〔6〕。本文探讨ERβ表达预测老年Ⅱ ～Ⅲ期直肠癌术后放化疗疗效的价值。

1 资料及方法

1.1一般资料 对2008年10月至2012年2月于徐州医学院附属医院放疗科接受序贯放化疗的54例Ⅱ、Ⅲ期直肠癌根治术(Miles或Dixon)术后患者的临床资料进行回顾性分析，年龄60～80(中位68)岁，男30例，女24例。

1.2术后放化疗方案 2组患者术后辅助治疗开始的时间为术后3～8 w，放疗采用调强放疗，体膜固定，经螺旋CT 定位机5 mm 层厚连续扫描，将影像学信息数据传输至Eclipes 治疗计划系统，靶区范围根据直肠癌靶区勾画指南〔7〕，临床靶区包括直肠系膜区加吻合口加骶前加髂内血管周围淋巴引流区，计划靶区为临床靶体积外放1 cm。如为Dixon 保肛手术后，则下界在闭孔下缘；如为Miles 术，则下界在原肛门口水平。照射总剂量为45～50 Gy/25～28次/5～5.5 w，每次1.8～2.0 Gy。辅助化疗方案分别按照标准XELOX 和FOLFOX 方案进行，周期数4～6个。

1.3免疫组化法检测ERβ表达 石蜡切片，常规脱蜡至水。蒸馏水洗涤，5 min×3次。3%过氧化氢(甲醇配)室温10 min，以阻断内源性氧化酶。再蒸馏水洗涤，5 min×3次。置于0.01 mol/L柠檬酸缓冲液(pH 6.0)中微波炉高火预热3 min，低火保温5 min，共2次，自然冷却，作抗原修复。TBS洗涤，5 min×3次。正常小牛血清1∶20，37℃水浴20 min，以阻断非特异性结合。仔细吸干血清，滴加一抗，抗体稀释度均为1∶50，不加一抗为阴性对照。37℃水浴1 h。TBS 洗涤，5 min×3次。滴加EnVision试剂,37℃水浴1 h。TBS 洗涤,5 min×3次。二氨基联苯胺(DAB)室温显色10 min或在显微镜下观察至棕黄色反应后终止。流水洗10 min。苏木素复染细胞核，盐酸乙醇分化、蓝化。递增梯度乙醇脱水1 min，二甲苯1 min，常规树脂封片。阳性信号:癌细胞的细胞质和(或)细胞核出现棕黄色颗粒。阳性判断标准：光镜下用10×10的视野观察整张切片，如阳性癌细胞数占全部癌细胞总数的10%以上，则判为阳性。10.0%～50.0%为(+)， 50.1%～75.0%为()，75.0%以上为()。

1.4监测及随访 入院后完善相关理化检查，如血常规、肝肾功、心电图、胸腹部及盆腔MRI/CT等，评估患者病情及放化疗耐受性。每周行血常规、肝肾功等血液学检查，监测并及时处理放疗期间不良反应。治疗结束后随访：全部病例进行3年随访，时间从手术开始起，截至2015年3月1日。采用电话、信访及门诊随诊等方式进行随访，随访终点为死亡。随访内容为患者的一般情况、有无毒副反应发生、进行过何种治疗、有无肿瘤局部复发、复发的时间及部位、有无远处转移、远处转移的时间及部位，复发转移后的治疗、生存情况及死亡时间、死亡原因等。其中1例失访，随访率98.1%。

1.5观察指标 总生存率(OS)、无病生存率(DFS)。不良反应发生率(%)=至少发生一个不良反应的例数/评价安全性人数×100%。

1.6统计学方法 采用SPSS17.0软件进行Mamm-WhiteyU及χ2检验。应用Kaplan-Meier生存曲线和Logranktest检验比较两组OS及DFS。

2 结 果

2.1ERβ不同表达组临床资料比较 ERβ阳性组与ERβ阴性组性别、年龄、手术方式、病理类型、肿瘤分化程度及TNM分期差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2ERβ不同表达组不良反应发生率比较 ERβ阳性组与ERβ阴性组中放射性直肠炎、放射性膀胱炎、骨髓抑制和胃肠道反应发生率比较差异无统计学意义(P<0.05)，见表2。治疗期间，不良反应经对症处理后均可以逐渐恢复，不影响治疗，无不良反应相关死亡。

表1 ERβ不同表达组临床资料比较(n)

表2 ERβ不同表达组不良反应发生率比较(n)

2.3疗效评价 ERβ阳性组3年OS(86.1%)与ERβ阴性组差异无统计学意义(77.8%，χ2=0.390，P=0.532)，但二条生存曲线有分开的趋势，其结果仍需进一步随访，见图1。ERβ阳性组3年DFS(72.2%)与ERβ阴性组差异无统计学意义(55.6%，χ2=2.000，P=0.157)。ERβ阳性组3年局部复发率(16.7%)较ERβ阴性组明显降低，差异有统计学意义(33.3%，χ2=5.120，P=0.024)。ERβ阳性组3年远处转移率(22.2%)较ERβ阴性组明显降低(38.9%)，差异有统计学意义(χ2=4.738,P=0.030)。

图1 两组总生存率的比较

3 讨 论

ERα和ERβ在多途径发挥着相反的作用：ERα在促进生长和增殖方面起着重要作用；而ERβ起着抗增殖、分化和促进凋亡的作用〔8〕。研究显示ERβ在抑制肿瘤方面起着十分重要的作用，而干扰ERα信号通路却显示无作用，例如，ERβ对鼠结肠癌的保护作用〔9〕；ERβ能够激活结肠癌细胞系中抗炎信号网络的作用〔10〕；ERβ在肿瘤体积比较大和分期比较晚的病人中的表达明显降低〔11〕等。除此之外，ERβ可作为发生结直肠癌危险的潜在生物标志物〔12〕，也可作为治疗有效性的监测指标，例如有报道称激素治疗对ERβ阳性的结直肠癌患者有效，而对ERβ阴性的患者却无效〔13,14〕。本实验结果显示，ERβ可作为预测老年直肠癌术后3年局部复发率和远处转移率的有效指标，即ERβ可作为预测老年直肠癌术后放化疗疗效的指标，可改善患者的预后。

1冯 莉，王贵英.老年晚期结直肠癌患者肿瘤组织胸苷酸合成酶表达与氟尿嘧啶敏感性、副反应及预后的关系〔J〕.中国老年学杂志,2015;35(6):1474-6.

2何振华,张 森.结直肠癌NCCN、NICE指南及中国卫生部诊疗规范的比较〔J〕.世界华人消化杂志,2013;21(14):1297-302.

3Wong RK,Berry S,Spithorff K,etal.Preoperative or postoperative therapy for stageⅡor Ⅲ rectal cancer:all updated practice guideline〔J〕.Clin Oncol(R Coll Radiol),2010;22(4):265-71.

4任 骅，金 晶，王 鑫，等.术前同步放化疗是直肠癌标准治疗模式〔J〕.实用肿瘤杂志,2013;28(1):20-3.

5朱 冰,张传珉.雌激素受体和孕激素受体与结直肠癌预后关系的研究进展〔J〕.医学综述,2008;14(21):3236-8.

6Galluzzo P,Caiazza F,Moreno S,etal.Role of ERbeta palmitoylation in the inhibition of human colon cancer cell proliferation〔J〕.Endocr Relat Cancer,2007;14(1):153-67.

7Roels S,Duthoy W,Haustermans K,etal.Definition and delineation of the clinical target volume for rectal cancer〔J〕.Int J Radiat Oncol Biol Phys,2006;65(4):1129-42.

8Dey P,Barros RP,Warner M,etal.Insight into the mechanisms of action of estrogen receptor β in the breast,prostate,colon,and CNS〔J〕.J Mol Endocrinol,2013;51(3):T61-74.

9Saleiro D,Murillo G,Lubahn DB,etal.Enhanced induction of mucin-depleted foci in estrogen receptor {beta} knockout mice〔J〕.Cancer Prev Res(Phila),2010;3(9):1198-204.

10Edvardsson K,Ström A,Jonsson P,etal.Estrogen receptor β induces antiinflammatory and antitumorigenic networks in colon cancer cells〔J〕.Mol Endocrinol,2011;25(6):969-79.

11Rudolph A,Toth C,Hoffmeister M,etal.Expression of oestrogen receptor β and prognosis of colorectal cancer〔J〕.Br J Cancer,2012;107(5):831-9.

12Principi M,Di Leo A,Pricci M,etal.Phytoestrogens/insoluble fibers and colonic estrogen receptor β: randomized,double-blind,placebo-controlled study〔J〕.World J Gastroenterol,2013;19(27):4325-33.

13Rudolph A,Toth C,Hoffmeister M,etal.Colorectal cancer risk associated with hormone use varies by expression of estrogen receptor-β〔J〕.Cancer Res,2013;73(11):3306-15.

14Caiazza F,Ryan EJ,Doherty G,etal.Estrogen receptors and their implications in colorectal carcinogenesis〔J〕.Front Oncol,2015;5:19.