免疫不孕症患者外周血Th1、Th2细胞因子与血清AhCGAb、AsAb、AoAb相关抗体的关系

刘亚敏，苏锦敏

(海南省三亚市人民医院妇产科 572000)

近年来，随着社会生活节奏的加快及环境质量的下降，我国已婚夫妇不孕不育症的发生率越来越高。不孕不育病因十分复杂，任何影响排卵、受精、着床的因素都会导致该病的发生。排卵障碍，输卵管疾病，免疫紊乱，骨盆粘连/子宫内膜异位症是引起女性不孕的主要原因。其中免疫因素导致不孕的发病率近年来呈急剧上升趋势，不孕症中大约有20%为免疫因素所造成[1]。已知特异性T辅助细胞(Th)及其细胞因子参与不育阶段，而不孕症与抗精子抗体(AsAb)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCGAb)、抗卵巢抗体(AoAb)也有一定的关系,是造成不孕症的重要免疫因素，但是Th细胞因子与相关抗体的关系却很少有人研究[2-3]。因此，本研究通过检测免疫不孕症患者外周血中Th细胞因子及AhCGAb、AsAb、AoAb抗体表达水平，探讨Th细胞因子与AhCGAb、AsAb、AoAb抗体的关系，为临床免疫不孕症的诊治提供新的临床依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年2月至2015年12月在本院就诊的58例免疫不孕症患者作为试验组。所有入选患者均经过至少12个月没有避孕的正常性生活而未妊娠(WHO标准)，同时排除炎症及其他器质性病变造成的不孕。患者年龄27～42岁，平均(33.5±2.64)岁。同时期选取60例孕育功能正常的健康妇女为对照组，年龄26～40岁，平均(31.2±2.17)岁。两组研究对象在研究前3个月内均未服用过性激素类药物，而且无其他自身免疫性疾病。两组研究对象一般资料进行比较，差异无统计学意义(P>0.05)。试验前，所有受试者均签署了知情同意书。

1.2方法

1.2.1采集标准 所有受试对象在月经第2天早晨空腹时进行肘静脉采血5 mL。血液标本在常温下静置30 min，3 000 r/min离心10 min，转移血清，冻存于-20 ℃冰箱待测。

1.2.2细胞因子检测 采用酶联吸附免疫测定(ELISA)对各组血清中细胞因子进行检测，试剂盒购于长沙安迪生物科技有限公司，试验操作均严格按说明书进行。

1.2.3自身抗体检测 AhCGAb、AsAb、AoAb等抗体也采用ELISA进行检测，抗体检测试剂盒购于浙江伊利康生物技术有限公司，试验操作均严格按试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1细胞因子检测结果 与对照组相比，试验组Th1型细胞因子白细胞介素(IL)-2、IL-21、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)；Th2型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10水平也高于对照组,但仅有IL-4和IL-6指标差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组血清中细胞因子含量比较

表2 两组血清AhCGAb、AsAb、AoAb相关抗体阳性表达率[n(%)]

2.2抗体检测结果 抗体结果显示，试验组各相关抗体阳性率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

2.3Th1和Th2细胞因子与AhCGAb、AsAb、AoAb抗体的相关性分析 将试验组血清中各细胞因子的水平与AhCGAb、AsAb、AoAb抗体阳性表达的蛋白量分别进行相关性分析。结果显示，IL-21与AhCGAb、AsAb、AoAb的产生呈正相关(r=0.612、0.603、0.726，P<0.05);IL-6与AhCGAb、AsAb、AoAb的产生呈正相关(r=0.426、0.479、0.616，P<0.05)。TNF-α与AoAb的产生呈负相关(r=-0.544，P<0.05)，见表3。

表3 细胞因子水平与AhCGAb、AsAb、AoAb抗体相关性[r(P)]

3 讨 论

Th根据其分泌的细胞因子不同可分为Th1和Th2两种亚群，Th1细胞主要分泌IL-2、IL-21、IFN-γ、TNF-α；Th2细胞主要分泌IL-4、IL-6和IL-10。Th1型细胞因子主要介导细胞免疫，参与炎性反应。Th2型细胞因子主要介导体液免疫应答，辅助B细胞增殖分化。

Th1/Th2 的平衡对于维持正常的妊娠过程起着重要的作用，如果平衡被打破，比值变化偏向Th1时，Th1介导的细胞免疫反应增强，巨噬细胞活化，可能对滋养层细胞产生细胞毒作用而形成免疫损伤，影响胚胎着床及发育，甚至会引起妊娠丢失[4-5]。CHAOUAT等[6]研究显示，将IL-2、IFN-γ和TNF-α注入孕鼠体内，孕鼠的妊娠过程将会被终止，说明Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ和TNF-α对妊娠组织而言具有细胞毒效应。体外试验证明IFN-γ能够抑制滋养层的生长，和TNF-α协同作用，还可抑制胚胎的发育[7]。TNF-α和IL-2共同作用会促使NK样细胞转化成LAK细胞，也会损害胎盘组织[8]。IL-21能通过STAT3通路引起B细胞分化成浆细胞，产生大量自身抗体，引起自身免疫疾病，对女性来说，常会导致免疫不孕症[9]。Th2型细胞因子对胎儿的生长发育有一定的正向促进作用。有研究表明，妊娠成功的母胎界面以Th2型细胞因子表现为主，Th2型细胞可维持母胎界面的免疫耐受[10]。IL-4对细胞的生长、分化有一定的调节作用，能够抑制NK细胞黏附于血管内皮细胞，并抑制其进一步的活化[11]。IL-6可以抑制Th1细胞和调节性T细胞的产生和分化，在浆细胞的产生及自身抗体的分泌过程中也起重要作用。IL-10则可以通过选择性抑制IL-6、IL-2、TNF-α等细胞因子的合成，直接抑制免疫应答。本研究结果显示，Th1型细胞因子IL-2、IL-21、IFN-γ、TNF-α水平均明显高于对照组(P<0.05)，而Th2型细胞因子仅有IL-4、IL-6水平高于对照组，IL-10增高不明显，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究发现，虽然与对照组相比，Th1和Th2型细胞因子水平都有所增加，但是Th1型细胞因子水平差异更为显著。正是因为Th1型细胞因子的过度表达，导致Th1/Th2 比例失衡，进而引起一系列异常免疫反应，影响胚胎着床及发育，引起妊娠损失，进而导致不孕，这与安利峰等[12]研究结果一致。

免疫不孕症主要是由免疫因素引起，Th细胞功能的紊乱也会引起B细胞抗体分泌的异常。近年来，大量研究表明，不孕症与AhCGAb、AsAb、AoAb有一定关系,是造成不孕症的重要免疫因素。AhCGAb具有阻断hCG的作用，导致妊娠不能维持，使得受精卵不能着床，引起RSA或胚胎停止发育等不良妊娠结局。AsAb是最早被肯定的抗生育抗体，它不仅能干扰精子的代谢和获能，而且还影响受精卵着床和胚胎发育过程，最后导致不孕和流产的发生。卵巢组织成分，如卵母细胞、颗粒细胞和黄体细胞等，会在感染、创伤或手术等情况下刺激机体产生AoAb,从而引起自身免疫反应，导致孕酮、孕激素合成分泌不足，影响卵泡发育，加快卵巢闭锁，引起不良妊娠结局。本研究结果显示，试验组AhCGAb、AsAb、AoAb等抗体阳性率明显高于对照组(P<0.05)，说明3种抗体均参加了免疫性不孕的病理过程，且在生理期呈高表达，因此3种抗体也可以用来作为新的诊断指标来筛选免疫不孕症。

另外，本研究还对Th1和Th2细胞因子与AhCGAb、AsAb、AoAb等抗体做了相关性分析，结果显示IL-21和IL-6与AhCGAb、AsAb、AoAb的产生均呈正相关，这说明IL-21和IL-6可能通过促进B淋巴细胞增殖分化为浆细胞进而分泌AhCGAb、AsAb、AoAb抗体来发挥作用，而IL-6则可能是通过诱导IL-21的产生来促进T细胞辅助B细胞的能力，进而促进B细胞产生抗体。此外，研究结果还显示TNF-α与AoAb的产生呈负相关，说明TNF-α可能在AoAb的产生过程中发挥着相反的作用，至于具体原因还有待进一步研究。

综上所述，免疫不孕症的发生与Th1和Th2型细胞因子水平变化及AhCGAb、AsAb、AoAb等抗体的高表达有着密切的关系，但是具体机制还有待进一步研究。从另一方面来说，免疫不孕症患者血清中AhCGAb、AsAb、AoAb的高表达还提示，这3种抗体可以用来作为筛选免疫不孕症新的诊断指标。

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