某国产双向血培养瓶细菌培养分离效果的评价

向时庆，杨 媚

(中国人民解放军陆军军医大学第一附属医院检验科，重庆 400038)

现代检验医学体系中，微生物检验的重要性在临床诊断、治疗中日益凸显[1]。近年来血培养的方法学发展很快，各种自动化的血培养仪器系统大量出现，我国也大量引进了国外血培养系统，这对推动我国检验医学的快速发展和进步起到了很大的作用[2]。但我国应该在国外先进经验基础上形成符合我国实际情况的现代检验医学体系。目前，血液培养已成为最常见和最重要的临床实验[3]，但国内血培养在数量上与国外还存在一定差距，主要在于临床医生对该项工作的认识有一定差距[4]，还有一个重要原因是国外血培养系统价格昂贵，在不少医院很难开展，为此性价比较高相应国产试剂也成为国内厂家追求和发展的趋势。某国产双向血培养瓶在这种情况下应运而生，并获得国家专利，为评价该产品性能，本研究通过以下3个方面进行检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源 收集2016年4-6月本院大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、肺炎链球菌ATCC49619、流感嗜血杆菌ATCC49207、白假丝酵母菌ATCC18804、铜绿假单胞菌ATCC27853，以及临床血液、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等无菌体液标本150例。

1.1.2血培养瓶 某国产双向血培养瓶(重庆庞通医疗器械有限公司)，BacT/ALERT需氧瓶(法国生物梅里埃)，均为有效期产品。

1.1.3抗菌药物 头孢噻肟(华北制药凯瑞特制药有限公司，国药准字H10980277)，庆大霉素(佳木斯第二制药厂，国药准字H23021304)。

1.2方法

1.2.1血培养瓶灵敏度检测 实验方法参照文献建立[1-2，5-6]：用无菌生理盐水，配制含0.5麦氏细菌悬液[细菌相当于(1～2)×108CFU/mL，其中酵母菌为(1～2)×106CFU/mL]，倍比稀释，即取0.2 mL菌液加入1.8 mL生理盐水中配成107CFU/mL细菌悬液，以此类推，将大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、肺炎链球菌ATCC49619、流感嗜血杆菌ATCC49207配制为108、107、106、105、104、103、102、10共8个含菌梯度，各取 5个梯度即106、104、103、102、10菌液1 mL，分别接种于血培养瓶中；将白假丝酵母菌ATCC18804配制为106、105、104、103、102、10共6个含菌梯度，取 4个梯度即104、103、102、10菌液1 mL,分别接种于血培养瓶中；同时将剩余菌液定量接种于平板上，观察是否有细菌生长。置于CO2孵箱中35～37 ℃恒温培养，常规培养5 d，工作时间每隔2 h轻轻地旋转、摇动培养瓶，并注意观察固相指示系统及瓶中培养液颜色的变化。

1.2.2抗菌药物吸附实验 以头孢噻肟和庆大霉素为代表进行了实验分析。

1.2.2.1抗菌药物稀释液的制备 头孢噻肟钠稀释液：取0.5 g头孢噻肟溶解在5 mL生理盐水中,再稀释成 5 120 μg/mL的储存液；然后再用MH肉汤稀释储存液，终浓度为256 μg/mL作为倍比稀释的第1稀释度。

庆大霉素稀释液：取20 mg/mL注射液1 mL，再加生理盐水2.9 mL配制成5 120 μg/ mL的储存液；用MH肉汤稀释储存液形成终浓度为16 μg/ mL，作为倍比稀释的第1稀释度。

1.2.2.2制备经过吸附处理抗菌药物稀释液作为测试组 取上述头孢噻肟储存液(5 120 μg/mL)、庆大霉素贮存液(5 120 μg/mL)2 mL，加入78 mL的MH肉汤中，溶液中混合有12 mL无菌大孔树脂，室温下使其吸附处理4 h。

1.2.2.3铜绿假单孢菌在上述2种稀释液中MIC的测定 测定铜绿假单孢菌ATCC27853对处理与未处理头孢噻肟与庆大霉素的MIC值，未处理与处理抗菌药物MIC值的差异为吸附剂吸附抗菌药物值。 根据美国临床和实验室标准协会(CLSI) M07-A8标准文件采用微量肉汤稀释法，每试管中的肉汤应为1 mL，将试验分为2组，未经树脂吸附处理过的药物溶液为对照组，而经过树脂吸附处理过的药物溶液为测试组，每组均设列3小组。抗菌药物用MH肉汤稀释，形成浓度梯度系列。设计头孢噻肟浓度范围为4～256 μg/mL，庆大霉素浓度范围0.5～8.0 μg/mL。 孵育：35 ℃，空气，20～24 h。MIC是肉眼观察试管中的细菌生长完全被抑制时的最低抗微生物药物浓度。

1.2.3临床标本对比实验 将临床血液标本、胸腔积液、腹腔积液、脑脊液等无菌标本同时注入梅里埃和庞通血培养瓶，常规培养，记录生长情况、生长时间，对比分离细菌种类。采用法国生物梅里埃公司的API系统进行鉴定。

2 结 果

2.1灵敏度及检出时间 标准菌株系列稀释后接种到某国产双向血培养瓶中，对普通细菌检测灵敏度：大肠埃希菌、葡萄球菌均为102CFU/mL(20 h)；对苛养菌检测灵敏度：肺炎链球菌为104CFU /mL(20 h)、103CFU/mL(36 h)、10 CFU/mL(72 h)，流感嗜血杆菌102CFU /mL(20 h)；对真菌检测灵敏度：白假丝酵母菌10 CFU /mL(48 h)。见表1。

表1 某国产双向血培养瓶对标准菌株检测的灵敏度

注：+表示生长，-表示未生长，(n)表示生长的时间

2.2抗菌药物吸附能力 头孢噻肟对照组的MIC为8 μg/mL，测试组MIC为128 μg/mL，其差值为120 μg/mL，亦即每毫升溶液中头孢噻肟被吸附去120 μg。每毫升 A号树脂吸附头孢噻肟120 μg×80 mL÷12 mL=800 μg。庆大霉素对照组的MIC为1 μg/mL，测试组MIC为6 μg/mL，其差值为5 μg/mL，亦即每毫升溶液中庆大霉素被吸附去5 μg。每毫升B号树脂吸附头孢噻肟为5 μg×80 mL÷12 mL=33.33 μg。

2.3两种培养瓶阳性检出率比较 Bect/Alert 血培养瓶和国产双向血培养瓶37例均检出病原菌，阳性率为20.67%，其中30例为单一菌株感染，7例为复合感染。

2.4某国产双向血培养系统检出病原菌的时间统计 某国产双向血培养瓶20 h内阳性检出率为86．49%(32/37)，48、72 h阳性检出率分为94.60%(35/37)、100%(37/37)。

2.5细菌检出种类 150份血标本中共检出病原菌49株、19种，见表2。

表2 某国产双向血培养瓶分离菌种及株数(n)

3 讨 论

目前，临床常见的血培养检测系统是BacT/Alert系统和Fabactec Plus系统，有助于血液感染的实验室诊断快速而准确，有助于临床正确和合理使用抗菌药物[4]。但是这些产品都来源于国外，需要高昂的投入，血培养瓶为一次性使用品，其价格也较为昂贵，其在国内的使用也受到一定程度的限制，尤其是在一些基层医院表现得尤为突出。

某国产双向血培养系统采用带有琼脂斜面的固液双向血培养瓶形式，将传统二步法合二为一，不仅可缩短检菌时间、简化操作和减少人为污染，而且较人工培养瓶提高了检测灵敏度。通过实验分析发现：大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌浓度为102CFU/mL时，20 h便可以被检测出；肺炎链球菌浓度为102CFU/mL时，48 h可以被检测出；当10 CFU/mL时，72 h也可以被检测出；流感嗜血杆菌浓度为102CFU/mL时，20 h便可以被检测出；白色念珠菌浓度为10 CFU/mL时，48 h便可以被检测出。该国产血培养系统是利用微生物在生长过程中产生气体，当产生的气体到达一定压力时就将含有细菌的培养液压到固相系统，细菌就在固体培养基上生长[2]。与BacT/Alert血培养系统相比，该国产血培养系统虽然没有灵敏的检测系统，故阳性报警时间长于BacT/Alert血培养系统，但是只要有微生物生长，20～48 h可以在固体培养基上得到菌体，有利于进一步做鉴定与药敏，相应大大地缩短了时间。

当血液中抗菌药物的含量到达一定浓度可以抑制细菌的生长，尤其是大量使用高级抗菌药物的患者，其血培养可能由此而出现假阴性，中和血液标本中抗菌药物有利于阳性率的提高[7-11]。庞通血培养瓶中含有能吸附抗菌药物的树脂。通过本实验分析也发现每毫升树脂吸附头孢噻肟、庆大霉素分别为800.00、33.33 μg，这也有利于血标本阳性率的提高。

众所周知，血培养出现阳性时问及阳性率与抽血量、血中所含菌量、细菌种类及培养基营养成分有关[12-13]。某国产血培养瓶大容量，80 mL培养液。按照40 mL培养液允许抽血量8～10 mL，那么80 mL可以抽血16～20 mL，有利于阳性率的提高。庞通双相血培养瓶富含多种生长因子，完整的氨基酸系列和各种维生素，不仅能促进血液中的一般细菌快速繁殖，更能支持各种营养要求较高的细菌的生长。庞通血培养系统对150份临床标本进行检测，其阳性率为20.67%，与BacT/Alert血培养系统一致，无显著性差异，而且培养出真菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌等苛养菌。150份标本培养出49株、19种细菌(含真菌)，其中30份标本培养出单一菌株，7份标本培养出复合菌。37份阳性标本，24 h内为阳性者32份，占总阳性标本的86.49%，48 h达到94.60%。

由于全自动培养仪和进口血培养瓶价格昂贵，基层医院收费较低，无条件使用，而手工自配血培养瓶营养成分不足，无法及时、准确地为临床服务。庞通双向血培养系统价格适中、操作简便、检出率高、检测时间短，广泛适用于多种细菌的生长，为医院感染的诊断、监控、治疗和其他方面的临床应用提供了良好的条件，为暂无仪器配备的医院提高细菌阳性检出率提供了一种简便、可行的解决途径，尤其适合基层医院使用。

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