妊娠糖尿病患者血清中RBP4及NF-κB活性的变化及临床意义

谭冠文，赵江瑞，孙抗

（1.信阳职业技术学院，河南 信阳 464000；2.信阳职业技术学院附属医院，河南 信阳 464000）

妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）是指在妊娠期间首次发生或发现的任何程度的糖耐量受损；属于妊娠期常见但严重的并发症，不仅威胁到母体健康，还会大大增加婴儿成年后心血管疾病的发病风险[1-3]。但是目前GDM的发病机制尚未完全明确，研究显示GDM可能与环境、饮食结构和遗传因素相关，且目前胰岛素信号通路异常所致的胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）被认为是GDM发病的主要机制之一[4-6]。此外，炎症反应在生理性IR向GDM发展的过程中起至关重要的作用[7]。视黄醇结合蛋白4（retinol binding protein 4，RBP4）是一种脂肪细胞因子，广泛分布于人体血清、尿液及脑脊液中[8]。研究显示[8-9]，RBP4可降低胰岛素敏感性、加重炎症反应，目前已可作为一种血清学指标，进行心血管疾病的早期筛查及检测，但其在妊娠糖尿病中作用并没有明确系统的研究。蛋白质核因子-κB（nuclear factorκB，NF-κB）同样作为一种炎症反应因子，可参与调控多种基因的表达，进而影响相关疾病的病理生理进程[10-11]。本研究检测妊娠糖尿病患者血清中RBP4、NF-κB、空腹血糖（fasting blood glucose，FBG）、空腹血胰岛素（fasting insulin，Fins）等指标的变化，并分析其与稳态模式评估胰岛素抵抗（HOMA-IR）之间的相关性，为妊娠糖尿病的早期诊疗提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 病例纳入标准按照2010年国际妊娠合并糖尿病研究组织推荐的GDM诊断标准[12]，即空腹血糖、进糖后1 h、进糖后2 h的上限分别为5.1、10.0和8.5 mmol/L。所有孕妇均行口服葡萄糖耐量实验：实验中有2项或2项以上≥上限值，则诊断为GDM；实验结果阴性者为正常（标准）葡萄糖耐量。所有孕妇均单胎首次妊娠。

1.1.2 排除标准妊娠前有糖尿病、高血压及其他内外科慢性病病史；合并其他高血压疾病或内分泌代谢性疾病者，如：妊娠高血压、甲状腺功能亢进（甲亢）及皮质醇增多症等；有服用特殊药物及影响糖代谢药物史的患者；有烟酒等不良嗜好者。

1.2 临床资料

依据纳入及排除标准，选取2014年12月-2016年12月在本院产科产检的104例孕妇，同时依据其糖耐量检测结果分为妊娠糖尿病（gestational diabetes mellitus group ，GDM）组和妊娠非糖尿病（normal glucose tolerance pregnancy，NGT）组。其中，GDM组共46例。年龄25～28岁，平均（28.92±1.9）岁；孕周20～28周，平均（26.16±1.26）周。NGT组共58例。年龄23～29岁，平均（28.31±2.14）岁；孕周20～28周，平均（26.43±1.51）周。收集并录入研究对象的一般临床资料，以供后续实验分析。本研究通过医院伦理委员会审核备案，且所有入选对象均签署知情通知书。

1.3 主要试剂

NF-κB活性检测试剂盒（购自上海基尔顿生物科技有限公司），RBP4定量检测试剂盒（购自美国R&D公司）。

1.4 ELISA测定RBP4水平及NF-κB活性

清晨空腹状态下，采集研究对象外周静脉血5 ml，离心（2 500 r/min）10 min分离血清，并将血清置入-20℃冰箱中冷冻保存备用。RBP4水平及NF-κB活性采用ELISA检测，依据试剂盒说明书进行操作，简述如下：待测样品及酶标板取出后室温平衡30 min，标记后向相应微孔中加入标准品或待测样品，温育30 min后洗板5次；加HRP-标记的抗体，温育30 min后洗板5次；加底物37℃避光孵育15 min显色；加终止液并用酶标仪检测各孔在450 nm的光密度值。

1.5 IR评估

采用葡萄糖氧化酶法检测FBG水平，采用放射免疫法测定Fins的水平，而后采用HOMA-IR进行IR评估。计算公式：HOMA-IR=Fins×FBG/22.5。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，采用t检验，相关性分析采用Pearson相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇一般临床资料比较

两组孕妇的一般临床资料见附表，统计学分析显示：GDM组与NGT组孕妇在年龄、孕期、体重指数（body mass index，BMI）、舒张压（diastolic blood pressure，DBP）及收缩压（systolic blood pressure，SBP）等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见附表。

附表 两组一般临床资料 （±s）

附表 两组一般临床资料 （±s）

组别 年龄/岁 妊娠/周 BMI/（kg/m2） SBP/mmHg DBP/mmHg NGT 28.31±2.14 26.43±1.51 21.92±2.11 128.7±9.62 79.77±9.01 GDM 28.92±1.9 26.16±1.26 23.18±2.63 132.43±10.2 81.32±7.68 t值 0.385 0.236 0.431 0.514 0.352 P值 0.891 0.934 0.692 0.418 0.904

2.2 两组血清糖代谢情况及HOMA-IR值比较

GDM组患者血清中FBG的含量（6.92±1.02）mmol/L高于NGT组（4.20±0.55）mmol/L（t=2.789，P=0.007）；而GDM组和NGT组孕妇血清中Fins的含量分别为（11.98±1.67）和（10.89±1.58）mIU/L，差异无统计学意义（t=0.562，P=0.389）；此外GDM组患者的HOMA-IR值（3.74±0.96）高于NGT组的（2.04±0.23）（t=2.104，P=0.012），呈明显的胰岛素抵抗。

2.3 血清中RBP4的水平及其与HOMA-IR的相关性分析

GDM组患者血清中RBP4的水平（70.08±6.39）mg/L高于NGT组（47.31±9.07）mg/L，两者差异有统计学意义（t=2.904，P=0.002）。经Pearson等级相关分析发现RBP4的水平与HOMA-IR值之间无相关（r=0.268，P=0.376）。

2.4 血清中NF-κB的活性及其与HOMA-IR的相关性分析

GDM组患者血清中NF-κB的活性（3.73±0.92）ng/ml高于NGT组（1.05±0.17）ng/ml，两者差异有统计学意义（t=3.272，P=0.001）。经Pearson等级相关分析发现NF-κB的活性与HOMA-IR值之间呈正相关（r=0.755，P=0.003）。

2.5 血清中RBP4水平和NF-κB活性之间的相关性分析

GDM患者血清中RBP4水平和NF-κB活性之间呈正相关（r=0.752，P=0.003）。

3 讨论

研究显示，孕妇激素水平发生变化，特别是促进脂肪分解的激素水平增加，可导致体内炎症因子的分泌、糖代谢及脂质代谢的异常，并出现胰岛素抵抗[6，12-13]。本研究对所有纳入孕妇的血清糖代谢水平进行统计学分析，结果显示GDM组血清中FBG的含量升高；而两组研究对象血清中Fins的含量无差异；此外GDM组的HOMA-IR值高于NGT组，出现胰岛素抵抗。本结果与早期的研究具有一致性。

胰岛素抵抗的发生，不仅涉及到体内糖代谢异常，也涉及到脂质代谢的异常。RBP4是一种核受体辅助因子，可影响视黄酸受体及视黄醇受体所调节的基因表达过程，并导致脂质的异常代谢[14-15]。近年来，许多学者对RBP4在妊娠糖尿病中的作用进行大量研究，所得结果却不尽相同。DU等[16]对76例中国妇女进行的相关研究显示RBP4在GDM患者血清中的表达水平升高，且与TG和HDL的表达具有相关性，可影响体内脂质代谢过程。KHOVIDHUNKIT等[17]对泰国妇女进行的研究则显示RBP4在妊娠糖尿病患者及正常孕妇血清中的表达水平并无差异。造成不一致结果的原因可能是样本量或是种族、地区的差异。本研究通过对46例妊娠糖尿病患者和58例妊娠非糖尿病孕妇的对照研究发现，妊娠糖尿病患者血清中RBP4的水平升高。经Pearson相关性分析发现RBP4的水平与HOMA-IR值之间无相关。由此可认为，RBP4水平的升高对判断妊娠糖尿病具有重要的参考意义，但血清RBP4水平与胰岛素抵抗之间无关。

此外，本研究还检测NF-κB在妊娠糖尿病中的可能作用，结果显示，GDM组血清中NF-κB的活性高于NGT组。NF-κB作为信号转导路径的枢纽，一旦激活即可通过相应的正反馈机制，加速炎症反应的发生[18]；而持续的炎症反应正是妊娠糖尿病的发病机制之一。故血清中NF-κB活性的升高可作为诊断妊娠糖尿病的生物标志物。早期有研究认为，炎症因子可通过激活JNK通路或NF-κB通路引起胰岛素抵抗[19-20]，本研究经Pearson等级相关分析发现NF-κB的活性与HOMA-IR值之间呈正相关。本结果从侧面证实NF-κB参与调控妊娠糖尿病胰岛素抵抗的发生，在妊娠糖尿病发病中起着的重要作用；但是NF-κB信号通路的异常在妊娠糖尿病中的具体作用及相关作用机制还有待进一步深入的研究。此外，研究结果还显示，GDM患者血清中RBP4水平和NF-κB活性之间呈正相关，说明两者之间可能存在某种形式的协同作用，可共同作为妊娠糖尿病的诊断指标。

综上所述，本研究发现妊娠糖尿病组患者血清中RBP4、NF-κB、FBG及HOMA-IR等指标的表达水平均呈升高趋势，且NF-κB的活性与HOMA-IR呈正相关，可能参与影响妊娠糖尿病患者胰岛素抵抗的发生；此外，RBP4与NF-κB的水平呈正相关，两者可协同作为今后妊娠糖尿病诊断的重要参考指标，并有望为其治疗提供潜在的靶点。

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