PROX1在原发胃癌中的表达及其意义

吴文安，赵 金，廖 娟，杨怡萍，李 勤，梁 晶

陕西省肿瘤医院 (西安 710061)

PROX1在原发胃癌中的表达及其意义

吴文安，赵 金，廖 娟，杨怡萍，李 勤，梁 晶△

陕西省肿瘤医院 (西安 710061)

△通讯作者

目的: 检测PROX1在原发性胃癌中的表达，探讨其与病理分级与临床分期的关系。方法：采用免疫组化SABC法检测70例胃癌组织中PROX1表达水平，分析其与病理分级及临床分期之间的关系。结果：胃癌及正常组织中均有PROX1表达，但胃癌组织中的表达含量明显高于正常组织的表达含量，且与病理分级及临床分期有关。依据病理分级，PROX1表达水平由高到低分别为Ⅲ级>Ⅱ级>Ⅰ级,其差异具有统计学意义(P<0.05)；依据临床分期，PROX1表达水平由高到低分别为Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期 >Ⅰ期,其差异具有统计学意义(P<0.05)，不同性别患者PROX1表达水平无统计学差异(P=0.40)。结论：PROX1在胃癌组织存在高表达，且与其病理分级及临床分期有关。

同源异型蛋白PROX1(Prospero-related homeobox)是果蝇蛋白在脊椎动物中的同源物，人类沿基因在1996年被首次分离，位于人类染色体1q32.2-q32.3[1-2]，近年来研究证实，PROX1蛋白可调控细胞分化，在中枢神经系统、晶状体、视网膜、肝脏、胰腺及淋巴管等多种组织器官胚胎发育过程中发挥重要作用[3-4]。一方面，在神经胶质瘤、结直肠癌、肝癌中PROX1呈高水平表达，且PROX1可增强细胞迁移能力而促进肿瘤转移；另一方面，在胰腺癌、乳腺癌、白血病等肿瘤中由于DNA甲基化作用引起、PROX1表达下调，且PROX1表达水平与肿瘤细胞的分化程度呈正相关，PROX1表达水平高的患者预后良好[5-6]。正如在胚胎发育过程中PROX1作用的发挥具有组织特异性一样，在不同类型的肿瘤中，PROX1即可表现出促进肿瘤侵袭的作用亦可扮演抑制肿瘤进展的角色。目前国内外有关胃癌PROX1表达含量与病理分级及临床分期的关系的研究尚未见报道。本研究通过免疫组织化学检测PROX1在胃癌中的表达情况，探讨PROX1表达含量与病理分级及临床分期

材料和方法

1 材 料 收集我院2010-2015年手术切除的胃癌标本70例，男45例，女25例，年龄36～83岁，中位年龄62岁；所有病例经HE染色均证实为原发胃癌，且病理类型均为腺癌；病理分级：I级20例，II级28例，III级22例。临床分期：Ⅰ期5例,Ⅱ例13例,Ⅲ35例,Ⅳ期17例。

2 研究方法

2.1 PROX1免疫组化染色：PROX1单克隆抗体为上海博研生物科技有限公司产品，按1∶100稀释后作为I抗，相应II抗及SABC染色试剂盒购自武汉博士德生物公司。采用免疫组化SABC法，染色步骤严格按照说明书进行。以已知阳性反应片作为阳性对照，以PBS代替I抗作为阴性对照。

2.2 结果判定：PROX1主要定位于细胞核，呈散在分布的淡黄色或棕褐色颗粒。镜下随机选择5个高倍视野，观察并计算视野中的阳性细胞数，计算总细胞数不少于1000个，以阳性细胞数>25%为阳性判断标准。每例标本在光镜下随机选择3个高倍视野，采用北航多功能真彩色病理图像分析系统，对每个视野进行灰度测量，计算平均灰度值。

结 果

1 免疫组化检测结果 PROX1主要定位于细胞核，偶见细胞膜染色，阳性细胞呈散在或片状分布的棕褐色颗粒(图1)，阴性对照片未见棕黄色颗粒(图2)。不同年龄、性别、病理分型、分级的胃癌患者的表达情况,见表1。

图1 PROX1在胃癌组织中的阳性表达 (SABC×400) 图2 PROX1癌旁正常组织中的阴性表达(SABC×400)

临床特征 nPROX1+-阳性率(%)年龄(岁)≤603930976.9 >603125680.6性 别 男45341175.6 女2521484病理分级Ⅰ20101050 Ⅱ2824485.7 Ⅲ2221195.5临床分期Ⅰ51420 Ⅱ139469.2 Ⅲ3529682.9 Ⅳ1716194.1合 计 70551578.6

表2 胃癌组织PROX1表达的半定量分析

2 病理图像分析结果 利用图像分析法半定量检测胃癌组织中PROX1表达水平，通过方差分析和q检验比较对不同病理分级，不同临床分期的胃癌组织PROX1表达的差异，结果显示：PROX1的表达水平与胃癌的病理分级及临床分期有关且有显著统计学差异，P值均小于0.05；此外，依据性别分组，男、女胃癌患者PROX1表达水平无显著统计学差异(P>0.05)，见表2。

讨 论

我国是胃癌的高发区，胃癌年患病率和病死率均是世界平均水平的2倍多，特别是西北地区。胃癌的发生是一个多阶段、多因素作用的结果，与基因的表达和改变密不可分[7-10]。同源异型蛋白PROX1(Prospero-related homeobox)是果蝇蛋白在脊椎动物中的同源物，人类沿基因在1996年被首次分离，位于人类染色体1q32.2-q32.3，在许多肿瘤组织中表达异常。有研究证实[11]，在不同类型的肿瘤中，PROX1即可表现出促进肿瘤侵袭的作用亦可扮演抑制肿瘤进展的角色。在肝细胞癌中的研究显示在肝癌细胞上过表达PROX1则促进肝癌细胞的迁移和侵袭，并研究发现，PROX1主要通过上调缺氧诱导因子-1α的转录水平和招募组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)阻止HIF-1α的乙酰化来保护HIF-1α蛋白的稳定性来实现其促转移活性，它最终导致肝癌细胞发-生上皮细胞间质转化(EMT)[12]。

本研究发现，原发胃癌组织中PROX1表达明显高于正常组织，随着病理分级及临床分期的增加，PROX1阳性表达率显著增高，此结果提示，胃癌组织的病理分级及临床分期与PROX1的表达水平呈正相关， PROX1的表达可能与胃癌的预后相关，临床可以应用于判断患者的预后。流行病学调查及临床资料显示，胃癌的发病率在两性之间存在着统计学差异，女性明显少于男性，且随着年龄的增长,胃癌癌发病率增加。本研究发现PROX1的表达与性别没有相关性。

综上所述，PROX1与胃癌的病理分级及临床分期有想关系，其高表达可能预示患者预后差，生存期短，将有望成为临床判断患者预后的重要指标。

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[3] Elsir T,Aorrego E.Expression of PROX1 Is a common feature of high-grade malignant astrocytic gliomas[J].Journal of Neuropathology and Experimental Neurology,2010,69(2):129-138.

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(收稿：2017-02-04)

ExpressionandsignificanceofPROX1ingastriccancer

Wu Wen’an,Zao Jin , Liao Juan,et al.

The Tumor Hospital of Shaanxi Province ( Xi’an 710061)

Objective: To detect expression of PROX1, and investigate its significance in Gastric cancer.Methods: 70 patients with gastric cancer entered this study. Immunohistochemistry(SABC assay) and image analysis was used to semiquantitatively detect the expression of PROX1 protein. Results: Positive expression rate of PROX1 was higher in gastric cancer than in normal .As cancer pathologic and clinical grading advanced, expression of PROX1 increased with statistical deviation(P<0.05). PROX1 expression level showed no statistical deviation between male and female(P=0.40). Conclusion: PROX1 is overexpressed in gastric cancer and is relation with cancer pathologic and clinical grading advanced.

Stomach neoplasms/pathology @PROX1 proteins Immunohistochemistry

胃肿瘤/病理学 @PROX1蛋白 免疫组织化学

R392.3

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2018.03.002