高效液相色谱法建立头孢地尼胶囊有关物质检测方法

于梅

摘 要： 目的：本文通过建立头孢地尼胶囊的有关物检测方法，并对其进行方法学验证。方法：色谱柱为Agela XBP C18色谱柱，柱温为35℃，进样量为：20ul，检测波长为254nm，流速1.0ml/min。梯度洗脱。结果：该方法通过耐用性试验，头孢地尼的检测限为0.14μg/ml，能有效的检出杂质；专属性较好，在酸、碱、氧、光、热的破坏条件下各杂质均能有效分离。结论：该方法简单、便捷、易操作，专属性好，灵敏度高，方法可行。

关键词： 头孢地尼胶囊；有关物质；高效液相色谱

目前头孢类药种类比较多，头孢地尼为第三代头孢菌素，抗菌谱广，对葡萄球菌和链球菌属的抗菌作用较好。为了患者用药安全，我们对有关物的检测方法进行研究。

1.仪器与试药

1.1仪器

仪器名称：十万分之一电子天平 型号：XS105DU 厂家：梅特勒

仪器名称：高效液相色谱仪 型号：Aiglent 1200 厂家：安捷伦

1.2试药

供试品：头孢地尼胶囊 规格：0.1g（以C14H13N5O5S2计）；批号：171108、171109、171110。

2.方法验证

2.1色谱条件

色谱柱为Agela XBP C18 4.6*250mm柱子；流动相A为0.25%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节pH值至5.0），流动相B为0.25%四甲基氢氧化铵溶液（用磷酸调节PH值至5.0）-乙腈-甲醇（450：320：230），流动相A、B都每1000ml中加入0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液0.3ml。按梯度进行洗脱，流动相A：0-2min95%，2-22min：95%-75%，22-32min为75-50%，32-37min为50-95%%，37-40min为95%。柱温为35℃，进样量为：20ul，检测波长为254nm，流速1.0ml/min[1]。

2.2测定方法

取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于头孢地尼37.5mg），置棕色量瓶中，加流动相A溶解并稀释制成每1ml中约含头孢地尼1.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加流动相A稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液[2]。

2.3檢测限

精密称取头孢地尼对照品适量，配制成1.5mg/ml的溶液，系列稀释，进样量为20μl，当信噪比为3：1时，测得头孢地尼的最小检测浓度为0.14μg/ml，供试品溶液浓度为1.5mg/ml，相差约10000倍，因为10000倍能有效的检测有关物质。

2.4耐用性

分别考察流动相中四甲基氢氧化铵浓度变化、检测波长变化、流动相比例、pH值变化、柱温变化、以及采用三根色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变化。

2.4.1检测波长变化：①254nm。②260nm。③250nm。

2.4.2温度变化：①38℃。②35℃。③45℃。

2.4.3流速变化：①1ml/min。②0.8ml/min。②1.2ml/min。

2.4.4色谱柱变化：①奥泰（两个批号）③Wondasil。

结果：头孢地尼主峰与相邻杂质的分离度均大于2.0，主峰与相邻杂质能有效的分离。因此该方法耐用性较好。

2.5溶液稳定性

精密称取头孢地尼胶囊138.25mg，于50ml容量瓶中，加流动相A溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液，在室温条件下放置12小时，分别于0h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h取样，注入液相色谱仪，并考察头孢地尼的相关杂质的变化。结果：头孢地尼溶液较稳定，但其E-异构体峰面积有增大趋势，其RSD分别为0.25%，2.98%，但是在6h内RSD分别为：0.22%，1.06%。其他杂质均无明显变化。由此可见头孢地尼胶囊的溶液6小时内较稳定。配制溶液时在6小时内使用。

2.6专属性

2.6.1供试品溶液制备

精密称取供试品适量（约相当于头孢地尼37.5mg），置25ml量瓶中，加流动相A溶解后，稀释至刻度，摇匀，过滤。

2.6.2酸破坏

供试品：精密称取66.86mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解后，加入5ml 1mol/L盐酸溶液，置80℃水浴加热1.5小时后，取出放置室温，再加入5ml 1mol/L的氢氧化钠溶液中和，用流动相A定容至刻度。

酸碱空白：精密称取空白混合辅料31.25mg，置25ml量瓶中，同法配制酸空白。

2.6.3碱破坏

供试品：精密称取67.99mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解后，加入1mol/L 氢氧化钠溶液0.5ml，室温放置10分钟后，加1mol/L 盐酸溶液0.5ml中和，加流动相A稀释至刻度[3]。

碱破坏空白：精密称定空白混合辅料29.23mg，置25ml量瓶中，同法配制碱空白。

2.6.4氧化破坏

供试品：精密称取68.55mg，置25ml量瓶中，加流动相A溶解后，加入10%双氧水2.0ml，室温放置30分钟后，稀释至刻度。

氧化空白：精密称取空白混合辅料30.85mg，置25ml量瓶中，同法配制氧化空白溶液。

2.6.5光照破坏

供试品：精密称取68.00mg，置25ml量瓶中，于6000 lx条件下放置30小时，加流动相A溶解后，稀释至刻度。

2.6.6热破坏

供试品：精密称取67.21mg，置25ml量瓶中，置于110℃烘箱内加热10小时后，加流动相A溶解后，并稀释至刻度。

热破坏空白：精密称定空白混合辅料28.26mg，置25ml量瓶中，同法配制热空白。

精密量取上述各专属性破坏溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果：所有供试品经过酸、碱、氧化、高温及光照破坏后，且切酸空白、碱空白、氧化空白对有关物质均不干扰，主峰与相邻杂质的分离度均大于1.5，分离度均符合药典要求，各杂质之间均能有效的分离，说明此方法的专属性较好。

2.7有关物质检查

取三批中试样品（171108、171109、171110）按照测定方法进行有关物质进行检查。结果：E-异构体分别为：0.07%、0.08%、0.07%；复合物A分别为：0.12%、0.14%、0.13%；杂质B分别为：0.05%、0.02%、0.03%；相对保留时间0.76处杂质分别为0.35%、0.37%、0.35%；最大单一杂质分别为：0.08%、0.09%、0.09%；总杂质分别为：0.79%、0.82%、0.84%。综合上述检查结果，三批样品的有关物质均能有效的检出。

3.讨论

综上所述，本文通过建立头孢地尼胶囊的有关物质检查方法，并进行方法学验证，同时也采用经过验证的方法进行三批中试样品检验。结果有关物质均能有效的检出。此方法简单、便捷、灵敏度较高，方法可行[4]。

参考文献

[1] 李扬. 头孢地尼胶囊有关物质方法学 黑龙江科技信息 2016，（6）.

[2] 头孢地尼有关物质分析方法的比较研究 - 中国抗生素杂志 - 2012， 37（8）.

[3] 高效液相色谱法测定头孢地尼有关物质 - 天津药学 - 2008， 20（6）.

[4] HPLC测定头孢地尼的含量及有关物质 - 中国新药杂志 - 2003， 12（2）.