GRO-α和CMTM-8在宫颈癌发病机制中的作用

张隆英，林敏秀，林枫，陈豪

（台州市中西医结合医院，浙江 温岭 317523）

趋化因子是一类在生理条件下发挥重要作用的蛋白质，负责细胞骨架的重构、细胞迁移，参与免疫反应等，近年研究表明，很多趋化因子还参与了癌症的发生与恶化，其在肿瘤的生长、转化、局部浸润与远处转移等生物学行为中可能起着重要的作用[1-2]。趋化因子中生长相关癌基因 （growth-related oncogene，GRO）和趋化素样因子超家族成员CMTM-8表达与多种癌组织，比如胃癌、结肠癌、黑色素瘤等有关，但与宫颈癌的关系目前尚不清楚。本研究通过检测手术后宫颈癌组织GRO-α和CMTM-8的表达，探讨宫颈癌的发病机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 纳入标准：（1）符合 《中华妇产科学》中宫颈癌的病理诊断[3]；（2）原发宫颈病变；（3）影像学资料齐全；（4）术前未行放化疗。排除标准：（1）宫颈转移性肿瘤；（2）有明显的手术禁忌证。选择2011年1月～2016年10月台州市中西医结合医院妇产科收治的46例宫颈癌患者，年龄27～76岁，平均（49.45±13.57）岁，术后病理确诊为宫颈癌。取宫颈癌组织为宫颈癌组，癌旁2cm正常组织为对照组。

1.2 方法 多克隆兔抗人GRO-α抗体，购自Biomedical Technologies公司，抗人CKLFSF-8多克隆抗体购自上海天鸿生物科技有限公司，即用型SP试剂盒（PV-6000）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化方法：采用SP法测定GRO-α和CMTM-8的表达。主要步骤包括标本经石蜡切片，二甲苯脱蜡梯度酒精水化，3%过氧化氢灭活，抗原修复，兔血清液封闭，滴加Ⅰ抗、Ⅱ抗及链霉素抗生素蛋白-过氧化物酶复合物，DAB显色，苏木素复染，脱水封片。PBS代替Ⅰ抗进行阴性对照。抗体稀释浓度分别为1:50和1:25。

1.3 结果判定 光镜下观察细胞着色情况。每张切片随机观察5个视野（×200），取其平均值为每张切片的观察结果。阳性细胞的胞浆呈棕色或棕黄色，并按阳性细胞所占比例来判定结果。阴性（-）：阳性细胞数＜5%；弱阳性（+）：阳性细胞数占 5%～24%；阳性（++），阳性细胞数占 25%～50%；强阳性（+++）：阳性细胞数＞50%。本文阳性包括弱阳性、阳性和强阳性。

1.4 统计学处理 应用SPSS 22.0统计软件行统计分析，计量资料用（±s）表示，组间比较采用 t检验，计数资料采用χ2检验，GRO-α和CMTM-8蛋白表达的相关性采用Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 GRO-α与CMTM-8的表达 GRO-α与CMTM-8主要表达在宫颈上皮组织的胞浆内，免疫组化结果显示阳性细胞的胞浆呈棕黄色 （图1）。宫颈癌组GRO-α蛋白的阳性率显著高于对照组，CMTM-8蛋白的阳性率显著低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），详见表 1。 GRO-α 表达的阳性率与肿瘤的发生及淋巴结转移有关（P＜0.05），而与分化程度、临床分期无关（P＞0.05）；CMTM-8 表达的阳性率与肿瘤的分化程度、临床分期和淋巴结转移均有关（P＜0.05），详见表 2。

图1 GRO-α 和 CMTM-8的表达（SP×200）

表1 两组GRO-α和CMTM-8的表达情况（n，%）

表2 宫颈癌组中GRO-α和CMTM-8蛋白阳性率与临床病理特征的关系（n，%）

2.2 GRO-α与CMTM-8相关性 宫颈癌组GRO-α与CMTM-8经spearman等级相关分析，两者呈负相关（r=-0.46，P＜0.05），详见表 3。

表3 宫颈癌组GRO-α和CTMT-8表达的等级相关性（n）

3 讨论

宫颈癌的发生与人乳头状瘤病毒感染有关，趋化因子可能发挥趋化中性粒细胞至炎症部位参与免疫反应的作用。近年来发现其对肿瘤的增殖与迁移也起着一定的作用，可作为潜在的治疗肿瘤的靶点[4-5]。CMTM-8基因其编码的蛋白质属于趋化素样因子超家族成员中的一员，不仅具有趋化作用，还在细胞粘附、聚集、跨膜信号转导、炎症反应以及免疫反应中具有重要作用。Li等[6]报道，过表达CMTM-8可抑制宫颈癌细胞（Hela细胞）的增殖能力，若CMTM-8水平下降，则Hela细胞增殖能力增强。据此推测CMTM-8可能是潜在的抑癌因子。本研究中，CMTM-8在宫颈癌组织中的阳性表达率较周围正常组织低也提示CMTM-8存在抑制癌细胞表达的作用。另外，宫颈癌组织中GRO-α蛋白表达阳性率显著高于周围正常组织，提示GRO-α蛋白表达增加，对肿瘤细胞可能起着促进作用。

GRO-α与CMTM-8的临床病理关系的研究提示，GRO-α与淋巴结转移有关，而与分化程度、临床分期无关，而CMTM-8与分化程度、临床分期及淋巴结转移均有关，提示GRO-α与肿瘤的转移有一定的关系，而CMTM-8与肿瘤的形成，发生和发展有较为密切的关系。根据相关性分析显示，GRO-α与CMTM-8在宫颈癌中存在负相关，GRO-α的表达促进肿瘤发展，而CMTM-8的表达抑制肿瘤的发展，但具体作用机制有待于进一步研究。

综上所述，宫颈癌组织中GRO-α蛋白表达水平增加，而CMTM-8表达下降，它们可能参与宫颈癌组织生物进程，故针对GRO-α和CMTM-8的免疫治疗有一定的应用前景，值得进一步研究。

[1]De Filippo K，Dudeck A，Hasenberg M，et al.Mast cell and macrophage chemokines cxcl1/cxcl2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation.Blood，2013，121（24）:4930

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[3]曹泽毅，翁梨驹，郎景和，等.中华妇产科学.2版.北京:人民卫生出版社，2005:2012

[4]Jiang YP，Wu XH.Correlations of chemokine CXCL12 and its receptor to tumor metastasis.Ai zheng，2007，26（2）:220

[5]王淑强，李鹏，郭颖，等.趋化因子受体在子宫颈癌中的表达及临床意义.中国老年杂志，2010，30（15）：2105

[6]Li D，Jin C，Yin C，et al.An alternative splice form of CMTM8 induces apoptosis.Int J Biochem Cell Biol，2007，39（11）:2107