冠心病患者血清炎性细胞因子的表达及意义

李　志　王伟群　张明亮　姚秀佳　齐淑芳　赵文杰

(佳木斯市中心医院心内科，黑龙江　佳木斯　154002)

1佳木斯大学基础医学院2海南医学院第一附属医院

冠状动脉硬化性心脏病简称冠心病(CHD)，是由于脂质代谢异常导致脂质沉积于动脉内膜形成硬化斑块，随着斑块的积累会逐渐发展为血管腔狭窄、血流阻塞、心肌缺血，最终导致心绞痛。CHD是发达国家死亡和致残疾的主要原因之一，尽管在过去的几十年里，该病在西方国家的死亡率呈现逐渐下降趋势，但在35岁以上人群中，仍有近1/3的人死于该病〔1〕。当前认为，CHD患病率增加与快速的城市化、社会老龄化、慢性疾病、缺乏运动、吸烟等因素具有相关性〔2〕。CHD的发生和发展受多种因素的影响，其中血管壁的慢性炎症在促进动脉粥样硬化斑块的形成、发展和破裂过程中起至关重要的作用〔3〕。本研究旨在探讨炎性反应与CHD的关系。

1　材料与方法

1.1一般资料2013年6月至2016年3月佳木斯市中心医院59例CHD患者为CHD组，男31例，女28例，年龄42～84岁；另23例体检健康者为正常组男10例，女13例，年龄44～83岁。CHD组均经冠状动脉造影等检查手段确诊CHD，排除先天性心脏病、怀孕或哺乳、自身免疫性疾、恶性肿瘤及肝肾功能不全等病变。将CHD患者分为稳定型心绞痛(SAP)组20例(男9例，女11例，平均65.7岁)、不稳定型心绞痛(UAP)组21例(男12例，女9例，平均66.3岁)和急性心肌梗死(AMI)组18例(男10例，女8例，平均63.7岁)。

1.2试剂、材料及仪器细胞因子白细胞介素(IL)-8和IL-10酶联免疫吸附(ELISA)检测试剂盒(博士德，武汉)；移液器(吉尔森，美国)；低温冷冻离心机(Beckman；美国)；离心管(Corning，美国)；全自动多功能酶标仪(BioTek，美国)；恒温水槽(杰瑞尔电器有限公司，江苏)。

1.3指标检测受试者均于清晨空腹采集肘静脉血3 ml，于2 h 内离心(2 500 r/min，15 min)收集血清并保存于-80℃冰箱中。当行ELISA检测时，按下述操作流程检测IL-8和IL-10含量：将待测血清及ELISA试剂在冰上解冻；分别将100 μl不同浓度的标准品和待测血清样本吸入96孔酶标板中，酶标板于37℃恒温水槽中孵育90 min，甩除板中液体并在滤纸上用力拍击以尽量去除液体；向各孔中分别吸入100 μl生物素化IL-8或IL-10抗体工作，并于37℃恒温水槽中孵育60 min；300 μl洗涤缓冲洗涤各孔(1 min×3次)；向各孔中分别吸入100 μl链霉亲和素-生物素复合物(ABC)液，并于37℃恒温水槽中孵育30 min；300 μl洗涤缓冲洗涤各孔(2 min×5次)；向每孔吸入90 μl显色液，并于37℃恒温水槽避光孵育20 min；向每孔吸入100 μl反应终止液，酶标仪读取450 nm处光密度(OD)值；用标准品OD绘制的标准曲线来计算血清IL-8和 IL-10含量。

1.4统计学方法采用SPSS20.0统计学软件进行q检验。

2　结　果

2.1炎性因子水平与正常组和SAP组比较，UAP和AMI组血清IL-8水平显著增加；与正常组比较，UAP和AMI组血清IL-10水平显著降低(P<0.05)。见表1。

表1　各组血清IL-8、IL-10水平比较

与正常组和SAP组比较：1)P<0.05；与正常组比较：2)P<0.05

2.2炎性因子与Gensini积分相关性与<7.5 pg/ml组比较，>9.0 pg/ml组Gensini评分显著增高(P<0.05)。但CHD 患者血清IL-10含量与Gensini评分无相关性(P>0.05)。见表2。

表2　炎性因子水平与Gensini积分的关系分)

与IL-8<7.5 pg/ml组比较：1)P<0.05

3　讨　论

目前认为，CHD属于一种代谢因素和免疫机制共同参与的慢性炎症性疾病，炎症反应可贯穿于动脉粥样硬化病变的发生、演进及恶化的始末，大量炎症细胞(如单核细胞、淋巴细胞和中性粒细胞等)的趋化、浸润及聚集及炎性因子的释放在CHD免疫应答及炎性反应中发挥关键作用〔4〕。

IL-8又称CXC类趋化因子(CXCL)8，作为一种典型促炎因子，IL-8可激活单核细胞并使其向血管平滑肌趋化，黏附，促使后者增殖和迁移，另外，IL-8诱使巨噬细胞向斑块处迁移，并参与斑块的形成及破裂〔5〕。Simonini 等〔6〕报道，冠状动脉斑块组织中IL-8可诱导该部位的血管新生，当应用IL-8中和抗体后，则可完全抑制生血管效应，提示IL-8在动脉粥样硬化斑块的形成中发挥关键作用。有研究表明，与正常对照组比较，心肌梗死患者IL-8显著升高，提示检测血清 IL-8水平是诊断UAP的一个有效方法，并且可作为AMI的早期标志〔7〕。本实验提示血清IL-8水平可一定程度反映CHD患者临床病情的危重程度。

作为一种多效能抗炎因子，IL-10主要由Th2淋巴细胞和巨噬细胞所分泌，它可抑制趋化因子、炎性因子介导的平滑肌细胞增殖效应，还具有抑制黏附分子表达、防止心肌缺血、降低再灌注损伤等心肌保护作用，因此，IL-10在CHD斑块损伤恢复和斑块的稳定中起保护作用〔8〕。Seghaye等〔9〕研究揭示，IL-10可经下调单核、巨噬细胞的活性而抑制肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、IL-8、IL-1等炎性细胞因子表达，进而调控促炎与抗炎之间的平衡。当将缺乏IL-10的小鼠缺血后再灌注，TNF-α和细胞间黏附分子(ICAM)-1表达量显著增高，同时心肌梗死面积也明显扩大〔10〕。本实验提示促炎/抗炎之间平衡失调所致的系统及局部性炎症反应是CHD免疫机制的关键环节。

1Nichols M，Townsend N，Scarborough P，etal.Cardiovascular disease in Europe 2014：epidemiological update〔J〕.Eur Heart J，2014；35(42)：2950-9.

2Horton R.Offline：chronic diseases-the social justice issue of our time〔J〕.Lancet，2015；386(10011)：2378.

3Liang K，Dong SR，Peng H.Serum levels and clinical significance of IFN-g and IL-10 in patients with coronary heart disease〔J〕.Eur Rev Med Pharmacol Sci，2016；20(7)：1339-43.

4Hansson GK.Inflammation，atherosclerosis and coronary artery disease〔J〕.N Engl J Med，2005；35(16)：429-30.

5李艳丽，贺赟，刘娟.YKL-40、MCP-1、IL-8 在冠心病患者血浆中的表达水平及其与冠状动脉病变程度的关系〔J〕.系统医学，2017；7(2)：10-3.

6Simonini A，Moscucci M，Muller DW，etal. IL-8 is an angiogenic factor in human coronary atherectomy tissue〔J〕.Circulation，2000；101(13)：1519-26.

7侯兴华，黄建群，喜俊白.介素8在冠心病急性心肌梗死患者中的变化及临床意义〔J〕.急诊医学，2000；9(1)：8-10.

8Anguera I，Mirandar F，Bosch X，etal.Elevation of serum levels of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 and decreased risk of coronary events in patients with unstable angina〔J〕.Am Heart，2002；144(5)：811-7.

9Seghaye M，Duchateau J，Bruniaux J，etal.Interleukin-10 related to cardiopulmonary bypass in infants undergoing cardiac operations〔J〕.J Thorac Cardiovasc Surg，2007；111(3)：545-53.

10Rennick DM，Fort MM，Davidson NJ.Studies with IL-10-/-mice：an overview〔J〕.J Leukoc Biol，1997；61(4)：389-96.