北京地区汉族女性人群SYK基因启动子区-803A>T(rs290987)单核苷酸多态性与乳腺癌易感性分析

靳庆娥，苏建荣

(首都医科大学附属北京友谊医院检验科，北京　100050)

乳腺癌病因复杂，是遗传因素和环境因素共同作用所致，涉及到诸多原癌基因和抑癌基因的失调。脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase，SYK)是非受体酪氨酸蛋白激酶家族一员，最早发现其在淋巴细胞分化成熟和免疫细胞活化过程中起重要作用[1，2]。随着研究深入发现其在许多肿瘤中都存在差异表达，扮演了原癌基因和抑癌基因的双重角色[3]。SYK 在乳腺癌、鼻咽癌等肿瘤组织中表达下调，研究显示乳腺癌、鼻咽癌中SYK的低表达受其启动子区CpG岛甲基化影响[4，5]。但关于SYK功能性位点rs290987与乳腺癌相关性的研究目前鲜有报道。本文以北京地区汉族女性人群为研究对象，分析了乳腺癌患者和正常人群rs290987位点多态性的差异，为临床实践提供了参考。

1　材料和方法

1.1研究对象选取2015年7月～2016年6月临床明确诊断为乳腺癌的57例女性患者作为实验组，平均年龄48.8±8.9岁。取同期与之年龄相匹配的60例健康查体女性作为对照组，平均年龄48.9±8.0岁。所有研究对象均为汉族。所有入组人员均签署知情同意书。

1.2试剂和仪器全血DNA提取试剂盒购自QIAGEN(Cat.No.51104)，启动子区扩增引物由生工生物(上海)股份公司合成，梯度PCR扩增仪购自Bio-Rad，高速离心机购自Eppendorf公司。血清SYK ELISA检测试剂盒购自武汉华美公司。

1.3方法采集空腹静脉血3 ml，应用试剂盒提取基因组DNA，采用PCR联合DNA测序方法检测各标本-803位点的基因型。ELISA方法定量检测血清SYK的水平。

1.4统计学分析采用SPSS16.0统计软件分析处理。基因型分布采用χ2遗传平衡吻合度Hardy-Weinberg检验。组间比较采用Pearsonχ2检验。多态位点与乳腺癌相关性采用非条件Logistic回归模型进行分析，采用比值比(odd ratio，OR)和95%置信区间(confidence interval，CI)表示相对危险度。P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1Hardy-Weinberg遗传平衡检验结果对乳腺癌组和对照组基因型分布经检验均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律，具有群体代表性 (χ2=0.864，P=0.352；χ2=0.529，P=0.466)。

2.2乳腺癌组和对照组SYK-803位点基因型和等位基因分布差异乳腺癌组与对照组相比，基因型和等位基因分布频率差异均有统计学意义(χ2=6.617，P=0.010；χ2=5.393，P=0.020)。

2.3SYK-803A>T多态性与乳腺癌相关性分析见表1。对基因型和年龄分别做单因素分析(χ2=6.672，P=0.036；t=0.016，P=0.987)，根据给出的P值，将基因型纳入回归模型，而年龄未纳入模型，OR和P值也未经年龄校正。病例组T等位基因频率高于对照组(χ2=5.348，P=0.021)。携带T等位基因的个体(TA+TT)罹患乳腺癌的风险是携带A等位基因(AA)的2.87倍(OR=2.87；95% CI=1.27～6.49)。

表1

不同组间SYK-803位点基因型和等位基因分布及与乳腺癌相关性[n(%)]

2.4乳腺癌组和对照组血清SYK水平比较乳腺癌组血清SYK水平低于对照组(4 128.7±508.9 pg/ml vs 4 858.0±413.1 pg/ml)，差异有统计学意义(F=33.278，P<0.01)。

3讨论乳腺癌的发生发展是多基因参与多步骤协同作用的结果，其中包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。启动子区CpG甲基化和单核苷酸多态影响转录因子结合而导致mRNA转录下调是抑癌基因失活的最常见机制。由于种族、遗传和各种致癌因素的复杂性，乳腺癌个体在组织形态、免疫表型和治疗效果等方面都存在很大差异。暴露于同样的环境中，有些人发生肿瘤，另一些人则不发生肿瘤，这说明个体的遗传易感因素在肿瘤的发生发展中起重要作用。

SYK具有双重功能，在血液系统肿瘤中扮演原癌基因角色，在上皮源性肿瘤中常发挥抑癌基因功能。乳腺癌组织中SYK低表达增加了远处转移风险并与不良预后相关。目前对 SYK 在乳腺癌中表达下调多集中在甲基化和相关机制研究。而SYK启动子区的遗传变异与许多肿瘤的发病机制密切相关[6]，例如在鼻咽癌中SYK启动子区SNP影响其与转录因子的结合而使mRNA表达下调。Kim等[7]发现SYK内含子8(rs290227)G等位基因增加了人们患血管性痴呆(VaD)的风险。Faryal等[8]对207例乳腺癌患者进行SYK外显子和外显子/内含子交界处测序，共发现10种类型突变，这些突变使患乳腺癌风险至少增加5倍(P<0.000 1)，并且某些突变还影响了其与miRNA的相互作用进而影响SYK的可变剪切。有研究显示乳腺癌病例中SYK5’UTR和5’SD的SNP能导致突变蛋白的产生进而影响肿瘤的侵袭和迁移[9]。

本文以-803A>T SNP为切入点，分析乳腺癌组和正常对照组基因型和等位基因分布频率的差异，探讨了该遗传变异与乳腺癌发病风险的关系。结果显示两组间基因型和等位基因分布频率差异均有统计学意义，与携带AA野生基因型相比，携带TA和TT基因型者罹患乳腺癌的风险分别增加了2.77倍和3.13倍。在中国南方汉族人群中，SYK-803A>T的(TA+TT)基因型是结直肠癌发生发展的独立危险因素，该多态可能引起转录因子结合位点改变进而影响SYK基因转录，增加携带该等位基因个体发展成结直肠癌的风险[10]。本文结果显示该位点也是乳腺癌发生发展的危险因素。文献报道血清SYK和VEGF-C联合检测是食管癌患者发生淋巴结转移的重要预测分子；血清SYK水平与肺腺癌淋巴结受累程度呈负相关。本文结果显示乳腺癌组血清SYK水平显著低于正常对照组，因此血清SYK水平与乳腺癌发病也密切相关。

除-803外，SYK启动子区还包括多个SNP位点，对于其它位点与-803是否有连锁不平衡关系，是否与乳腺癌有相关性，都需要后续进一步研究。要明确SYK基因启动子区-803位点SNP与乳腺癌易感性的确切关系尚需更多实验数据和扩大地域范围。

参考文献：

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[2]Sada K，Takano T，Yanagi S，et al．Structure and function of Syk protein-tyrosine kinase[J]．J Biochem，2001，130(2)：177-186．

[3]Krisenko MO，Geahlen RL．Calling in SYK：SYK’s dual role as a tumor promoter and tumor suppressor in cancer[J]．Biochim Biophys Acta，2015，1853(1)：254-263．

[4]李璐，梁辉，陈群蓉．鼻咽癌组织中SYK基因启动子区的甲基化分析[J]．现代检验医学杂志，2015，30(2)：39-41，45．

Li L，Liang H，Chen QR．Methylation of SYK gene promoter region in nasopharyngeal carcinoma[J]．J Mol Lab Med，2015，30(2)：39-41，45．

[5]Yuan Y，Mendez R，Sahin A，et al．Hypermethylation leads to silencing of the SYK gene in human breast cancer[J]．Cancer Res，2001，61(14)：5558-5561．

[6]Blancato J，Graves A，Rashidi B，et al．SYK allelic loss and the role of SYK-regulated genes in breast cancer survival[J]．PLoS One，2014，9(2)：e87610．

[7]Kim Y，Kong M，Lee C．Association of intronic sequence variant in the gene encoding spleen tyrosine kinase with susceptibility to vascular dementia[J]．World J Biol Psychiatry，2013，4(3)：220-226．

[8]Faryal R，Ishfaq M，Hayat T，et al．Novel SYK gene variations and changes in binding sites of miRs in breast cancer patients[J]．Cancer Biomark，2016，16(3)：319-326．

[9]Kanwal S，Kayani MA，Faryal R．Identification of novel SNPs in SYK gene of breast cancer patients：computational analysis of SNPs in the 5’UTR[J]．Mol Biol Rep，2012，39(8)：8345-8351．

[10]Peng H，Huang J，Hu Y，et al．Associations between polymorphisms in the SYK promoter and susceptibility to sporadic colorectal cancer in a Southern Han Chinese population-a short report[J]．Cell Oncol，2015，38(2)：165-172．