VGLL4蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达及其临床意义

韩新影，刘红正，孙杰，张志刚

（1.河北省沧州市人民医院 病理科，河北 沧州 061000；2. 河北省沧州中西医结合医院，河北 沧州 061001）

侵袭和转移是胃癌恶性生物学行为的重要特征，是一个多步骤、多因素参与的复杂过程，也是造成胃癌患者预后差的主要原因[1-2]。转录辅助因子退变样蛋白4（vestigial-like family member 4，VGLL4）是最新发现的一种抑癌基因，VGLL4可以与Yes激酶相关蛋白（Yes-associated protein，YAP）竞争性结合转录增强因子（transcription enhancer factor domain family member，TEAD），从而抢先一步控制YAP-TEAD信号通路，抑制肿瘤细胞生长。有研究报道，VGLL4在调节细胞增殖、迁移、侵袭及上皮-间质转化方面发挥关键作用[3-6]。本研究采用免疫组织化学法检测胃癌和癌旁组织中VGLL4蛋白的表达，判断VGLL4蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系，现报道如下。

1　资料与方法

1.1　一般资料

选取2011年6月-2015年6月河北省沧州市人民医院病理科存档胃癌患者的石蜡包埋组织及对应癌旁组织（距癌变部位＞5 cm）各168例。重新制备4μm切片，免疫组织化学法染色，由2位有经验的医师重新审核病理诊断报告的准确性和组织学分型。其中，女性48例，男性120例；年龄24～89岁，平均60.5岁。组织学类型包括普通型腺癌、印戒细胞癌及少数神经内分泌癌，采用2010年国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会TNM分期标准，将所有患者分为0期（4例）、Ⅰ期（32例）、Ⅱ（45例）、Ⅲ期（74）、Ⅳ期（13）。

1.2　方法

1.2.1免疫组织化学法兔抗人VGLL4单克隆抗体（bs-9185R）（北京博奥森生物技术有限公司）。严格按照免疫组织化学SP法试剂盒说明书进行操作，VGLL4一抗稀释比例为1∶200，用已知阳性组织切片做阳性对照，用PBS代替一抗做阴性对照。

1.2.2判定标准VGLL4蛋白着色部位为细胞核，少数患者可见细胞浆着色。采用染色强度和阳性细胞百分比综合评定阳性结果。染色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞百分比：无阳性细胞为0分，阳性细胞＜25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度和阳性细胞百分比2项积分相加：0～3分为阴性，4～7分为阳性[7]。

1.3　统计学方法

数据分析采用SPSS 13.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用t检验；计数资料以率（%）表示，用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　VGLL4蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达

VGLL4蛋白的阳性表达主要位于细胞核，呈棕黄色颗粒，VGLL4在胃癌组织中多呈阴性表达（见附图），表达阳性率仅为17.3%（29/168），免疫组织化学法评分（1.45±0.15）分；而在癌旁组织中多呈阳性表达（见附图），表达阳性率为62.5%（105/168），免疫组织化学法评分（4.75±0.20）分。对VGLL4蛋白在胃癌和癌旁组织中的阳性表达率进行比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=71.698，P=0.000）；对VGLL4蛋白在胃癌和癌旁组织中的免疫组织化学法评分进行比较，经t检验，差异有统计学意义（t=171.092，P=0.000），VGLL4蛋白在胃癌组织中的表达低于癌旁组织。

2.2　VGLL4蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系

按性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、浸润深度、有无淋巴结及TNM分期进行分组，检测胃癌组织中VGLL4蛋白的表达。结果表明，VGLL4蛋白在深度浸润、有淋巴结转移及TNM分期较高的胃癌组织中表达较少（P＜0.01）。见附表。

附图　VGLL4蛋白在胃癌和癌旁组织中的表达　（SP×100）

附表　胃癌临床病理特征与VGLL4蛋白表达的关系

续附表

3　讨论

胃癌是一种常见的消化道恶性肿瘤之一，大多数胃癌患者发现时已到晚期，死亡率较高，预后较差。胃癌发生的分子机制是目前研究的热点，涉及众多癌基因和抑癌基因的表达，深入研究胃癌发生、发展的相关基因和蛋白产物，有助于发现新的靶点。

VGLL4是VGLL的家族成员之一，是最新发现的原癌蛋白YAP的一个致命对手。VGLL4通过与YAP竞争性结合TEAD4，可以抢先一步控制YAP的活性开关，从而抑制YAP的活性来抑制肿瘤细胞生长。研究发现，VGLL4蛋白在胃癌组织中减少，且与肿瘤的发展、恶化呈负相关，是一种潜在的抑癌蛋白，且癌细胞对于该多肽抑制剂的敏感性与癌细胞本身的YAP/VGLL4蛋白比率呈正相关[8]。另有研究发现，miR-222与VGLL4表达呈负相关，生物信息学分析结合实验结果表明VGLL4是miR-222在胃癌细胞中的直接靶标[9]。目前国内该项研究甚少，河北省还未有相关方面的报道。

VGLL蛋白家族由2个TDU结构域组成，其抑癌作用主要来自于第2个结构域。Hippo信号通路是近年发现的一个重要抑癌通路，原癌蛋白YAP是其下游主要的效应分子。正常情况下，YAP不表达或者呈低表达，通路中的一些分子通过一系列磷酸化来抑制YAP的表达，一旦上游或者下游的分子发生突变，这些分子就会激活原先不表达或低表达的YAP，作为转录共激活因子与TEAD1结合，诱导靶基因表达，从而发挥调控细胞增殖和凋亡、上皮间质化转移与癌变的作用，产生肿瘤[10-12]，因此YAP蛋白的表达与胃癌、肺癌等多种癌症密切相关，是肿瘤治疗的潜在分子靶点，因此靶向YAP的抑制剂可能会更有效、更直接地纠正失调的Hippo信号通路，杀死肿瘤。研究者解析VGLL4与TEAD4形成复合物的三维结构，并发展针对YAP的多肽类抑制剂，结果显示，该多肽类抑制剂能有效抑制胃癌细胞的增殖及肿瘤的生长[8]。

本研究结果发现，VGLL4在胃癌中的表达较癌旁组织减少，且VGLL4蛋白在深度浸润、有淋巴结转移及TNM分期较高的胃癌组织中表达较少，提示胃癌组织中VGLL4低表达与胃癌患者预后差相关，是一种潜在的抑癌蛋白。综上所述，胃癌组织中VGLL4的检测可以反映肿瘤细胞的侵袭、增殖及转移情况，可以在一定程度上反映胃癌的生物学特征，VGLL4可以通过中断YAP-TEADs相互作用，来抑制肿瘤的生长，为YAP驱动的肿瘤提供新的治疗策略[13]。

参 考 文 献：

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