不同稀释液配方对种猪精子活力的影响

谭晓山，李 俊，李 平，尹杨莎，陈光候，李鹏程，陈大芳，龙清孟

（贵州省种畜禽种质测定中心，贵州 贵阳 550001）

在养猪生产中广泛应用猪人工授精技术可有效地提高良种利用率，充分利用杂种优势，减少疾病的传播，克服时间和区域的差异，节省人力、物力、财力，提高经济效益[1]。影响精液保存效果的因素有很多，除了公猪精液本身的品质这个最直接的原因外，稀释液的品质也是影响精液保存效果的直接原因[2-3]。为研究不同稀释液配方对不同种猪精液保存效果的影响，本试验选择了《猪常温精液生产与保存技术规范》（GB/T 25172—2010）中的 4种稀释液配方，以便筛选出对杜洛克种猪和大约克种猪精液保存效果最佳的配方。

1 材料与方法

1.1 试验动物

选择体况良好、无繁殖疾病的杜洛克种公猪与大约克种公猪各3头作为试验动物。

1.2 试验时间与地点

试验时间2017年11月，试验地点位于贵州省纳雍县骔岭镇贵州雾翠茗香生态农业开发有限公司，平均海拨1 970.9 m，采样时气温约为8℃。

1.3 仪器设备

全自动精液质量分析系统（德国Minitube）、移液器（Eppendorf）、正置显微镜（奥林巴斯）、水浴锅、17℃恒温箱、高压灭菌锅等。

1.4 稀释液配方

4种不同稀释液配方组成详见表1。

表1 不同稀释液配方组成 g/L

1.5 试验方法

于当地时间上午11：00左右，待气温上升后通过人工采精方法收集2个品种种公猪精液，并立即进行活力等检测，然后按照1∶2的比例进行3倍稀释，稀释液提前置于37℃水浴锅中预热，以减少对精子的刺激。精液样品稀释完毕后，立即置于17℃样品运输箱（车载冰箱）中运回实验室。

分别于17℃保存后的24 h、48 h、96 h，通过全自动精子质量分析系统对种猪精液进行活力检测，载玻片、移液器吸头等提前置于37℃恒温加热板上预热。精子活力（前进式活力）以呈前进运动精子所占的百分率表示[4]。

为检测稀释液灭菌处理对种猪精液保存效果的影响，于采精后分别用灭菌与未灭菌的稀释液稀释保存种猪精液，并在17℃保存24 h后进行活力检测。稀释液灭菌条件为120℃、高压（1.2 Mpa）条件下20 min。

2 结果与分析

2.1 种猪原精液质量

杜洛克、大约克种猪精液质量，检测结果详见表2。

表2 种猪原精液质量

2.2 不同稀释液对杜洛克种猪精子活力的影响

2.2.1 杜洛克种猪24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下对杜洛克种猪精子活力进行检测，4种配方对精子活力（前进式活力）的影响均差异不显著。其中，配方4的精子前进式活力和快速前进活力最高，分别为（70.60±5.94）%、（27.70±3.64）%；配方 2 的最低，分别为（63.91±1.92）%、（15.18±0.35）%，详见表3。

表3 杜洛克种猪24 h精子活力

2.2.2 杜洛克种猪48 h精子活力 对保存48 h后的杜洛克种猪精子活力检测，除环状移动活力外，其余指标均差异不显著。其中，配方4的精子前进式活力和快速前进活力最高，分别为（64.99±20.68）%、（27.83±19.08）%；配方2的最低，分别为（37.95±1.84）%、（4.56±3.71）%；与24 h检测结果一致，详见表 4。

表4 杜洛克种猪48 h精子活力

2.2.3 杜洛克种猪96 h精子活力 在96 h检测时，4种配方对杜洛克种猪精子各指标差异均不显著，但配方4保存效果最好，前进式活力和快速前进活力分别达（53.44±24.00）%、（18.88±19.75）%；配方 2效果最差，分别只有（17.00±11.77）%、（4.56±4.35）%；这与24 h、48 h检测结果一致，详见表5。

表5 杜洛克种猪96 h精子活力

2.3 不同稀释液对大约克种猪精子活力的影响

2.3.1 大约克种猪24 h精子活力 精液保存24 h后，在37℃下对大约克种猪精子活力进行检测，4种配方对精子前进式活力和快速前进活力的影响均差异不显著。其中，配方2的精子前进式活力最高，为（76.82±4.95）%；配方 4的最低，为（62.26±17.43）%；这与杜洛克种猪相反。配方3的精子快速前进活力最高，为（39.13±14.32）%；配方 1的最低，为（19.50±4.67）%；这与杜洛克种猪结果不一致，详见表6。

表6 大约克种猪24 h精子活力

2.3.2 大约克种猪48 h精子活力 对保存48 h后的大约克种猪精子活力检测，4种配方对精子活力的影响均差异不显著。但配方4的精子前进式活力和快速前进活力最高，分别为（56.84±14.99）%、（22.52±6.26）%，与杜洛克种猪一致。配方3的精子前进式活力最低，为（47.12±37.70）%；配方 1的精子快速前进活力最低，为（11.09±5.51）%，与 24 h检测结果一致，详见表7。

表7 大约克种猪48 h精子活力

2.3.3 大约克种猪96 h精子活力 96 h检测精子活力发现，4种配方对大约克种猪精子前进式活力和快速前进活力的影响均差异均不显著。但配方2的精子前进式活力和快速前进活力最高，分别为（45.90±38.67）%、（17.29±15.61）%；配方 4的最低，分别只有（19.42±8.42）%、（4.94±0.15）%，详见表 8。

表8 大约克种猪96 h精子活力

2.4 稀释液灭菌处理对精子活力的影响

从表9中可以看出，4种配方经高温灭菌处理后，在鲜精的稀释倍数、保存环境及条件一致的情况下，其精子前进活力和快速前进活力均显著低于未灭菌的4种配方。4种配方灭菌处理后，配方3的精子前进活力和快速前进活力最高，分别为（16.19±0.96）%、（6.19±1.44）%，这一点与未灭菌处理的检测结果基本一致。

表9 稀释液灭菌处理对大约克种猪精子活力的影响

3 讨论

3.1 不同稀释液的精液保存效果

96 h内，4种配方保存精液对精子前进式活力和快速前进活力的影响均差异不显著。不同配方对两个品种精液保存效果各不同。

对杜洛克种猪，24 h内、48 h内和96 h内的精子前进式活力和快速前进活力，配方4的保存效果均是最好，配方2的保存效果最差。在实际生产中，低温保存的精液要求精子活力（呈前进运动精子所占的百分率）不低于0.6[5]（百分制则为60%），因此，4种配方对杜洛克种猪精液保存效果在24 h时均是有效的，在48 h时只有配方4能满足要求，96 h时则均达不到要求。对大约克种猪，24 h时和96 h时，配方2保存效果最佳；48 h时，配方4效果最好。本次试验发现48 h、96 h时，4种配方保存的精子前进式活力均达不到0.6。不同配方对不同品种猪的精液保存效果上存在差异的原因可能与品种有关，具体原因有待于进一步研究。

3.2 稀释液灭菌的精液保存效果

4种稀释液配方高温灭菌后保存的精子前进式活力和快速前进活力均显著低于未灭菌的稀释液，且稀释液经灭菌后由无色变为棕黄色和棕红色，可能是由于葡萄糖高温灭菌时分解产生5-羟甲基糠醛（5-羟基呋喃甲醛）导致的，且溶液的色度与5-羟甲基糠醛含量成正比[6]；而精子是通过糖酵解过程将葡萄糖、果糖等六碳糖分解为乳酸而获得能量的，且自身缺乏糖类物质[4]，从而导致灭菌后的稀释液保存效果显著低于未灭菌的稀释液保存效果。

因此，在实际生产过程中，添加有葡萄糖等糖类的稀释液应尽量避免高温灭菌，或灭菌后再添加糖类等物质，以免引起相关物质变性而影响精液保存效果。

4 结论

依据GB/T 25172—2010《猪常温精液生产与保存技术规范》中的4种稀释液配方配制的稀释液，在24 h内均可以用于杜洛克和大约克种猪原精液的稀释和配种。因此，建议在实际生产过程中杜洛克和大约克猪分别选择配方4和配方2用于种猪精液稀释和配种，且为了保证良好的输配效果，低温保存时间不宜超过24 h。同时，配制的稀释液不用高温高压灭菌处理，以免引起相关物质变性而影响保存效果。

[1]邵顺宁，尹庆宁.影响猪人工授精效果的原因及对策[J].当代畜禽养殖业，2013（5）：34-36.

[2]王龙.不同稀释液保存公猪精液的效果试验[J].浙江畜牧兽医，2016，41（4）：3-5.

[3]白永成.浅述影响猪人工授精效果的原因及技术要点[J].现代畜牧科技，2017（6）：71.

[4]杨利国主编.动物繁殖学[M].第2版.北京：中国农业出版社，2010：105.

[5]时洪君.猪的人工授精操作要点[J].现代畜牧科技，2015（4）：49.

[6]温玉麟.葡萄糖溶液的稳定性[J].药学通报，1959（12）：642-644.