中草药益生菌复合制剂对生长猪血液常规、血清生化和血清免疫指标的影响

段明房， 胡红伟， 闫凌鹏，麻啸涛，杨京娥，党亚朋， 李自茹， 赵　帅，周振红

（1.山西大禹生物工程股份有限公司，山西芮城044600；2.平陆县宏远养猪专业合作社，山西平陆044300）

中草药用于动物保健，具有在动物体内及其产品中无毒副残留，对机体不产生耐药性等优势（王冉，2015），同时中草药资源丰富，使用成本不高。蒲公英和鱼腥草均为药食同源药材，且具有清热解毒、抗菌、抗炎的功效。蒲公英中的多种活性成分，如绿原酸、糖类、胆碱以及皂苷等，具有显著抑菌、抑制肿瘤、抗氧化、抵抗炎症等功效（林云等，2011；Budzianowski等，1997）， 而且能够明显地促进胃肠蠕动和泌乳 （刘杰等，2010；李玲等，1998）。鱼腥草和蒲公英类似，性辛，味微寒，具有清热解毒、消痈排脓和利尿通淋等功效（孙谦等，2014）。研究报道，切除脾脏小鼠灌胃鱼腥草素能增强腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高血清溶血素水平，表明鱼腥草素可以增强脾切除致免疫功能低下小鼠的特异性、非特异性免疫功能（邵兰等，1999）。刘志昌等（2015）研究表明，合成鱼腥草素能提高肉鸡免疫器官指数、血清中白细胞介素-2、4含量和抗体滴度。另外，大量研究表明，益生菌具有提高动物免疫器官指数，增强血液免疫因子的活性，加强动物机体综合免疫能力的作用（刘辉等，2015；刘虎传等，2012）。但中草药和益生菌共同作用对动物机体免疫影响的报道较少，因此本研究以蒲公英和鱼腥草等中草药材为主体，复配益生菌，研究复合制剂对生长猪血液常规、血清生化和血清免疫指标的影响，为中草药和益生菌的综合开发提供一定参考。

1　材料与方法

1.1试验材料中草药益生菌复合制剂 （活抗，HK）由山西大禹生物工程股份有限公司生产。HK是以蒲公英（62%）、鱼腥草（23%）等中草药材细粉碎以后与粪肠球菌、枯草芽孢杆菌和酵母细胞壁多糖等混合而成。除中草药材以外产品主要成分及卫生指标见表1。

1.2试验设计试验选取体重为 （55±5）kg的健康杜×长×大三元杂交猪100头，随机分为对照组和试验组两组，每组5个重复，每个重复10头猪。对照组饲喂玉米豆粕型基础日粮，试验组在每1000 kg基础日粮中加入3 kg HK。饲养管理按照试验场日常管理进行，试验周期40 d。

表1　HK主要组成成分及卫生指标

试验结束当天，每个重复随机选 1头猪，共10头猪，前腔静脉采血，先用普通真空采血管采血 5 mL（3500 r/min离心 5 min，分离血清，保存在-20℃ 冰箱），用于测定血清指标，然后用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝管采血5 mL，用于血液常规指标检测。

基础日粮参考中国猪饲养标准 （NY/T 65-2004）中的生长育肥猪标准设计，日粮组成及营养水平见表2。

表2　日粮组成及营养水平（风干基础）

1.3指标测定及方法

1.3.1血常规指标、血清生化指标检测样品送至芮城县中医院检测。

白细胞、淋巴细胞、中间细胞、粒细胞、淋巴细胞百分比、中间细胞百分比、粒细胞百分比、红细胞、血红蛋白、平均血红蛋白浓度、平均血红蛋白含量、红细胞平均体积、红细胞分布宽度CV、红细胞分布宽度SD、红细胞压积、血小板、血小板平均体积、血小板分布宽度、血小板压积、大血小板比率用全自动血液细胞分析仪检测。

丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白、白球比、尿素氮、葡萄糖、钙用全自动生化分析仪检测。

1.3.2血清免疫指标检测免疫球蛋白A、M、G，α-肿瘤坏死因子 （TNF-α）、β-干扰素 （IFN-β）、CD3、CD4、白细胞介素-2（IL-2）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）用 ELISA 方法检测，试剂盒由上海纪宁实业有限公司提供；酶标仪（Multiskan FC）为赛默飞世尔科技（中国）有限公司生产。

1.4统计分析采用Excel和SAS 9.0对数据进行计算和方差分析。

2　试验结果与分析

2.1HK对生长猪血常规指标的影响从表3可知，在生长猪饲料中添加HK后血小板压积显著下降了48.20%（P＜0.05），但是对其他血常规指标没有显著性影响。

表3　HK对生长猪血常规指标的影响

2.2HK对生长猪血清生化指标的影响从表4可知，生长猪饲料中添加HK组血清中丙氨酸氨基转移酶和白蛋白浓度提高58.58%和13.80%（P＜0.01）；血清白球比显著提高 19.40%（P＜0.05）；但是血清葡萄糖浓度显著下降了21.24%（P＜0.05）。然而对其他指标没有显著影响。

表4　HK对生长猪血清生化指标的影响

2.3HK对生长猪血清免疫指标的影响从表5可知，在生长猪饲料中添加HK后，血清中免疫球蛋白M含量提高了15.27%（P＜0.05）；白细胞介素-4、白细胞介素-6、β-干扰素的含量分别极显著提高了 33.32%、33.30%、76.77%（P ＜ 0.01）；但是血清中CD3含量显著降低了 11.19%（P＜0.05）。另外，其他指标两组之间差异不显著。

表5　HK对生长猪血清免疫指标的影响

3　讨论

3.1HK对生长猪血常规指标的影响血液中各种生化组分是新陈代谢的物质基础，其含量的变化可反映动物机体内新陈代谢机能和生理活动的规律。影响这些指标变化的因素也很多，例如，运动、饮食、疾病以及一些药物等。

研究表明，药物在消化道消化吸收后，可通过血液循环输送到各脏器以及组织，药物的功能组分可以利用影响造血功能、激素分泌及直接破坏血细胞等方式致使血细胞数量或形态改变，而且有些是可逆的（王付等，2015）。血小板在身体正常状态下的数量及形态分布变化较小，其功能主要表现在止血、血栓形成、伤口闭合、炎症发生等方面。胡兴义等（2017）研究证实，给哺乳仔猪灌服复合益生菌制剂可以显著提高血小板压积（PCT），但血小板平均体积（MPV）和血小板总数（PLT）虽有提升趋势，但差异不显著。由于PCT＝MPV×PLT，因此PCT变化应该是PLT或MPV变化所致，本试验结果表明，生长猪饲料中添加HK后，显著降低了PCT，但PLT或MPV变化不显著，而且对其他血常规指标均没有显著性影响。因此，HK导致的PCT变化对动物机体实质性影响还需进一步研究。

3.2HK对生长猪血清生化指标的影响血液生化指标可以反映动物各组织器官的功能状态、营养代谢水平和生产性能。总蛋白、球蛋白、白蛋白、白球比、天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶等指标主要可反映机体的肝功能健康状况；尿素氮可反映机体肾功能健康状态和蛋白质代谢状况。血清白蛋白的生理功能主要体现在维持胶体渗透压，体内代谢物质运输、免疫、修复受损组织等方面，而且血清白蛋白含量与动物生长速度呈正相关（周洪松等，1994）。血清球蛋白含量反映了动物机体的免疫水平。丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶是广泛存在于动物线粒体中的重要氨基酸转氨酶，其活性变化可以反映肝细胞和心脏细胞受损伤程度。血清丙氨酸氨基转移酶可参与机体蛋白质新陈代谢的酶，可以促进机体内蛋白质氨基酸转化。机体未受到损伤时，血清丙氨酸氨基转移酶浓度很低，且非常灵敏。当心脏和肝脏组织细胞受损时，血清丙氨酸氨基转移酶大量进入血清，因此活性升高。但一般认为，当乙肝患者丙氨酸氨基转移酶升高到正常值上限的2倍以上时才有诊断价值 （吕学琴等，2012）。

研究发现，鱼腥草和蒲公英均具有抗炎作用，能够有效减轻机体损伤（陈婧等，2014；杜军英等，2012）。然而本试验中，添加HK后，猪血清中丙氨酸氨基转移酶活性显著提高了58.58%，但没达到对照组上限的2倍，说明这种变化是非病理性的，原因可能是中草药和益生菌共同作用促进了丙氨酸氨基转移酶分泌。另外，血清中丙氨酸氨基转移酶活性显著提高能够促进氨基酸代谢，进而提高蛋白质合成的速率，同时白蛋白和白球比水平均显著提高，进一步说明了HK可以促进营养物质吸收利用。然而，血糖浓度显著下降了21.24%，原因可能是蒲公英和鱼腥草能够阻碍胰岛素生成以及抑制肠道中葡萄糖吸收，进而导致了血糖浓度有所降低（李雪石等，2013；赵坚华等，2010；刘艳旭等，2010）。总之，在生长猪饲料中添加HK后可以促进营养物质的吸收。

3.3HK对生长猪血清免疫指标的影响体液免疫是机体特异性免疫的一个重要组成部分，抗体对病原及毒素清除、免疫调节、吞噬功能等作用均与免疫球蛋白含量成正相关关系。血清中Ig A、Ig G、Ig M含量的多少决定机体体液免疫水平。Ig M主要由B细胞产生，是B细胞表面表达分泌最早的抗体，而且在机体早期免疫防护中起重要作用（杨帆等，2011；Nordtveit等，1994）。杨锐等（2013）研究证实，生长肉兔日粮中添加蒲公英多糖可以提高免疫蛋白M、G含量。另外，研究表明益生菌也具有提高猪免疫水平功效，在猪日粮中添加益生菌可以显著提高免疫球蛋白A、M和G含量（刘辉等，2015；王博等，2015；刘虎传等，2012）。本试验中，添加HK显著提高了免疫蛋白M的浓度，可能是由于鱼腥草和蒲公英中鱼腥草素、绿原酸、多糖等活性成分具有一定的免疫调节能力，协同酵母细胞壁多糖（Shen等，2009），益生菌及其代谢物共同作用动物机体，从而提高了免疫蛋白M的含量。

CD3和CD4分子均是T细胞重要的表面标志，也是T细胞系发挥作用的最早信号（Edward等，1996）。因此CD3和CD4分子含量可以间接反映机体的细胞免疫水平。CD3＋、CD4＋T淋巴细胞在辅助B淋巴细胞免疫应答、调节机体免疫反应、自身免疫、超敏反应、调节炎症和抗肿瘤等方面发挥着重要作用（Swain 等，2012；李晓英等，2012；Zhu等，2008； Nurieva等，2008；Veldhoen 等，2008）。 研究表明，添加蒲公英多糖，可以提升鸡血液T淋巴细胞表达和CD4＋T淋巴细胞水平（王坤等，2014；陈文英等，2011）。另外，黄俊文等（2005）在断奶仔猪使用甘露寡糖和纳豆菌复合制剂，显著提高了CD3＋、CD4＋T淋巴细胞含量。然而本试验在生长猪饲料中添加HK后显著降低了CD3含量，而CD4分子没有显著性变化，可能与中草药使用量和益生菌种类有关，机理需要进一步研究。

细胞因子在免疫调节中起重要作用。IL-2主要促进T细胞增殖、介导细胞免疫和炎症反应。IL-4和IL-6具有刺激B细胞生长增殖，产生免疫球蛋白，从而促进体液免疫应答功能（Smith等，2013；Diehl等，2000），同时能够抑制 Th1型细胞的分化而促进Th2型细胞分化，起免疫抑制的作用。干扰素是机体受到灭活的或活的病毒作用于易感细胞后，由易感细胞基因组编码而产生的一种多功能活性糖蛋白。IFN-β可以通过抑制某些病毒的吸附、脱壳、转录、释放等不同环节来起到抗病毒作用。炎症和免疫是机体对外界刺激的两种不同机理的应答，两者虽然开始时间不同，但在炎症发生的部位、细胞、分子水平上是密切结合、共同作用的。鱼腥草、蒲公英等中草药对免疫调节是个双向过程，既具有促进抗体分泌，提高免疫功效，又可以抑制炎症的发生 （Du等，2012；杜军英等，2012；Kim等，2009）。本试验结果表明HK可显著提高血清中IL-4、IL-6和IFN-β含量，说明HK具有促进B细胞分泌，抑制炎症过度反应的作用，又可以显著提高血清中IFN-β含量，增强动物机体抗病毒的能力。总之，在生长猪饲料中添加HK后可以提高猪免疫力，而且具有双向调节功能。

4　结论

在生长猪日粮中添加0.3%HK不仅对其血液常规没有实质影响，而且能够促进营养物质转化，提高动物免疫因子含量。

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