电针“长强”穴对缺血缺氧脑损伤大鼠行为学的影响※

黄倩茹　萨喆燕　潘晓华　兰彩莲　万　隆　许金森

新生儿缺血缺氧性脑病（Hypoxic-Ischemic Brain Damage，HIBD）指新生儿在胎儿时期和或出生后因为窒息而导致的颅脑损伤，是引起新生儿死亡和婴幼儿神经系统功能障碍的主要因素[1-3]。研究表明，发展中国家HIBD发病率达每千名活产婴儿26例，约20%～25%严重HIBD引起死亡，约25%严重HIBD的新生儿出现永久性的神经功能障碍[4]。运用行为学指标可对神经功能的损伤进行测评，以反映神经系统损伤的程度、部位及治疗效果。近些年，针灸在儿童缺血缺氧性脑损伤的治疗中取得一定疗效，越来越多学者通过研究动物模型的行为学表现，为HIBD新生儿的治疗提供一定的理论依据。在长期的临床过程中，我们发现针刺“长强”穴可改善发育迟滞等脑病患儿的临床症状[5]。因而本实验拟采用电针“长强”穴对HIBD新生大鼠进行干预，观察电针“长强”穴对HIBD大鼠悬吊及倾斜板试验的影响，探讨“长强”穴临床治疗HIBD新生儿的理论基础。

1　材料与方法

1.1实验动物及分组 福建省中医药研究院实验动物中心所提供的购自福建医科大学实验动物中心的7日龄SD仔鼠，体质量（15±5） g，雌雄不限 (许可证号SCXK(闽)2012-0001)。仔鼠饲养于恒温（22℃）、恒湿（50%） 及每日12 h日光灯明暗交替 (明：6:00～18:00，暗：18:00～6:00)的实验室中。待仔鼠生长至7日龄时，予以称重，去除体重过低鼠 (＜12 g)，随机选取SD仔鼠8只予分离左侧颈总动脉但不结扎剪断，亦不做缺氧处理作为假手术组，余仔鼠予以左侧颈总动脉结扎、剪断及缺氧后制备缺血缺氧大鼠，将造模成功的仔鼠分为模型组、长强组及非穴组各8只。

1.2主要仪器及试剂 手术器械（北京医疗器械厂），恒温箱水浴箱（型号700，中国），SDZ-II型华佗牌电子针疗仪（苏州医疗用品厂有限公司），自制常压舱：60 cm×50 cm×40 cm，8%O2-92%N2混合气（福州华鑫达工业气体有限公司）。

1.3造模 依照Rice法[6]，运用Nakajima等[7]改良的动脉结扎法建立缺血缺氧动物模型。在保持室温25℃左右的环境下，腹腔注射10%水合氯醛将新生7日龄SD大鼠予以麻醉，将大鼠仰卧位四肢固定于小手术板上，用75%酒精予大鼠颈部皮肤消毒后行颈前中切口，无菌条件下分离大鼠左侧颈总动脉，运用外科7-O灭菌手术丝线双道结扎大鼠左侧颈总动脉后，将丝线中间剪断，予以伤口缝合并再次消毒皮肤后将大鼠放入恒温箱(32.5℃)2 h。随后将手术大鼠放入底层铺有钠石灰(以吸收CO2和湿气)并置于37℃电热恒温水浴中的常压缺氧舱中（8%O2-92N2混合气） 2 h。后再置于室温下约1～2 h，待其状态尚可后放回母鼠笼行母乳喂养。假手术组只分离左侧颈总动脉但不结扎剪断，缝合皮肤后不做缺氧处理，后与模型组同时返回母鼠笼中饲养。

1.4治疗方法 长强组仔鼠长至第10日龄（postnatal 10 day，PN10），用布和皮筋固定，用0.25×13 mm毫针 (双极针)直刺长强穴（长强穴：参照《实验针灸学》[8]，当尾骨端和肛门连线中点）深度7.8 mm，电针接在双极针两端，刺激20 min（连续波，频率为2 Hz，强度为2 mA），连续治疗10 d为1个疗程，共1个疗程；非穴组取右胁肋下缘一横指处，余操作同长强组；模型组在相同条件下饲养，除布和皮筋固定，不予干预。

1.5指标检测及方法

1.5.1悬吊试验 干预前后在距桌面高45 cm处固定玻璃棒（0.5 cm直径），令大鼠的前腿抓住玻璃棒后开始计时，记录其掉下的时间，单位：秒（S）。

1.5.2倾斜板试验 干预前后将大鼠头部垂直朝下放置于45°斜面上，同时记录大鼠转头向上135°时间，单位：秒 （s)。

1.6统计学方法 应用SPSS 19.0软件对实验数据进行统计，P＜0.05为差异有统计学意义，P＞0.05为差异无统计学意义。满足正态分布者采用单因素方差分析，不满足正态分布者采用非参数检验。

2　结果

2.1悬吊试验 干预前：与假手术组相比，模型组、非穴组及长强组的悬吊时间均下降，有显著性差异 (P＜0.05)。干预后：与假手术组相比，模型组及非穴组的悬吊时间下降，有显著性差异 (P＜0.05)，长强组的悬吊时间下降，差异无统计学意义 (P＞0.05)；与模型组相比，长强组的悬吊时间升高，有显著性差异 (P＜0.05)，非穴组的悬吊时间上升，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。

表1　悬吊试验　（x±s，s）

2.2倾斜板试验 干预前：与假手术组相比，模型组、长强组及非穴组的转头时间均上升，有显著性差异(P＜0.05)。干预后：与假手术组相比，模型组、非穴组及长强组的转头时间上升，有显著性差异 (P＜0.05)；与模型组相比，长强组的转头时间下降，有显著性差异 (P＜0.05)，非穴组的悬吊时间上升，差异无统计学意义 (P＞0.05)。见表2。

表2　倾斜板试验　（x±s，s）

3　讨论

随着现代医疗的先进性，HIBD的死亡率较前明显下降，然其后遗症的出现率却逐渐上升。HIBD是一个复杂的损伤过程，其包括了炎症级联反应、能量代谢障碍及兴奋性氨基酸的释放等，常表现为智力和运动发育受损、皮质盲、神经性听力损失、智力残疾、脑性麻痹、癫痫和脑瘫等[9-10]。尽管大部分HIBD患者皆经临床治疗，但仍有约40%重度HIBD患儿在18～24月龄时出现神经性残疾[12-13]。因而如何有效治疗HIBD患者成为社会热点话题。

中医学认为缺血缺氧脑损伤的病因在于父母精气血亏虚引起胎儿先天之气欠缺，进而导致胎气不足。而脑髓损伤等后天的失宜，更进一步促使本证发生及发展。《古今医统·五软五硬》云：“日月不足而生者，或服坠胎之剂不去，而竟成胎者，耗伤真气”，表明HIBD的病机为脾胃亏损、气血亏虚及肝肾不足。中医学疗法中，以针灸最具代表，其可疏通机体经气，调整机体气血，进而增加组织器官血供，促使脑组织功能的代偿和恢复。在长期的临床过程中，我们发现针刺“长强”穴可改善发育迟滞患儿的临床症状疗效显著[4]。《难经》云：“督脉者，起于下极之俞……入属于脑。”长强穴即“下极之俞”，提示古人认为长强是督脉起始穴，且督脉同脑密切相关；脏腑精微多通过督脉上行于脑[14]，若督脉亏虚，则气血、津液未能上行入脑，造成脑髓的空虚[15]。然而由于其基础研究尚未完善，临床推广欠佳。

HIBD是一种脑功能障碍的神经系统疾病[16]。行为学的检测，是神经病学疾病诊断及科学研究的重要组成。运用行为学指标对神经功能的损伤进行测评，以反映神经系统损伤的程度、部位及治疗效果。越来越多学者通过研究动物模型的行为学表现，为HIBD新生儿的治疗提供一定的理论依据。如，马惠芳、吴至凤等[17-18]研究表明，HIBD大鼠予针刺后神经症状有显著改善。众所周知，悬吊试验和斜坡试验是检测动物运动协调能力较灵敏的行为学指标[19]；Pazaiti等[20]学者的研究结果表明，HIBD可引起大鼠模型肌张力的异常及平衡协调能力的改变，表现为抓握悬吊棒时间及倾斜板转头时间异常。因而，本研究建立缺血缺氧脑损伤动物模型，通过“长强”穴的干预观察其悬吊及倾斜板试验的改变，进而分析“长强”穴对缺血缺氧大鼠行为学的改善作用。

干预前，本实验中悬吊及倾斜板试验结果显示：与假手术组相比，模型组、长强组及非穴组的时间有显著性差异 (P<0.05)，提示缺血缺氧脑损伤大鼠存在平衡协调和肌张力异常等神经运动功能改变，这可能与缺氧缺血的易损部位大脑皮层和海马的损伤存在联系。上述结果与Pazaiti等[19]学者研究结果一致。干预后，本实验中悬吊试验结果显示：与假手术组相比，模型组及非穴组的悬吊时间下降，有显著性差异 (P<0.05)，长强组的悬吊时间下降，差异无统计学意义(P>0.05)；与模型组相比，长强组的悬吊时间升高，有显著性差异 (P<0.05)，非穴组的悬吊时间上升，差异无统计学意义 (P>0.05)，提示电针“长强”穴可改善缺血缺氧脑损伤大鼠的肌张力，促使其趋于正常，而非经非穴刺激几乎无疗效，进一步验证了经穴“长强”的疗效性。另本实验倾斜板试验结果显示：与假手术组相比，模型组、非穴组及长强组的转头时间上升，有显著性差异 (P<0.05)；提示与模型组相比，长强组的转头时间下降，有显著性差异 (P<0.05)，非穴组的转头时间上升，差异无统计学意义 (P>0.05)，亦提示了电针“长强”穴可改善缺血缺氧脑损伤大鼠的平衡协调能力，但在观察期内其疗效无悬吊显著，而非经非穴刺激几乎无疗效，进一步验证了经穴“长强”的疗效。综上我们推断，电针“长强”穴可改善缺血缺氧大鼠的行为学能力，为缺血缺氧疾病的有效治疗方式之一。

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