中医三期治则对骨折愈合影响的机制研究

刘思景 郑臣校 李绪松 郑雨中 黄志全 谭仁斌

临床骨折是外科常见病和多发病, 尤其是近年随着高层建筑不断增加、各类交通工具广泛普及、大型机械的广泛应用, 使得骨折的发生率呈现逐年上升的趋势［1］。我国中医历史悠久且在治疗骨折上更是独具特色, 并且获得了广泛的认可和青睐［2］, 为此本院开展了中医三期治则对骨折愈合影响的作用机制的观察, 现报告如下。

1　材料与方法

1.1试验动物 选取健康雄性新西兰家兔150只, 饲养7 d后采用随机数字法分为治疗组(60只)和对照组(90只), 其中一期治疗组30只, 二期治疗组20只, 三期治疗组10只,阳性对照组30只, 阴性对照组30只, 空白对照组30只。

1.2方法

1.2.1建立骨折模型 除空白对照组家兔外, 所有家兔均采用特制骨锯建立骨折模型, 不做任何固定, 切口采用生理盐水进行冲洗, 逐层缝合后分笼常规饲养, 术后同时给予青霉素40万IU肌内注射治疗, 1次/d。

1.2.2干预方法 采用本院自制中成药行三期治疗, 具体中成药构成为田七口服液、伤科九味健骨片、培元壮骨片,依据家兔桡骨中下段骨折愈合的组织学变化将骨折愈合分为三期, 即 ：术后第1～7天血肿机化演进期为一期(早期), 术后第8～28天骨痂形成期为二期(中期), 术后第 29～56天改造塑形期三期(后期)。其中一期治疗组家兔均给予田七口服液灌胃治疗, 第8天停药；二期治疗组家兔一期给予田七口服液灌胃治疗, 二期给予伤科九味健骨片治疗, 术后第29天停药；三期治疗组家兔一期给予田七口服液灌胃治疗,二期给予伤科九味健骨片治疗, 三期给予培元壮骨片治疗；阳性对照组骨折愈合不进行分期均给予接骨七厘水溶液治疗56 d；阴性对照组、空白对照组均给予蒸馏水灌胃56 d。治疗组家兔每日给药中成药剂量为对人等效剂量的2倍, 分早晚2次灌胃。

1.2.3标本处理 所有家兔分三批采用栓塞法进行处死,其中第一批次：术后8 d治疗组、对照组各组各10只；第二批次：术后29 d二期治疗组、一期治疗组、对照组各组各10只；第三批次：术后57 d各处死10只。

1.3观察指标及判断标准 观察指标：①对各组家兔双侧桡骨进行DR拍摄, 仔细阅片分别依据断端边缘、骨痂量、骨痂边缘对骨折愈合情况进行评价记分；②取左侧桡骨标本采用免疫组化、原位杂交法观察各组骨折愈合不同时间点骨 痂 FGF-2、BMP-2、Osx、FGF-2mRNA、BMP-2mRNA、OsxmRNA的表达, 采用纤维图像采集系统对免疫组化、原位杂交片骨折折断断附近组织及骨髓组织进行高倍观察, 采用ImageProphis5.0图像分析系统测定阳性表达细胞平均光密度值(MOD)。

判断标准：分别在试验第1天、术后8 d、29 d和57 d对所有研究组进行上述骨痂FGF-2、BMP-2、Osx、FGF-2mRNA、BMP-2mRNA、OsxmRNA的表达数据进行采集, 其中每组以试验第1天数据为基准值, 随后各时间点各组与其基准值进行统计学比较, 以差异有统计学意义(P＜0.05)为见效, 以差异无统计学意义(P＞0.05)为无效, 比较分析各时间段每组见效情况。

1.4统计学方法 应用SPSS19.0统计学软件对本次研究数据进行统计分析。对骨折愈中每种组织MOD值采用一般线性模型重复测量法进行组间差异比较, 采用LSD法对各时间点组间差异进行比较, 计量资料以均数±标准差表示,采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

①术后8 d, 一期治疗组与阳性对照组见效情况比较差异无统计学意义(P＞0.05)；一期治疗组与阳性对照组见效情况明显优于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05)；阴性对照组和空白对照组见效情况比较差异无统计学意义(P＞0.05)。②术后29 d, 二期治疗组见效情况明显优于一期治疗组、阳性对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；一期治疗组、阳性对照组见效情况比较差异无统计学意义(P＞0.05)；一期治疗组见效情况优于阴性对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；阳性对照组和阴性对照组见效情况比较差异无统计学意义(P＞0.05)。③术后57 d, 三期治疗组见效情况优于二期治疗组,二期治疗组见效情况明显优于一期治疗组、阳性对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；一期治疗组见效情况明显优于阴性对照组、空白对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)；一期治疗组见效情况与阳性对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05), 阳性对照组和阴性对照组见效情况比较差异无统计学意义 (P＞0.05)。见表 1。

表1　各组术后不同时间段见效情况比较(只)

3　讨论

中医治病的独到之处在于能够辨证论治, 而中医治疗骨折更是凭借分期辨证施治获得了认可并得以流传千年。宋代王怀隐等所著《太平圣惠方》认为骨折患者需要“补筋骨、益精血、通血脉”；明朝薛已的《正体类要》中便强调了骨折的整体疗法, 并提出“肢体损于外, 则气血伤于内, 营卫有所不贯, 脏腑由之不和”的观点。由此可见中医对于骨折的治疗主要集中于“痂去、新生、骨合”的动态过程中, 并开创性的将骨折的治疗分为早期、中期、后期［3］：其中针对骨折早期的气滞血瘀, 给予活血化瘀止痛；针对中期骨折患者的瘀去但未清、肿退但未消的特点, 给予接骨续筋和生新止痛之法；而骨折患者后期则由于久病而元气大伤, 骨虽和但未坚, 因此治疗思路在于固本培元, 以强筋壮骨, 并逐步使骨骼和周边组织开始恢复［4-7］。因此本研究对家兔一期给予田七口服液灌胃治疗, 二期给予伤科九味健骨片治疗, 三期给予培元壮骨片治疗。

现代医学也发现局部骨生长因子对骨折修复起着关键的调节作, 决定着骨折修复的速度与质量。其中作为广谱有丝分裂原的FGF-2, 是广泛存在于机体组织的一种多聚肽, 能促进来源于中胚层和神经外胚层细胞的分裂增殖, 具有趋化和迁移作用, 同时也能够对毛细血管内皮细胞的分裂增殖起到显著促进作用［8-10］。

综上所述, 中药对骨折端各类骨痴组织FGF-2、BMP-2、Osx具有明显的促进作用, 利用中医三期治则对骨折愈合不同阶段的各种组织均有不同的应用效果, 并且较其他形式的中医治疗方法具有较为明显的促进作用, 因此临床上对于骨折患者采取中医三期治则值得积极推广、应用。

［1］ 陈道振.中医骨折三期治疗对肱骨近端骨折术后的疗效观察.中国实用医刊, 2015, 42(1)：89-90.

［2］ 冯小庆.肱骨近端骨折术后中医骨折三期治疗的应用与临床疗效初评 .中国校医 , 2017, 31(6)：464.

［3］ 杨文才.中医骨折三期治疗对肱骨近端骨折术后的影响分析.临床医药文献电子杂志, 2016, 3(51)：10124.

［4］吴海斌, 张昊天.中医骨折分期治疗对骨折愈合bFGF、TGF-β、VEGF、BMP-2基因表达影响的实验研究.哈尔滨医药, 2016,36(3)：290-291.

［5］温建民, 高国庆, 杨大伟.骨折三期治疗对骨生长因子BMP-2 mRNA表达影响的实验研究.中国社区医师(医学专业半月刊),2009, 11(8)：3-4.

［6］毕锴, 温建民, 孙永生, 等.中医骨折三期治疗对家兔骨折愈合中VEGF与BMP-2表达影响的实验研究.中国中医基础医学杂志 , 2012(12)：1344-1347.

［7］ 高国庆.骨折三期治则对家兔骨折愈合过程中FGF-2mRNA,TGF-β1mRNA表达调控的研究.中国中医科学院 中国中医研究院, 2009.

［8］徐颖鹏, 温建民, 董建文, 等.中医骨折三期治疗对家兔骨折骨膜组织中VEGF及VEGF mRNA表达的影响.中国骨伤,2010, 23(2)：120-124.

［9］毕锴, 温建民, 孙永生, 等.中医骨折分期治疗对家兔骨折愈合过程中TGF-β与bFGF表达影响的实验研究.中国矫形外科杂志 , 2013, 21(4)：381-386.

［10］ 宋涛.中医骨折三期治疗对肱骨近端骨折术后的临床疗效观察.湖北中医药大学, 2013.