内蒙古紫草化学成分研究

廖矛川，姚　远，陈　凤，张雨馨

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

中国药典所载紫草为紫草科紫草属植物紫草(LithospermumerythorhizonSieb.etZucc.)、新疆紫草[Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst]和内蒙古紫草(ArnebiaguttataBunge)的干燥根[1], 传统中医认为其性甘、咸、寒,归心、肝经,具有凉血活血,解毒透疹的功效[3].紫草的化学成分主要为萘醌类、单萜苯酚及苯醌类、酚酸及其盐类、生物碱类、脂肪族及脂类化合物[4].现代药理研究发现紫草具有很好的抗炎、抗病毒、抗肿瘤、避孕及止血免疫调节等功能，对治疗艾滋病、癌症等具有积极疗效[5]. 目前已有学者对新疆紫草做了大量研究，但对内蒙古紫草的化学成分及生药学方面的研究很少，至今未见详细报道. 本实验中采用系统溶剂提取分离法，运用硅胶柱色谱，高效液相色谱等技术，从氯仿和乙酸乙酯萃取部位共分离得到6个化合物，通过现代波谱技术鉴定其结构分别为：3-乙酰齐墩果酸(1)、Jockinolide E(2)、Clavilactone A(3)、5,8-O-二甲基-11-脱氧阿卡宁(4)、5, 4′-二羟基-7-甲氧基-二氢黄酮(5)、Glabridin(6)(图1).

1　实验部分

1.1　材料与仪器

内蒙古紫草购于内蒙古自治区乌兰察布市，由中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为ArnebiaguttataBunge的干燥根.

核磁共振波谱仪(TMS内标,德国BrukerAM-600)，旋转蒸发仪(RE-52型)，高效液相色谱仪(UItimate-3000半制备型，美国Dionex公司)，色谱柱(YMC-Packed ODS-A,250×10 mm,日本YMC公司)，实验试剂(分析纯：国药集团化学试剂有限公司；色谱纯：美国Tedia试剂公司)，硅胶(柱层析用，青岛海洋化工厂分厂).

1.2　提取分离

内蒙古紫草干燥根约20 kg，粉碎，甲醇冷浸渗漏提取，得提取液，减压浓缩回收甲醇，得到干浸膏400 g左右. 浸膏用等质量超纯水溶解分散得混悬液，分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取. 将二氯甲烷部分萃取物过正相硅胶(200～300目)，环己烷-乙酸乙酯梯度洗脱(体积比分别为100∶0，50∶1，20∶1，15∶1，10∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5，1∶2，0∶100)，硅胶TLC检查，合并相同馏分，过中压ODS柱进一步分离，甲醇-水梯度洗脱，合并相同馏分，提取物经过半制备高效液相色谱仪，V(乙腈)∶V(水)=90∶10，纯化得到化合物1(5 mg)、2(20 mg)、5(12 mg). 将乙酸乙酯部分萃取物过正相硅胶，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱(体积比分别为100∶0，50∶1，30∶1，20∶1，9∶1，8∶2，7∶3，6∶4，5∶5，4∶6，3∶7，0∶100)，合并相同馏分，过中压ODS柱，甲醇-水梯度洗脱，合并相同馏分，提取物经过半制备高效液相色谱仪，V(甲醇)∶V(水)=80∶20，纯化得到化合物3(6 mg)、4(200 mg)、6(2.5 mg).

图1　化合物 1～6化学结构Fig.1　Structure of the compound 1-6

2　结构鉴定

化合物1白色粉末(丙酮),分子式C32H50O4，分子量为498.1HNMR (600 MHz, Acetone)δ5.24 (t,J= 3.6 Hz, 1H，12- H), 4.45 (dd,J= 11.5, 4.8 Hz, 1H，3- H), 1.19 (s, 3H，COCH3), 0.97 (s, 3H), 0.94(s, 3H), 0.91 (s, 3H), 0.87(s, 3H), 0.80(s, 3H).13CNMR(151 MHz, Acetone)δ178.83(C-28),170.75(COCH3), 144.94(C-13), 122.89(C-12), 81.00(C-3), 55.98(C-5), 48.30(C-9), 46.82(C-17), 46.74(C-19),42.50(C-14), 42.19(C-18), 40.12(C-8), 38.78(C-1), 38.31(C-4), 37.68(C-10), 34.41(C-21), 33.46(C-29), 33.33(C-22,7), 31.30(C-20), 28.41(C-15), 28.35(C-23), 26.22(C-17), 24.24(C-16), 24.08(C-11), 23.85(C-2), 23.71(C-30), 21.08(COCH3), 18.93(C-6), 17.55(C-26), 17.09(C-24), 15.74(C-25)，以上数据与文献[6]报道数据基本一致，鉴定为3-Acetyl oleanolic acid.

化合物2白色针晶(丙酮)，分子式C20H28O2，分子量为300.1HNMR(600 MHz, Acetone)δ6.40(s, 1H, H-14), 4.86(m, 1H，H-12ax), 2.00(d, J = 12.7 Hz, 1H), 1.77(d,J= 1.5 Hz, 3H, H-20),0.98(s, 3H, H-19), 0.92(s, 3H，H-17), 0.87(s, 3H，H-18).13CNMR(151 MHz, Acetone) δ 174.96(C-16), 156.83(C-13), 152.94(C-8), 116.56(C-15), 114.62(C-14), 76.21(C-12), 55.72(C-5), 52.50(C-9), 42.71(C-3), 42.13(C-10), 40.15(C-1), 37.55(C-7), 34.17(C-17), 34.10(C-4), 28.32(C-11), 24.58(C-6), 22.07(C-18), 19.78(C-2), 17.07(C-19)，8.28(C-20). 以上数据与文献[7-8]报道数据基本一致，鉴定为Jolkinolide E.

化合物3黄色固体(甲醇)，分子式C16H16O5，分子量为288.1HNMR(600 MHz, MeOD)δ6.77(d,J= 8.7 Hz, 1H, H-2), 6.66(d,J= 8.7 Hz, 1H, H-3), 6.28(d,J= 0.6 Hz, 1H, H-6), 5.26(t,J= 8.1 Hz, 1H,H-11),4.09(s, 1H, H-7), 3.66(d,J= 15.3 Hz, 1H, H-13β), 2.95(d,J= 15.3 Hz, 1H, H-13α), 2.60(m, 1H, H-9β), 2.43(m, 1H,H-10β), 1.57(s, 3H), 1.28(m, 1H,H-9α).13CNMR(151 MHz, MeOD)δ174.74(C-15), 150.86(C-1,4), 150.79(C-1,4), 139.75(C-12), 128.20(C-14), 122.55(C-11), 120.87(C-5), 118.61(C-2), 115.38(C-3), 77.04(C-6), 65.00(C-7), 62.70(C-8), 28.24(C-13), 26.08(C-9), 23.43(C-10), 21.66(C-16). 以上数据与文献[9]报道数据基本一致，鉴定为Clavilactone A.

化合物4橘红色粉末(丙酮)，分子式C18H20O4，分子量为300.1HNMR(600 MHz, Acetone) δ 7.50(s, 1H, H-6,7), 6.56(s, 1H, H-3), 5.16(t,J= 7.2 Hz, 1H, H-13), 3.90(s, 3H), 3.88(s, 3H), 2.49(t,J= 7.5 Hz, 1H, H-11), 2.25(q,J= 7.3 Hz, 1H, H-12), 1.66(s, 3H, H-15), 1.58(s, 3H, H-16).13CNMR(151 MHz, Acetone)δ185.02(C-1), 184.57(C-4), 154.52(C-8), 154.15(C-5), 150.67(C-2), 135.38(C-3), 133.20(C-14), 124.07(C-13), 122.45(C-9), 121.95(C-10), 121.58(C-6,7), 121.52(C-6,7), 57.08(C-OCH3), 57.02(C-OCH3), 27.26(C-12), 25.77(C-16), 17.78(C-15)以上数据与文献[10]报道数据基本一致，鉴定为5,8-O-dimethyl-11-deoxyalkannin.

化合物5白色粉末(甲醇)，分子式C16H14O5，分子量为286.1HNMR(600 MHz, MeOD) δ 7.32(d,J= 8.4 Hz, 2H, H-2′,6′), 6.82(d,J= 8.5 Hz, 2H, H-3′,5′), 6.05(dd,J= 8.2, 2.2 Hz, 2H, H-6,8), 5.37(dd,J= 13.0, 2.9 Hz, 1H, H-2), 3.81(s, 3H,OCH3), 3.15(dd,J= 17.1, 13.0 Hz, 1H, H-3α), 2.73(dd,J= 17.1, 2.9 Hz, 1H, H-3β).13CNMR(151 MHz, MeOD)δ198.25(C-4), 169.52(C-7), 165.26(C-5), 164.73(C-9), 159.11(C-4′), 130.93(C-1′), 129.09(C-2′), 129.09(C-6′), 116.32(C-3′), 116.32(C-5′), 104.04(C-10), 95.71(C-6′), 94.91(C-8), 80.63(C-2), 56.26(C-OCH3), 44.06(C-3).以上数据与文献[11]报道数据基本一致，鉴定为Sakuranetin(5, 4′-dihydroxy-7-methyoxy flavanone).

化合物6无色颗粒(氯仿)，分子式C20H20O4，分子量为324.1HNMR(600 MHz, CDCl3) δ 6.93(d,J= 8.2 Hz, 1H, H-6′), 6.80(d,J= 8.2 Hz, 1H, H-5), 6.62(d,J= 9.9 Hz, 1H, H-4″), 6.36(m, 2H,H-3′,5′), 6.29(d, 1H,H-6), 5.54(d,J= 9.9 Hz, 1H,H-3″), 4.35(m, 1H,H-2eq), 3.99(t,J= 10.2 Hz, 1H,H-2ax), 3.46(m, 1H,H-3ax), 2.95(dd,J= 15.6, 11.0 Hz, 1H,H-4ax), 2.83(dd,J= 15.7, 3.7 Hz, 1H,H-4eq), 1.41(s, 3H), 1.39(s, 3H).13CNMR(151 MHz, CDCl3)δ155.41(C-4′), 154.64(C-2′), 152.05(C-7), 149.91(C-9), 129.39(C-5), 129.18(C-3″), 128.58(C-6′), 120.13(C-1′), 117.13(C-4″), 114.54(C-10), 110.11(C-8), 108.90(C-6), 108.10(C-5′), 103.25(C-3′), 75.82(C-2″), 70.18(C-2), 31.80(C-3), 30.75(C-4), 27.96(C-6″), 27.72(C-5″). 以上数据与文献[12]报道数据基本一致，鉴定为Glabridin.

3　结语

通过对内蒙古紫草的系统分离，已初步得到了6个化合物，其中化合物1，2，4，6都是首次从该植物中分离得到，这些化合物的发现丰富了内蒙古紫草化学，为进一步研究该药奠定了一定的基础.

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