黄芪不同提取液的抗氧化性研究

2018-04-04马秀清张海容

山东化工 2018年5期

马秀清，张海容

(忻州师范学院化学系,山西忻州　034000)

黄芪又名黄耆，为豆科多年生草本植物蒙古黄芪和膜黄芪的根，主要产于内蒙古、山西、甘肃、黑龙江等地，为国家三级保护植物。迄今为止，它在我国已有2000多年的药用历史，是一种优质中药材。现代药学研究表明，黄芪具有多种活性成分，包括多糖类化合物，黄酮类、皂苷类、氨基酸等，具有增强机体免疫功能，保肝、利尿、抗衰老、抗癌、抗辐射、降压和较广泛的抗菌作用[1-2]。黄芪的许多功效与其抗氧化作用密切相关，它的主要成分对自由基有部分清除作用[3-7]。自由基是一种生化反应的中间态物质,人体在衰老、应激,疾病的情况下都发生自由基对重要生物分子的损伤,现代医学研究也表明:自由基被认为是人体衰老和某些慢性疾病发生的原因之一[8-9]。通过研究黄芪不同方法下提取液的抗氧化性,在对黄芪加以利用时可以有灵活的选择性,为黄芪深加工利用提供有价值参考。

1　实验部分

1.1　试剂

无水乙醇，分析纯，天津市北辰方正试剂厂；95%乙醇，分析纯，天津市北辰方正试剂厂；硫酸亚铁铵，分析纯，天津市化学试剂三厂；水扬酸，分析纯，天津市北原方正试剂厂；过氧化氢(30%)，分析纯，上海华星化工厂；DPPH,分析纯，东京化成工业株式会社；乙酸乙酯，分析纯，天津市化学试剂三厂；抗坏血酸，分析纯，北京化学试剂公司；磷酸二氢钠，分析纯，北京红星化工厂；磷酸氢二钠，分析纯，天津市化学试剂六厂。

1.2　仪器

KQ-100DB型数控超声波清洗器，昆山市超生仪器有限公司；HH-2数显恒温水浴锅，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司；AB204-N电子分析天平，Metter―Toledo Group；DZ-1A型真空干燥箱,天津市泰斯特仪器有限公司；722S可见分光光度计，上海青华科技仪器有限公司；RE-52旋转式蒸发器，上海安亭电子仪器厂；SHZ-D循环水式真空泵，河南巩义市峪华中仪器厂；精密数显酸度计，上海达仪器有限公司；标准检验筛40目，浙江省上虞市纱筛厂制造；XA-1型固体样品粉碎机，金坛市荣华仪器制造有限公司。

1.3　溶液的配制

1.3.1提取液的制备

图1　制黄芪提取液的流程图

把黄芪药材烘干、粉碎后，过40目筛，称10.0 g置于250 mL三角烧瓶中，加入100 mL的80%乙醇，在50℃，90W条件下超声半个小时，过滤，将残渣再在相同的条件下超声半个小时，过滤，合并两次的滤液，将滤液蒸发至一定体积，定容于100 mL容量瓶得提取液Fa；将残渣在90℃条件下水煮10 h，过滤，将残渣在相同的条件下水煮10 h，过滤，合并两次滤液，将滤液蒸发至约100 mL，假如约4倍的无水乙醇得上清夜和沉淀，过滤，得白色沉淀和上清夜，将沉淀用水溶解定容于100 mL容量瓶得Fb；上清夜蒸发至约50 mL加入约100 mL乙酸乙酯，分层，水层定容于100 mL容量瓶得提取液Fd；乙酸乙酯层蒸发至一定体积，烘干，再溶解到95%乙醇，定容于100 mL容量瓶中得提取液Fc。所得4种提取液均为0.1g/mL的黄芪不同的提取液。

1.3.2抗氧化能力的测定

1.3.2.1水扬酸法

在10 mL比色管中依次加入7.5×10-3mol·L-1的硫酸亚铁铵1 mL，7.5 mol·L-1的水杨酸，0.3%的H2O2各1 mL，最后分别加入一定量的被测物定容至10 mL，静置半小时，测其在510 nm处的吸光度值，吸光度越低，除·OH的效果越好。

该产物在510 nm处有强吸收，若加入自由基清除剂，便会与水杨酸竞争，从而使有色产物的生成量减少，采用固定反应时间法，在510 nm处测定被测物反应的吸光度，并与空白溶液比较，便能确定提取液对其的清除作用，清除率计算公式(1)为：

(1)

A对照—指加入Fe2+,H2O2，水杨酸后的羟自由基体系的吸光度值；

A样品—指加入Fe2+,H2O2，不同提取液，水杨酸后的羟自由基体系的吸光度值；

1.3.2.2DPPH法

在10 mL的比色管中加入一定量的被测物，再加入2×10-4mol·L-1的DPPH·溶液，摇匀，30min后用被测物作参比，测定吸光度A样,同时用无水乙醇作参比，测定2 mL 2×10-4mol·L-1DPPH液与2 mL无水乙醇混合后溶液的吸光度A对，根据下面的公式(2)计算清除率：

(2)

A对照—指加入DPPH·的自由基体系的吸光度值；

A样品—指加入不同提取液，DPPH·后自由基体系的吸光度值。

吸光度值越低，总的清除率就越好。

2　结果与分析

2.1　不同提取液对·OH的清除作用

图2　不同体积的不同黄芪提取液对羟基自由基的清除率

在10 mL比色管中依次加入1 mL硫酸亚铁铵，1 mL水杨酸，1 mL H2O2后，把提取液及Vc按分别不同体积：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL加入比色管中定容，同时在另8支比色管中依次加入0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0mL的提取液定容于10 mL做背景，静置30min，在510 nm处测其吸光度，计算各自的清除率，其中Fa稀释5倍，Fb，Fc，Fd，Vc没有稀释，其清除率的关系如图2。

由图2可看出Fa、Fb、Fd对·OH 都有清除作用且清除能力与浓度有明显的量效关系，Fc几乎不具有抗氧化性，Fd的清除效果受浓度影响较大，随浓度的增大，清除效果明显提升，由于Fa未稀释时加进去提取液溶液就变为无色，故Fa的清除效果最好。

2.2　不同提取液对DPPH自由基的清除作用

在10 mL比色管中依次把各提取液及稀释了80倍的Vc按不同的体积：0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL加入8支比色管中，再各加入2 mL的DPPH溶液定容于10 mL，同时在另8支比色管中依次加入0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0、1.5、2.0 mL的提取液定容于10 mL做背景，静置30min后，在517 nm处测其吸光度，其中Fa稀释了10倍，Fb稀释了5倍，Fc，Fd未稀释，Vc稀释了80倍，计算各清除率，清除率关系见图3。