海南省普通人群宫颈HPV感染及临床信息分析

贺国丽，吴秀荣，郑碧娟，王 雪，崔开颖

(海南省人民医院，海南 海口 570311)

宫颈癌仍然是当今严重威胁女性健康的妇科恶性肿瘤，我国每年新增宫颈癌患者13.5万，占全球新发病数量的1/3，其中约8万人死亡[1]。高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)持续感染是宫颈病变与宫颈癌的主要病因之一。本研究对5 959例女性人群进行了HPV的分型检测和基本信息的收集，现将结果分析报告如下。

1资料与方法

1.1研究对象

采集2015年1月至2016年5月海南省19个市县普通人群5 959例宫颈脱落细胞标本，同时收集个人的基本信息。纳入研究的人群年龄在23～69岁之间；职业有干部、个体、工人、农民、无业；民族有汉族、黎族、苗族、满族、回族、瑶族、壮族。文化程度有大学、中学、小学、未接受系统教育；调查避孕方式、生育胎次、对宫颈癌可以早期筛查的知晓情况。所有研究对象均知情同意。

1.2试剂与仪器

凯普HPVDNA提取试剂盒、DNA扩增试剂盒和HPV核酸分型检测试剂盒(潮州凯普生物化学有限公司)、多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增仪、Hybrmiax医用核酸分子杂交仪。

1.3标本采集

扩阴器暴露宫颈后，用特制取样刷顺时针转5圈以上，将刷头折断放入已加有专用细胞保存液的取样管中，立即送检或4℃保存备检。

1.4分型检测

1.4.1 DNA模板的制备

样本制备过程按凯普公司HPVDNA提取试剂盒使用说明进行。将样品管涡旋振荡混匀，取500μL细胞保存液，14 000r/min离心5min，沉淀加400μL溶液Ⅰ于100℃水浴15min，再加入400μL溶液Ⅱ，14 000r/min离心5min，弃上清，获取核酸沉淀，用60μL溶液Ⅲ溶解核酸沉淀后备用。

1.4.2 PCR扩增

使用凯普DNA扩增试剂盒扩增，反应体系及反应条件根据试剂盒说明书。每管23.25μLPCRmix和0.75μLTaq酶配制扩增反应液，各加已提取DNA样本模板1μL进行扩增。PCR反应条件为95℃预变性9min，95℃20s，55℃30s，72℃30s，共40个循环，72℃延伸5min。

1.4.3 杂交并显色

按照Hybrmiax医用核酸分子杂交仪操作步骤进行杂交试验并显色。

1.4.4结果判读

检测结果阳性为肉眼清晰可见的紫蓝色圆点，根据试剂盒提供的膜条HPV分型分布图判读结果。包括HPV6、11、16、18、31、33、35、39、42、43、44、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、cp8304亚型。

1.5统计学方法

所有数据采用SPSS 18.0统计软件进行分析，计数资料组间比较采用卡方检验，以P<0.05为有统计学意义。

2结果

2.1参检人群的年龄与HPV感染

不同年龄段中HPV阳性率有显著性差异(χ2=48.15，P=0.005)，>60岁年龄段的HPV阳性率最高(占22.73%)，其次为20～30岁年龄段(占17.84%)，见表1。

2.2参检人群的职业与HPV感染

不同职业中HPV阳性率有显著性差异(χ2=9.59，P=0.025)，以无业人员HPV阳性率最高(14.17%)，见表2。

表1 参检人群年龄及HPV分布情况Table 1 Distribution of age and HPV infection among the enrolled women

表2 参检人群职业及HPV感染分布情况Table 2 Distribution of occupation and HPV infection among the enrolled women

2.3参检人群的民族与HPV感染

在参检人群的民族中，除外HPV检测阴性的少数民族，汉族人群的HPV感染率高于黎族人群(χ2=41.19，P=0.005)，见表3。

表3 参检人群民族及HPV感染情况Table 3 Distribution of nationality and HPV infection among the enrolled women

2.4参检人群的生育与HPV感染

不同生育胎次之间HPV阳性率有显著性差异(χ2=85.29，P=0.005)，生育胎次多者HPV感染率较胎次少者为低，见表4。

表4 参检人群生育及HPV感染情况Table 4 Distribution of number of birth and HPV infection among the enrolled women

2.5参检人群的文化程度与HPV感染

参检人群的中接受文化教育的程度与HPV感染率有一定关系，既文化程度较高者HPV感染率要小于文化程度低者(χ2= 97.81，P=0.005)，见表5。

表5 参检人群的文化程度及HPV感染情况Table 5 Educational level and HPV infection among the enrolled women

2.6参检人群的避孕方式与HPV感染

不同避孕方法中HPV阳性率有显著性差异(χ2=92.81，P=0.005)，输卵管结扎者的HPV感染率最低，见表6(口服避孕药的人数过少，未纳入差异分析)。

表6 参检人群避孕情况及HPV感染情况Table 6 Distribution of contraception and HPV infection among the enrolled women

2.7参检人群的宫颈外观表现与HPV感染情况

在宫颈外观上，宫颈柱状上皮是否有异位及异位范围的大小与HPV感染无明显相关性(χ2=7.15，P=0.100)，见表7。

表7 参检人群宫颈外观及HPV感染情况Table 7 Cervix appearance and HPV infection among the enrolled women

2.8参检人群对宫颈癌早期筛查知晓情况

参检人群中，不知道宫颈癌是可以早期筛查的比例达41.94%。

2.9受检者高危HPV分型情况

受检人群的高危HPV型别有17种，分布广泛，由高到低依次为HPV52(3.14%)、HPV16(1.65%)、HPV58(1.34%)、HPV39(0.99%)、HPV18(0.94%)、HPV66(0.74%)、HPV68(0.60%)、HPV51(0.49%)、HPV53/56(0.34%)、HPV59/33(0.27%)、HPV45(0.20%)、HPV31(0.17%)、HPV82(0.10%)、HPV35(0.07%)、HPV73(0.02%)。

3讨论

宫颈癌在本省位居女性生殖系统恶性肿瘤之首，多年来一直居高不下，就诊时期别偏晚者不在少数，对家庭和社会均造成极大的经济和精神负担，情况令人堪忧。

3.1人群的HPV感染情况

本课题受到省社会发展专项资金的资助，对本省19个市县普通人群5 959人进行了23型别HPV的分型检测，结果HPV阳性者758例，其中高危型HPV感染694例，高危型HPV感染率11.65%，较本地区门诊就诊者31.36%的感染率明显低[2]，说明门诊就诊人群与普通人群的HPV感染情况是不同的，门诊的阳性率是不能代表人群阳性率的。国内还没有公布全国性的宫颈HPV感染情况，本资料的结果较2007年乔友林等报告的我国平均水平14.2%稍低。本资料中的高危型别由高到低顺序依次为HPV52(187例)、HPV16(98例)、HPV58(80例)、HPV39(59例)、HPV18(56例)、HPV66(44例)、HPV68(36例)、HPV51(29例)、HPV53和HPV56(20例)、HPV59和HPV33(16例)、HPV45(12例)、HPV31(10例)、HPV82(6例)、HPV35(4例)、HPV73(1例)，与国内的大部分报道及本地区门诊就诊者的统计结果基本一致[2-3]。

3.2人群的临床基本信息与HPV感染的关系

研究认为HPV感染与年龄有关，感染率随年龄的增加而升高[4-5]。本研究结果发现，不同年龄段中HPV阳性率有显著性差异(P<0.05)，>60岁年龄段的HPV阳性率最高(22.73%)，其次为20～30岁年龄段(17.84%)，说明这二个年龄段是HPV的易感人群。在低年龄女性存在性活跃、卫生保健知识和意识缺乏，流产分娩多等事件；而在老年女性雌激素水平下降、机体免疫力降低、身体基础疾病较多[2,6]。提示60岁以后人群仍是筛查中不应忽视的高危人群；年轻女性抵御HPV感染的能力差，预防性疫苗应该在青春期和青春前期应用。

生育胎次的分析中显示，在3胎以下人群的HPV阳性率是随胎次的增加呈现降低的表现，而3胎以上的HPV阳性率又有上升的表现。说明多次妊娠、生产对宫颈的反复损伤及修复过程是会增加HPV侵袭的。

随着文化程度的降低，HPV阳性率呈现增加的趋势，其中未受教育者最高，其次为小学程度者，差异有统计学意义。显示HPV感染与受教育的情况有关，因为文化程度是会明显影响到人群对保健知识的接受水平、健康意识的强弱、生活及卫生习惯的好坏。

在避孕方式的分析中，输卵管结扎者的HPV阳性率最低，而其它方式之间无差异。提示避孕套似乎并不能阻挡HPV的传播，当然这里还存在这部分受检者可能是通过其它途径而非性行为感染了HPV以及她们并没有常规使用避孕套的原因。因口服避孕药者人数太少，且均无HPV检出，故未列入差异的统计分析。

本资料中受检人宫颈是否有柱状上皮异位(“糜烂”)以及异位的程度范围与HPV感染率无统计学意义，说明虽然“糜烂”(异位)的上皮菲薄会导致抵抗病原体侵袭能力较差，但单纯的宫颈“糜烂”可能还不是易患HPV感染的主要因素。

黎族是本省的最主要少数民族，本资料中黎族人群的HPV阳性率为7.13%，而汉族人群是14.26%阳性率，差异有统计学意义。一项本地区宫颈病变病例的分析结果显示，在438例宫颈癌中，汉族402例，占91.78%；黎族30例，占6.85%；629例癌前病变中，汉族607例，占96.50%；黎族21例，占3.33%[7]。这二项结果显示黎族的HPV感染率和宫颈病变发生率均较低，是否在不同民族间存在着HPV易感基因或易感因素的差异还有待于进一步研究。

3.3人群对宫颈癌早期筛查的认知

在发展中国家，宫颈癌占所有妇科肿瘤的20%～30%，而在发达国家仅为4%～6%，导致这种显著差别的主要原因是早期筛查的重视和推广，使多数高危者得到早发现早诊断早治疗[3，8]。目前我国的人群筛查率属低水平，城市为29.1%，经济发达地区为31.3%，农村为16.9%。在本资料的人群中，对于是否知晓宫颈癌可以早期筛查的调查结果是，表示知道的占58.06%，而表示不知道的为41.94%，虽然前者的比例高于后者，但后者的占比仍属相当高，说明公众对宫颈癌预防的认知度和宫颈癌相关信息的了解程度还很不理想，我们所面临的宫颈癌防治工作压力巨大，任重道远。

[1]崔亚杰,张培莲,卢天捷,等. 西安地区宫颈病变妇女人乳头瘤病毒感染状况及基因型别分析[J].中国妇幼健康研究,2016,27(7):819-821.

[2]贺国丽,蔡俊宏.14335例妇科门诊就诊者人乳头状瘤病毒感染结果的报告[J].肿瘤预防与治疗,2015,28(3):140-143.

[3]Al-Awadhi R,Chehadeh W,Jaragh M,etal.Distribution of human papillomavirus among women with abnormal cervical cytology in Kuwait[J].Diagn Cytopathol,2013,41(2):107-114.

[4]王艳,陈雅珍,丁友法,等.浙南地区4034例宫颈人乳头状瘤病毒感染状况分析[J].中华医院感染学杂志,2012,22(4):750-752.

[5]肖瑜,李彦,周远忠,等.黔北地区5925例妇女子宫颈人乳头状病毒的感染及其亚型分布[J].国际检验医学杂志,2013,34(7):894-896.

[6]Lee E H,Um T H,Chi H S,etal.Prevalence and distribution of human papillomavirus infection in Korean women as determined by restriction fragment mass polymorphism assay[J].J Korean Med Sci,2012,27(9):1091-1097.

[7]贺国丽,吴秀荣,郑碧娟.宫颈癌与癌前病变中高危人乳头瘤病毒型别特征及差异分析[J].实用妇产科杂志,2016,32(6):459-461.

[8] Suh D H,Kim K,Kim J W.Major clinical research advances in gynecologic cancer in 2011[J].J Gynecol Oncol,2012,23(1):53-64.

[专业责任编辑： 张忠明]