一例长岛型掌跖角化症患者SERPINB7 基因的突变分析

杨铭华 李常兴 陈琳 魏威胜 刘勇胜 陈穗玲 周少珍 刘慧茹 林东子 韩春雷

【关键词】 长岛;掌跖角化症;丝氨酸蛋白酶抑制剂B7;基因;突变

中图分类号：R758.61   文献标识码：A   DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2018.01.006

Analysis of SERPINB7 gene mutation in one case with Nagashima-type palmoplantar keratosis

YANG Minghua，LI Changxing，CHEN Lin，WEI Weisheng，LIU Yongsheng，CHEN Suiling，ZHOU Shaozhen，LIU Huiru，LIN Dongzi，HAN Chunlei

【Abstract】 Objective To investigate serine protease inhibitors B7（SERPINB7）gene mutation in one case with Nagashima-type palmoplantar keratosis（NPPK）.

Methods All coding exons and adjacent splice sites of the SERPINB7 gene were amplified by PCR，and direct sequencing was performed.

Results SERPINB7c.796C>T（p.Arg266Ter）gene heterozygous mutation was detected in this case of NPPK，causing the 266th amino acid encoded by SERPINB7 gene from arginine to termination code.No SERPINB7 mutations were found in 100 healthy controls.

Conclusion SERPINB7 c.796C>T（p.Arg266Ter）mutation may be the pathogenetic gene of this case of NPPK.

【Key words】 Nagashima;palmoplantar keratosis;SERPINB7;gene;mutation

長岛型掌跖角化症（Nagashima-type Palmoplantar Keratosis，NPPK）是一种少见的掌跖角化症，临床特征为手掌、手背、腕部、足底、足背、踝部、跟腱等部位出现红斑、丘疹、斑块、角化、脱屑，部分患者伴手足多汗症[1～2]。NPPK是常染色体隐性遗传，由丝氨酸蛋白酶抑制剂B7（SERPINB7）基因突变引起[2～5]。笔者发现1例NPPK患者，对该患者进行SERPINB7基因测序发现8号外显子出现杂合性突变c.796C>T（pArg266Ter），现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集NPPK一家系连续两代，1例患者。先证者，男，18岁。4岁开始于双侧手腕、手掌、掌背、足底等部位出现红斑，对称分布，无明显自觉症状。先证者12岁开始，双侧手腕、手掌、掌背部位皮疹明显加重，表现为对称性红斑、斑块，出汗时候伴有异味。冬天与夏天的皮疹无明显变化。皮肤科专科检查：双手掌、指背（图1A，图1B）、足底、手腕、踝部、跟腱等对称性红斑、角化性斑丘疹、斑块伴脱屑。实验室检查：血常规、肝肾功能、HIV、RPR及TPPA均无明显异常。先证者父母非近亲婚配，父母未见类似疾病。收集100例汉族健康体检者血液标本作为正常对照。

1.2 实验方法

1.2.1 外周血DNA提取及基因来源

抽取家系成员外周静脉血4 ml，用EDTA二钾盐抗凝管存-20℃冰箱，按照QIAGEN试剂盒说明操作流程进行提取DNA。SERPINB7基因（NC_000018.10）序列从PUBMED上获得。引物设计参照文献4。

1.2.2 PCR反应体系和扩增条件

反应体系中含有20 ng 基因组DNA，正向与反向引物（10p）各1 μL，10×缓冲液3 μL，模板（ng/μl）2 μL，20 μL dNTPs（25 mM）和0.2 μL Taq（5 U/μL），H2O 20.8 μL，PCR总反应体系为30 μL。PCR反应参数设置：首先进行预变性：96℃ 下5分钟;变性在96℃ 下20秒;退火在55℃下20秒;延伸在72℃下30秒;终端延伸在72℃下5分钟。PCR反应一共进行30个循环。

1.2.3 突变分析

PCR反应后取2 μL反应产物，采用2%琼脂糖凝胶进行分析电泳，PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物，纯化后用ABI 3730（美国Applied Biosystem）型DNA测序仪进行基因测序分析。

2 结  果

先证者的测序结果显示，患者的SERPINB7基因第8号外显子核苷酸序列第796位碱基由C突变成T，发生无义突变，编码的蛋白第266位的精氨酸转换成终止密码 （p.Arg266Ter） 见图2A。先证者父母均为SERPINB7p.Arg266Ter杂合突变携带者，100个与该家族不相关的汉族正常人群中未检测到p.Arg266Ter突变位点。见图2B。

3 讨  论

NPPK是一种常染色体隐性遗传病，男女发病率相似，临床表现的特征为掌跖角化症，该病于1977年首次在长岛被报告，故亦称为长岛型掌跖角化症[1]。NPPK临床表现为红斑、丘疹、斑块、角化过度，累及手掌、足跖、手腕内侧、脚踝、跟腱区、肘部和膝盖[2～3]。部分患者可以合并耳朵过度角化及足趾甲营养不良 [4～5]。NPPK组织病理学特征为表皮角化过度，颗粒层和棘层增厚，但并无表皮松解性角化过度的特点，真皮浅层少量毛细血管扩张，少量炎症细胞浸润[2]。研究发现NPPK的致病基因为SERPINB7， 该种病例见于日本人及中国人报道[2～12]。本例患者4岁开始发病，初始表现为手掌红斑，病程进程较慢，12岁症状开始加重蔓延至腕部、手背、足背、跟腱，伴有手足多汗症，手掌、足底异味，该患者拒绝进行组织病理活检，患者父母非近亲结婚，无类似病史。本研究对该例患者及其家系成员进行Sanger测序SERPINB7基因，发现该例患者SERPINB7基因外显子8基因发生杂合突变，c.796C>T （p.Arg266Ter），该突变导致SERPINB7基因编码的蛋白第266位氨基酸由精氨酸变为终止密码，先证者父母均为SERPINB7基因p.Arg266Ter杂合突变携带者，遗传模式符合常染色体隐性遗传。100个与该家族不相关的汉族正常人群中未检测到pArg266Ter突变。本研究从基因水平诊断了该患者为NPPK。目前，尚未找到根治NPPK的治疗方法，维甲酸类药物如维A酸软膏、他扎罗汀或激素软膏如丙酸氯倍他索霜，合并真菌感染联合抗真菌药物，这些治疗方法能缓解该患者的病情，合并真菌感染联合抗真菌药物治疗，但停药后容易复发。该患者外用丙酸氯倍他索霜，每天2次，2周后症狀有所改善，远期疗效有待进一步的观察。

参 考 文 献

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