miR-135在前列腺癌中的诊断价值研究

赵宇明，张 悦，王 华，郭冬梅，田 宝，张立民，郑 龙

(1.秦皇岛市第一医院 泌尿外科，河北 秦皇岛066000;2.秦皇岛市妇幼保健院 妇科，河北 秦皇岛066000;3.河北医科大学分子生物学研究室，河北 石家庄050017)

前列腺癌(PCa)是临床常见的男性恶性肿瘤，发病率呈明显上升趋势，并且向低龄方向发展[1]。临床常采用直肠指诊和血清前列腺特异性抗原(PSA)筛查前列腺癌，但直肠指诊的敏感性低、PSA检测特异性较差，存在一定程度的误诊或漏诊。目前发现，在肿瘤发生发展、转移过程中，细胞释放肿瘤内源性的miRNA(microRNA)进入外周循环，结合于体内靶基因mRNA3'，诱导miRNA靶基因降解，外周血游离miRNA能够用于肿瘤诊断与预后[2]。本文采用PCR检测血清miR-135的表达水平，分析其与 PCa病理参数的的相关性，以便指导临床诊断，改善患者预后。

1 材料和方法

1.1临床资料

选取2016年1月至12月我院PCa患者75例、良性增生(BPH)患者52例及40例健康人群，经病理活检确诊。病理分级依据2003年WHO分类标准Gleason评分[3]，根据腺体分化程度，积分为2、3、4分者相当于高分化腺癌，腺体形态完好；5、6、7分者相当于中分化腺癌，腺体伴有少量的发育不全或融合成筛状；8、9、10分者相当于低/未分化癌，发育不全，融合成筛状腺体，或缺乏腺体结构，伴坏死。Glerson积分>7分，癌肿分化程度差，伴有浸润性生长、坏死，染色变化明显。肿瘤分期按TNM分期标准。其中PCa组术前未行治疗，平均年龄(58.33±6.47)岁；BPH患者平均年龄(56.27±5.49)岁，健康患者平均年龄(57.31±5.50)岁，排除伴发糖尿病、心血管疾病、其它恶性肿瘤、精神疾病、肾病等，本研究获得伦理委员会批准，患者签署知情同意书，3组年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2方法

1.2.1RNA提取 收集患者血清300 μl，所有的血清标本保存在-80 ℃。用上海嵘崴达实业有限公司生产的mirVanaTMPARISTMmiRNA试剂盒，提取并测定RNA浓度[4]。

1.2.2实时荧光定量PCR检测 以总RNA5 μl为模板，应用上海慧颖生物科技有限公司生产的TaqManMicroRNA Reverse Transcription试剂盒反转录，反转录引物为miR-135特异性的茎环引物(ABI)，反应条件控制：85℃5 min，42℃30 min，16℃30 min。荧光定量 PCR总反应体系为20 μl，反应条件控制：95℃10 min，95℃15 s，60℃1 min。在ABI7500实时定量PCR仪上完成，均重复3次反应[5]，计算相对定量表达水平。

1.3统计学处理

2 结果

2.1血清miR-135表达水平

PCa组miR-135表达水平(18.36±3.85)较BPH组(6.11±2.02)和对照组 (5.50±1.52)增加，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 血清miR-135的相对表达水平比较

2.2miR-135表达与PCa的相关性

Glerson积分>7组的 miR-135的表达量要高于Glerson积分<7组，差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期越高，血清miR-135表达越高(P<0.05)，见表2。

3 讨论

miRNA是存在于人体内长度为22nt的微小单链，属于内源性表达的小分子RNA，在转录后水平调节基因表达，在细胞增殖与凋亡中发挥重要作用[6]。它能够通过结合于体内靶基因mRNA3'端非翻译区(3'-UTR),二者发生作用，抑制miRNA靶基因翻译，诱导其降解,杨晓冬[7]等认为miRNA靶基因在机体中发挥促癌或抑癌功能。

表2 血清miR-135表达水平与 PCa相关性比较%]

miR-135是长度为22nt的非编码微小单链RNA，在转录后水平调控基因表达，在体内结合于靶基因miRNA3'端非翻译区，家族成员包括miR-135a，在机体中抑制Wnt信号通路中APC基因的表达，有促进细胞凋亡和抑制细胞增殖的作用，发挥类似癌基因样的作用[8]。付强[9]等研究证实miR-135a调控JAK2通路，其表达能够抑制细胞增殖，加速细胞凋亡；miR-135a参与多种肿瘤细胞的增殖、凋亡，在前列腺癌发生发展过程中，miR-135a发挥重要的调控作用，促使癌细胞由激素依赖转化为激素非依赖，miR-135a在激素非依赖前列腺癌细胞中低表达，在细胞中外源性高表达后，显著抑制细胞增殖能力，提示miR-135a具有抑癌基因作用，可以抑制STAT6与DNA结合，抑制STAT6蛋白的表达。

miRNA具有促癌功能，在PCa的肿瘤细胞变异增殖过程中，促癌基因被激活，导致癌细胞增殖增加、凋亡减少，从而导致恶性病变并进一步进展[10]。miRNA在转录后水平调控基因表达，miRNA在前列腺癌、BPH及健康者血清中，表达水平由高到低(χ2=5.821,P<0.01)，差距巨大[11]，表明miRNA检测可作为敏感性较强的肿瘤标志物，指导临床诊断、评估预后。血清中存在肿瘤特异性miRNA，在PCa患者中，miR-135表达与临床病理参数密切相关，林楠[12]发现miR-21与miR-155的表达水平在淋巴瘤患者中明显增高，表达越高预后越差，并且存活率也较低，miRNA基因来源于肿瘤，它的表达量能够反映肿瘤的性质、大小、临床分期，为临床诊断提供参考。李天寿[13]等提出血浆microRNA表达谱可作为PCa非编码的小分子的标志物，通过miR-30c、miR-1285、let-7c和miR-622 等表达，能够准确区分肿瘤细胞的性质，诊断出PCa的肿瘤分级、浸润深度、淋巴结转移及临床分期。

本文对三组研究对象进行miR-135水平检测，发现健康组(5.50±1.52)、良性增生组(6.11±2.02)及PCa组(18.36±3.85)的miR-135表达依次升高，差异具有统计学意义，表明miR-135表达在临床中能够能较好地判定前列腺肿瘤性质，区分恶性肿瘤、良性增生或健康人群；同时发现在PCa患者中Gleason积分大于7者其血清miR-135水平明显增加；临床分期越高，分化程度越差，miR-135的表达水平越高，表明 miR-135是高风险肿瘤的标志物，可作为PCa诊断和预后的分子标志[14]。

综上所述，在人类激素非依赖前列腺癌中，miR-135表现为具有促进肿瘤增殖的功能，可作为PCa诊断和预后判断的标志物，可以通过表达制定治疗策略，非侵入性操作，诊断准确率高，有助于降低死亡率，提高患者的生存质量。

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