动脉粥样硬化患者载脂蛋白C3高表达

俞 娟，熊怡淞，王旭东，仲人前

(1.南通大学附属医院 检验科，江苏 南通226001;2.成都军区总医院 检验科，四川 成都610083；3.第二军医大学附属长征医院 实验诊断科 全军临床免疫中心，上海200003)

动脉粥样硬化(AS)是一种多因素复杂性疾病，解剖及病理研究发现粥样斑块中聚集有大量的脂质、巨噬细胞、淋巴细胞及血小板，还伴有平滑肌细胞的增生等，但其发病机制尚未完全阐明。长期以来公认的甘油三酯(TG)升高与冠心病(CHD)风险成正相关，而TG升高是否作为CHD一个独立的风险因子仍有争议。近年来研究表明，TG 是CHD的风险因子，而餐后的TG水平更是其独立危险因素[1]。APOC3在血浆TG代谢中起重要作用，血浆APOC3水平与血浆TG水平成正相关，与餐后TG清除率成负相关[2]。胆固醇和复发事件(CARE)临床试验结果显示，与TG相比，APOC3是CHD更强有力的预测者，是独立风险因子[3]。

国外已进行大规模临床实验，低胆固醇动脉粥样硬化研究(CLAS)和监测动脉粥样硬化转归研究(MARS)结果显示，血浆APOC3-LpB(含APOB脂蛋白即TRL中的APOC3)能预测经血管造影证实的冠状动脉狭窄进展程度[4,5]。MARS发现，独立于LDL-C浓度，富含甘油三酯的脂蛋白(TRL)中APOC3浓度能预测疾病进展的风险。而国内CHD患者人群的血浆APOC3水平及其亚组分的测定鲜有报道，本研究主要是应用全自动生化仪检测CHD患者血浆总APOC3、TRL- APOC3、HDL-APOC3以及常规血脂检测，探讨APOC3在冠状动脉粥样硬化发生发展中的意义。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1研究对象 收集2010年8月-2011年6月上海第二军医大学长征医院心内科经冠状动脉造影或手术检查的患者信息，其中冠状动脉无狭窄的心脏病患者20例，年龄、性别等匹配的冠状动脉有狭窄的心脏病患者195例。

详细记录入选研究对象的冠状动脉造影或手术检查结果，并根据这些结果对其进行分组。首先，根据冠脉主要血管是否存在狭窄进行分组，分为冠脉无狭窄组(non-AS组)和冠脉狭窄患者组(AS组)；再根据有无冠心病进行分组，行冠状动脉造影阳性(至少1支冠状动脉直径狭窄≥50%)，并根据1979年WHO的标准诊断为冠心病的患者(CHD组)，冠脉无狭窄的对照组(non-CHD组)。最后根据冠脉主要血管狭窄程度进行分组：A组定义为主要血管未见狭窄的对照组；B组定义为主要血管狭窄<50%的患者组；C组定义主要血管狭窄为50%-75%的患者组；D组定义为主要血管狭窄>75%的患者组。

研究对象均为无血缘关系的华东地区汉族人群。

1.1.2主要试剂 APOC3测定试剂盒(日本积水公司产品，原为日本第一化学株式会社)，Tch和TG测定试剂盒(上海科华生物有限公司)，HDL-C测定试剂盒(上海申索佑福医学诊断用品有限公司)，LDL-C测定试剂盒(上海科华生物有限公司)，APOA1测定试剂盒(上海科华生物有限公司)，APOB测定试剂盒(上海申索佑福医学诊断用品有限公司)，磷钨酸-镁沉淀剂(自配)：称取磷钨酸钠0.44 g，MgCl2·6H2O 1.10 g，溶于蒸馏水80 ml中，以1 mmol/L NaOH调pH至100 ml。

1.1.3主要仪器 全自动生化分析仪(日本Hitachi 7020)，-80℃超低温冰箱(美国REVCO公司)，恒温水浴箱、普通冰箱、离心机、EP管、TIP头 (国产)

1.2实验方法

1.2.1标本收集 空腹12-14 h抽取外周静脉血3 ml，凝固后离心分离血清，2 h内测定或者冻存于-80℃冰箱。

1.2.2标本测定 血清TG、Tch应用氧化酶法测定，HDL-C和LDL-C应用直接测定法测定其中的胆固醇，APOA1、APOB、APOC3采用免疫比浊法，APOC3亚组分的测定采用磷钨酸-镁沉淀剂沉淀去除非HDL成分，即CM、LDL、VLDL。首先测定上清液HDL组分中APOC3(HDL-APOC3)，再用血清总APOC3减去HDL中APOC3得到TRL中APOC3(TRL-APOC3)。

1.3统计学分析

2 结果

2.1动脉粥样硬化患者血清APOC3及其血脂的表达情况

如表1所示，与对照组(无狭窄组)相比，AS组(有狭窄组)的患者血浆总APOC3水平较对照组显著升高(9.46 g/L比7.42 g/L)，APOA1和HDL-C浓度则降低(分别为1.23 g/L比1.40 g/L，1.09 g/L比1.24 g/L)，差异有统计学意义(P<0.05)，而APOC3亚组成分TRL-APOC3和HDL-APOC3、TG、Tch(总胆固醇)、LDL-C(低密度脂蛋白胆固醇)、APOB，在2组间均无显著性差异(P>0.05)。

表1 AS组和对照组血脂和载脂蛋白水平比较

注：与对照组比较,*P<0.05

2.2冠心病患者血清APOC3及其血脂的表达情况

如表2所示，与对照组(非CHD组)的心脏病患者相比，CHD组的患者血浆总APOC3水平显著升高(9.46 g/L比7.43 g/L)，APOA1和HDL-C浓度则降低(分别为1.22比1.40 g/L，1.09比1.24 g/L)，差异有统计学意义(P<0.05)，而APOC3亚组成分TRL-APOC3和HDL-APOC3、TG、Tch、LDL-C、APOB，在2组间均无显著性差异(P>0.05)。

2.3血清APOC3浓度与动脉狭窄程度的关系

如表3所示，与A组(无狭窄组)相比，不同程度的动脉狭窄组B组、C组、D组的患者血清中总APOC3水平均显著升高(分别为7.43 g/L比9.49 g/L、9.85 g/L、9.37 g/L)，差异有统计学差异(P<0.05)；而狭窄组之间的APOC3水平无显著性差异(P>0.05)。

表2 CHD组和对照组血脂和载脂蛋白水平比较

注：与对照组比较,*：P< 0.05

表3 APOC3浓度与动脉狭窄程度的关系比较

注：与A组比较*：P<0.05

3 讨论

动脉粥样硬化是众多心脑血管疾病共同的病理基础，严重危害人类健康。随着我国生活水平的提高，动脉粥样硬化性疾病已跃居于人口死亡的主要原因之列[6]。在形成AS的各因素中，血脂代谢异常起重要作用，而APOC3的增加可能与此相关。大量研究报道，血浆TG是CHD的风险因子，APOC3水平与TG存在直线正相关关系，APOC3更是比TG更有力的CHD的独立风险因子[7]。来自动物实验的报道也显示，APOC3引起TG升高，前者是始发因素[8]。APOC3能抑制甘油三酯的水解，在TRL的代谢中具有关键作用，独立于低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平，与CVD风险增加有关[9]。APOC3功能丧失突变携带者体内血浆TG降低，HDL-C升高，冠状动脉钙化的负担减少，在一般人群中APOC3缺乏可减少冠状动脉粥样硬化[10]。不管是冠脉事件的再发风险还是经过多年随访发现死于CHD的风险，血浆中APOC3的高表达在其中均起相当的作用[11]。鉴于血浆APOC3大量的研究报道均来自于国外，考虑到种族差异的影响，我们对华东地区汉族人群的APOC3水平进行检测。

我们的实验结果发现，TG虽在AS组和CHD组较高，但是差异无显著性意义，原因可能是研究对象已经服用过降脂药物，而使结果有所偏低。从表1和表2的结果我们可以看出，与对照组(无狭窄组)相比，AS组(有狭窄组)和CHD组的患者血浆总APOC3水平显著升高(P<0.05)，而APOC3亚组成分TRL-APOC3和HDL-APOC3在2组间无显著差异，TG在2组间也没有统计学差异。说明APOC3不管存在于TRL中或HDL中，累积的量即总APOC3在组间是有显著差异的，这和Kawakami课题组在对细胞实验进行机制研究的结论不谋而合[12]，他们发现不仅TRL中的APOC3能引起血管内皮细胞和单核细胞活化，启动相关信号通路而导致细胞间粘附增加，存在于HDL中的APOC3同样抑制HDL的抗细胞粘附作用，换言之，APOC3虽存在于不同的脂蛋白颗粒上，但效应是相同的，最终结果都是导致细胞粘附率增加。另外的研究报道，HDL中的APOC3使前者功能紊乱，成为糖尿病的风险因子[13]。我们的结果显示，APOC3无论存在于TRL还是HDL，只要它的总量增高到一定程度，就与AS相关。本部分研究对象的血清APOC3浓度与其他研究相比，结果偏低，在AS组中APOC3亚组分TRL- APOC3和HDL-APOC3中的浓度相对于对照组虽有增高趋势，但无统计学差异，推测可能也是研究对象服用过降脂药物的缘故。因为临床上所用的降脂药物几乎均有降低APOC3效应[7]。Fibrates是贝特类降脂药物，具有降低TG和独立抗AS作用，能降低APOC3基因表达；Statins是他汀类降脂药物，降低APOC3的mRNA表达和血浆中的蛋白水平；鱼油、烟酸等降脂药物都不同程度降低APOC3表达。

我们在收集临床标本的时候，很难发现已患CHD的患者，还没有用过降脂药物，因为此病为复杂性疾病，当出现相应症状时，可能早就发生脂质代谢紊乱，并发2型糖尿病(T2DM)或高血压。即使由于应用降脂药物而使APOC3血浆浓度下降，或即使一线医生能够了解用药剂量和时间，但用药前的蛋白水平我们已无从知晓，而长期的高APOC3导致的各种损伤，特别是已经形成的AS则已不可逆转，其导致不同研究的CHD人群血浆APOC3水平的差异。因此，发现CHD组中APOC3水平不高也并不一定代表它的实际病理情况，应该排除使用降脂药物的影响，否则会引起结论偏倚。

为了研究血浆总APOC3浓度与冠脉狭窄程度是否有差异，我们将冠脉狭窄程度分为A、B、C、D 4个级别，A组为无狭窄组，B组为狭窄<50%，C组为狭窄为50%-75%，D组为狭窄>75%。结果正如表3所示，与A组(无狭窄组)相比，不同程度的动脉狭窄组B组、C组、D组的患者血清中总APOC3水平均显著升高，差异有统计学差异(P<0.05)；而狭窄组之间的总APOC3水平无显著性差异(P>0.05)。以上结果说明，血浆总APOC3在血管发生狭窄的人群中高表达，与狭窄的程度无明显相关性。

为了进一步了解冠脉狭窄患者的情况，我们通过检测常规血脂水平发现具有心血管保护作用的APOA1和HDL-C血浆浓度在有狭窄组和冠心病组的患者中是降低的(P<0.05)，这与文献报道一致，Tch、LDL-C、APOB等在组间均无显著性差异(P>0.05)。

综上所述，本研究结果显示，在我国华东地区汉族人群中，血清总APOC3浓度在冠脉狭窄患者中升高，而与狭窄的程度无显著相关性。APOC3亚组成分TRL-APOC3和HDL-APOC3在组间无显著性差异。

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