细胞免疫治疗在中晚期肝癌的应用效果观察

武振明，史素梅，王凌凌，郭 茜，王帅兵，齐秀恒

肝癌是由肝内胆管上皮细胞或肝细胞发生的恶性肿瘤，具有恶性程度高、发病隐匿、易复发、预后差、易转移等特点，其发病率高居我国第3位，病死率占全球肝癌死亡人数的27%～47%[1-3]。其根治方法是手术切除，但因为开腹手术造成的创伤大、卧床时间长，严重影响术后康复进程。现阶段不能手术根除的中晚期肝癌首选方法是经导管肝动脉化疗栓塞术。重组人血管内皮抑制素注射液能特异性地抑制血管内皮细胞迁移及增殖，从而起到抑制肿瘤的转移及生长作用，于2006年获批应用于肝癌的治疗[4]。细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)是一种杀瘤活性高、体外增殖能力强的广谱抗肿瘤免疫活性细胞，树突状细胞(DC)是抗原递呈细胞中功能最强的。相关文献报道，DC-CIK细胞免疫法在临床得到越来越多的重视，具有提高机体免疫力的同时，对肿瘤细胞具有高效的杀伤能力，可清除体内残留的微小肿瘤病灶，是治疗恶性肿瘤的一种新方法[5]。本研究对2016年2—9月中国石油天然气集团公司中心医院接受治疗的中晚期肝癌105例的临床资料进行回顾性分析，探讨DC-CIK细胞免疫治疗在重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗治疗中晚期肝癌的效果。现报告如下。

1 资料和方法

1.1临床资料 本组105例。病例入选标准：①年龄>18岁；②腹部超声、CT等影像学支持肝肿块的存在；③甲胎蛋白(AFP)>400 μg/ml；④行穿刺针吸细胞学检查，明确肝癌的诊断；⑤均为初次接受细胞免疫、重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗治疗；⑥血常规、肾功能、心电图均在正常范围；⑦无其他恶性肿瘤。按治疗方法分为观察组54例和对照组51例。两组性别、年龄、体重指数、乙型肝炎病史、病程等方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。见表1。本研究开展前均得到患者的知情同意，并且通过本院医学伦理委员会审查批准。

表1 两组中晚期肝癌患者临床资料比较

注：对照组采用重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗，观察组在对照组基础上加用细胞免疫治疗

1.2治疗方法

1.2.1对照组：经股动脉穿刺插管至肝固有动脉及其分支行造影术，明确肝脏肿瘤的供血动脉位置，先灌注重组人血管内皮抑制素注射液(山东先声麦得津生物制药有限公司，国药准字：20151217)15 mg，再灌注脱氧核苷酸钠注射液(北京赛升药业股份有限公司，国药准字：20151022)0.5 g，注射用羟喜树碱[费森尤斯卡比(武汉)医药有限公司，国药准字：20151114)]20 mg，再将重组人血管内皮抑制素注射液15 mg、注射用盐酸吡柔比星(浙江海正药业股份有限公司，国药准字：20151006)40 mg、碘化油15 ml充分混匀后缓慢注入供血动脉。少数患者还需加用吸收性明胶海绵栓塞。

1.2.2观察组：在对照组治疗的基础上，辅加细胞免疫治疗。取患者外周血100 ml，经淋巴分离液梯度离心，取界面层单个核细胞，用PBS悬浮细胞，离心洗涤细胞3次，用无血清培养基培养3 h。收集非贴壁细胞(CIK细胞)置于加含有IFNR的AIMV培养基培养；收集贴壁细胞(DC细胞)，置于含有GM-CSF的AIMV培养基培养。观察2个培养基每日细胞生长情况，期间不定时补充培养基成分及促熟剂。两个培养基共培养2周，后收集DC-CIK细胞，注入0.9%氯化钠注射液200 ml中，同时辅加20%人血白蛋白250 ml静脉滴注。

1.3观察指标及方法

1.3.1临床疗效判定：治疗前与治疗半年后患者分别行腹部CT检查，按照RECIST实体肿瘤评价标准[5]，将患者治疗效果分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、疾病恶化(PD)。治疗有效缓解率(ORR)=(CR+PR)/总例数×100%。

1.3.2生活质量：根据KPS评分标准[6]评定患者治疗前后的生活质量。进步：治疗后较治疗前提高15分以上；稳定：治疗后较治疗前提高或降低15分以内；恶化：治疗后较治疗前降低超过15分。有效率=(进步+稳定)/总例数×100%。

1.3.3不良反应：感染、消化道反应、白细胞降低、肾功能损害。

2 结果

2.1两组患者临床治疗效果比较 观察组的ORR率为53.70%，对照组的ORR率为31.37%。差异有统计学意义(χ2=5.3409，P<0.05)。见表2。

2.2两组患者生活质量评分比较 观察组生活质量评分改善有效率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=10.5019,P<0.01)。见表3。

2.3两组患者不良反应比较 两组肾功能损害、白细胞降低、消化道反应、感染发生情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。两组不良反应均予对症治疗后明显缓解。

表2 两组中晚期肝癌患者治疗效果比较

注：对照组采用重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗，观察组在对照组基础上加用细胞免疫治疗;aP<0.05

表3 两组中晚期肝癌患者生活质量评分改善有效率比较

注：对照组采用重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗，观察组在对照组基础上加用细胞免疫治疗;aP<0.01

表4 两组中晚期肝癌患者不良反应发生情况比较

注：对照组采用重组人血管内皮抑制素注射液联合肝动脉栓塞化疗，观察组在对照组基础上加用细胞免疫治疗

3 讨论

原发性肝癌是我国较常见的恶性肿瘤之一，约76%的原发性肝癌合并肝硬化，其治愈率低，3年生存率<19%[8-9]。因其发病隐匿，临床症状不典型，早期诊断较为困难，大多患者就诊时已近中、晚期，丧失了最佳手术时机，生存率显著下降。目前在无法手术完全切除的肝癌治疗中，经肝动脉化疗栓塞术已经成为主要治疗方法；但术后肿瘤会发生缺氧、缺血，产生血管内皮生长因子等，促进肿瘤血管的再生，最终造成肿瘤再次复发，使该疗法的疗效降低[10-11]。血管内皮生长因子(VEGF)是目前体内最强的血管生成因子，其不仅与肝癌供血血管的生成有关，也是能客观反映肝癌复发和转移的重要调节因子。有专家学者发现[12-13]，重组人血管内皮抑制素注射液是一种新型抗肿瘤血管生成的化疗药物，主要作用于VEGF的受体，直接阻断VEGF的作用，能够对血管生成调节因子有一定的改变，特异性抑制血管内皮细胞迁移及增殖，充分调动自身抗血管生成的作用，同时有效抑制肝肿瘤的再次生长。其在联合经肝动脉化疗栓塞术治疗中晚期肝癌疗效已经得到了肯定。钟萍等[14]研究认为，该药联合经肝动脉化疗栓塞术能提高中晚期肝癌的有效率，耐受性较好，毒性更小。因肝癌在启动免疫应答及免疫应答方面均存在不同程度缺陷，故肝癌属于一类免疫相关性的肿瘤。相关研究发现[15-17]，经肝动脉化疗栓塞术后肝癌患者抗肿瘤免疫功能会显著下降，更易导致肿瘤再次复发。

细胞免疫治疗法具有清除其体内微小残留病灶、提高机体免疫力、延长生存期、降低肿瘤复发率的作用，主要是采集患者的DC-CIK细胞，将其提取、回输至患者体内，可以有效弥补经肝动脉化疗栓塞术后的缺陷，已成为了治疗中晚期肝癌患者新手段[18-22]。曹亮等[23]研究表明，细胞免疫治疗联合经肝动脉化疗栓塞术有助于提高肝癌患者的生存期。本研究中发现，观察组ORR率高于对照组，印证了细胞免疫具有对肝肿瘤更好的杀伤能力，显著改善生存质量，有利于辅助康复进程，且观察组不良反应与对照组比较差异无统计学意义，与刘松等[24]研究一致；该研究认为细胞免疫是自体细胞回输，不会额外增加排斥反应等并发症。本次研究中仍存在不足，如未能对患者进行1、3年生存率的统计分析，故会在后续研究中继续与患者保持联系，探索两种治疗方法的远期生存率。

综上所述，细胞免疫治疗联合重组人血管内皮抑制素注射液肝动脉栓塞化疗治疗中晚期肝癌，可显著提高疾病缓解率，改善生存质量，值得临床广泛借鉴使用。但本研究未对远期生存率深入探究，对此需要进一步跟踪随访。

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