强心胶囊对慢性心力衰竭大鼠BNP 及NT-pro BNP的影响

陈晶，胡新颖，何长远，刘慧多，叶婷

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨 150001)

慢性心力衰竭(Chronic Heart Failure，CHF) 是因长期心脏负荷过重，导致心室收缩功能下降，射血功能减弱的一组复杂临床综合征，是大部分心血管疾病的最终结果，是现今最为主要的心血管疾病之一[1]。在我国CHF的发病率呈逐年增高趋势[2]，其5年死亡率高于60%[3]。在2014年最新发布的《中国心力衰竭和治疗指南》中第一次提到了应增加中医药治疗在CHF中的深入研究及应用，从传统中药中开发治疗CHF的有效药物，将会对提高心衰患者的生活质量，延长心衰患者的寿命有重大的意义[4]。强心胶囊是笔者在多年临床经验基础上，根据CHF心肾阳虚、瘀血水饮互结的病机特点，结合温阳化饮、益气活血的治疗原则，研制而成的经验方。本实验组前期对该方中的药物进行了纯化提取，获得了稳定的强心胶囊药物有效成分[5]；药理学研究证明，强心胶囊具有提高CHF大鼠SR Ca2+-ATP酶活性[6]，改善心脏血流动力学[7]，抑制心肌细胞凋亡[8]的作用。脑钠肽(B-type natriuretic peptide, BNP)及N-末端脑钠肽前体(N-terminal-pro-type B Natriuretic Peptide, NT-pro BNP)具有拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)，促进血管扩张，排钠利尿的作用，在2016 年 Esc 心力衰竭指南中建议[9]，将生物标志物中最有价值的BNP、NT-pro BNP作为CHF预后的“金标准”。

本实验通过观察强心胶囊抗CHF过程中对心脏功能、BNP及NT-pro BNP的影响，进一步为强心胶囊防治CHF提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF级健康雄性SD大鼠90只，体质量(180±20)g，由黑龙江中医药大学药物安全评价中心提供，合格证号：SYXK(黑)2013-012。

1.2 实验仪器与药品

Fresco低温冷冻离心机(美国Thermo公司);AL204电子天平(瑞士METTLEY TOLEDO公司);MultiSkan3酶标仪(美国Thermo公司);ACUSON sequoia512超声显像仪(德国SIEMENS公司);水平电泳仪(美国Bio-Rad公司)。

强心胶囊：制附子、红参、黄芪、白芍、葶苈子、丹参、延胡索、三七等药物组成(由黑龙江中医药大学实验中心制备)，0.4 g/粒，1 g药粉相当于生药2.99 g；马来酸依那普利：购自江苏恒瑞医药股份有限公司，10 mg/片，国药准字H32000378；注射用盐酸阿霉素：购自北京华奉联博科技有限公司，10 mg/支，国药准字0405E1。

BNP ELISA试剂盒：购自上海研吉生物科技有限公司；NT-pro BNP ELISA试剂盒：购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.3 模型制备及分组

将90只SD大鼠，依据体质量随机抽取10只作为空白组，其余80只采用尾静脉注射阿霉素方法[10]制备CHF模型大鼠，空白组大鼠尾静脉注射等容积的生理盐水。6周后对大鼠进行超声心动图检查，模型制备成功的标志为左心室射血分数(LVEF)值低于45%[11]。将65只CHF模型大鼠，根据体质量按随机数字表法随机分为模型组13只、西药组13只、强心胶囊低剂量组(QXCL组)13只、强心胶囊中剂量组(QXCM组)13只、强心胶囊高剂量组(QXCH组)13只，加之前的空白组10只，共6组。

1.4 给药方法

模型制备成功后开始对各组大鼠灌胃给药，依照人与大鼠给药剂量系数折算公式计算给药量，西药组给予1.8 mg/(kg·d)依那普利溶液，QXCL组给予0.66 g/(kg·d)强心胶囊溶液灌胃、QXCM组给予1.32 g/(kg·d)强心胶囊溶液灌胃、QXCH组给予2.64 g/(kg·d)强心胶囊溶液灌胃，空白组和模型组均给予1 mL/100 g生理盐水灌胃，每日1次，共干预治疗4周。

1.5 超声心动图

造模前、造模后及治疗后对各组大鼠行超声心动图检查。给予大鼠腹腔注射0.3 mL/100 g 10%水合氯醛溶液进行麻醉，将大鼠仰卧固定，胸前区备皮。使用小动物超声诊断仪，选用14 MHz的超声探头，测量各组大鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)，取3个心动周期平均值；依照Teichholtz公式计算左心室短轴缩短率(LVFS)、左室射血分数(LVEF)，评价大鼠心脏功能。

1.6 ELISA检测血清BNP、NT-pro BNP含量

末次给药后隔日采血，采血前12 h禁食不禁水，腹腔注射10%水合氯醛溶液0.3 mL/100 g麻醉各组大鼠，以5 mL注射器行腹主动脉取血，静置30 min，然后以3 500 r/min离心15 min，取上层血清，通过ELISA检测BNP、NT-pro BNP。

1.7 统计学分析

2 结果

2.1 造模前、造模后空白组与模型组大鼠超声心动图各项指标比较

表1 造模前、造模后空白组与模型组大鼠超声心动图比较

注：造模后，与空白组比较，#P<0.01

造模前，与空白组比较，模型组大鼠LVEDD、LVESD、LVEF、LVFS分别统计学处理，差异无统计学意义(P>0.05)，说明具有可比性。

造模后，与空白组比较，模型组大鼠LVEDD、LVESD的数值显著增加(P<0.01)，说明大鼠的心脏结构发生了明显的改变；模型组大鼠LVEF、LVFS的数值显著降低(P<0.01)，说明大鼠的心脏功能明显降低，本实验成功建立大鼠慢性心力衰竭模型。结果见表1。

2.2 强心胶囊对CHF大鼠超声心动图检查结果的影响

表2 强心胶囊对大鼠超声心动图的影响

注：与空白组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；与西药组比较，□P<0.05，□□P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01

与空白组比较，模型组LVEDD、LVESD显著升高，LVEF、LVFS显著降低，具有显著性差异(P<0.01)。与模型组比较，各治疗组LVEDD、LVESD均有不同程度的降低，其中西药组、QXCM组、QXCH组LVEDD、LVESD显著降低(P<0.05，P<0.01) ，QXCL组LVEDD、LVESD降低无统计学意义(P>0.05)；各治疗组LVEF、LVFS均有不同程度的升高，其中西药组、QXCM组、QXCH组LVEF、LVFS显著升高(P<0.05，P<0.01)，QXCL组LVEF、LVFS升高无统计学意义(P>0.05)。与西药组比较，QXCL、QXCM、QXCH组LVEDD、LVESD均升高，LVEF、LVFS均降低，QXCL组LVEDD、LVESD显著升高(P<0.05)，LVEF、LVFS显著降低(P<0.05,P<0.01)；QXCM、QXCH组LVEDD、LVESD升高无统计学意义(P>0.05)，QXCM、QXCH组LVEF、LVFS降低无统计学意义(P>0.05)。见表2。

2.3 强心胶囊对各组大鼠BNP、NT-pro BNP水平的影响

表3 强心胶囊对CHF大鼠BNP、NT-pro BNP水平的影响

注：与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01；与西药组比较，△P<0.01，△△P<0.05

与空白组比较，模型组、西药组、QXCL组、QXCM组及QXCH组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较，西药组、QXCL组、QXCM组及QXCH组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均显著降低(P<0.01)。与西药组比较，QXCL组、QXCM组及QXCH组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均升高，其中QXCL组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平显著升高(P<0.01)，QXCM组大鼠血清中NT-pro BNP水平明显升高(P<0.05)，QXCH组升高无统计学意义(P>0.05)。见表3。

3 讨论

慢性心力衰竭为西医学病名，在祖国医学中当属“心悸”“喘证”“水肿”等疾病的范畴。其病因多为原脏或它脏疾患迁延难愈导致，属病重日久，久病伤肾；根据该病心悸怔忡、尿少水肿、喘息不得卧、畏寒肢冷等的常见临床症状，慢性心力衰竭的演变规律在笔者看来，一般起病为心气虚，后至心阳虚，因心肾同源，心气根于肾，心阳有赖于肾阳的温煦，所以慢性心力衰竭发生的根本应为心肾阳虚，血瘀、水饮是其病理产物，遂确立温阳化饮、益气活血之治法。遵循以上治疗方法，笔者经过20多年的临床经验，研制而成纯中药复方强心胶囊。方中以附子为君，味辛甘，为温阳圣药。臣以黄芪补脾肺之气、红参补气强心。佐以葶苈子开肺利窍，下气行水；白术健脾燥湿、茯苓健脾渗湿，脾土得以健运，小便则通利，水湿得除。佐以丹参、三七、延胡索,疏通心脉，活血化瘀。因附子为阳中之阳大燥之药，利用白芍敛阴和营之功效予以制约，白芍还具有活血脉，利小便之功。全方配伍精当，用药严谨，诸药并用，共奏温阳化饮，益气活血之功效。

BNP前体肽链结构的氮末产物为NT-pro BNP，与BNP同属钠尿肽家族[12]。当心脏容量负荷或者压力发生改变时，心肌细胞释放的前脑钠肽原(Pre-pro BNP)被迅速分解为有生物活性的BNP和没有生物活性的NT-pro BNP[13]，以维持循环系统压力、渗透压及容量的稳态。研究证实，与非心衰人群比较，CHF患者血液中BNP及NT-pro BNP水平明显增高[14-15]，且其血清中BNP，NT-pro BNP水平与其慢性心力衰竭程度息息相关。动物实验发现，在慢性心力衰竭早期，大鼠血浆BNP，NT-pro BNP的水平已明显增高[16]。

本实验观察到，造模后，模型组大鼠LVEDD、LVESD的数值显著升高，LVEF、LVFS的数值显著降低，说明模型组大鼠的心腔明显增大，心肌收缩力降低，心脏射血能力降低，心功能下降，提示CHF模型制备成功。治疗后，西药组、QXCM组、QXCH组LVEDD、LVESD显著降低，LVEF、LVFS明显升高，说明西药组和强心胶囊均能不同程度增强心肌收缩能力，改善CHF大鼠心腔增大，提高心脏功能，西药组和QXCM组、QXCH组相比较治疗CHF效果相当。与CHF大鼠模型组比较，各治疗组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均显著降低，说明强心胶囊组和西药组均能明显降低大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平。与西药组比较，QXCL、QXCM、QXCH组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平均不同程度升高，其中QXCL、QXCM组大鼠血清中BNP、NT-pro BNP水平显著升高，QXCH组升高无统计学意义，说明西药组降低BNP、NT-pro BNP水平优于QXCL、QXCM组，且QXCH组与西药组降低BNP、NT-pro BNP水平相当。

综上所述，强心胶囊能够增强CHF模型大鼠心脏功能，并有效的降低CHF模型大鼠血清中重要生物学标志物BNP、NT-pro BNP水平，可明确的说明强心胶囊具有抗CHF的作用，并且其降低BNP、NT-pro BNP水平与其应用剂量具有依赖性。

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