高效液相色谱法测定食品中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠

◎ 冯民贤

（柳州市产品质量检验所，广西 柳州 545006）

食品是人类赖以生存和发展的物质基础，食品安全则是影响人体健康和国计民生的重大问题。近年来，随着食品工业快速发展，食品质量问题越来越突出，尤其是在食品加工中，超量或违规使用添加剂现象屡禁不止[1]。食品中防腐剂主要以苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐为主。防腐剂可以抑制食品中微生物的繁殖或杀灭微生物，但添加过量防腐剂，不仅会部分破坏食物中维生素B1，还能够使钙形成不溶性物质，影响机体对钙的吸收，同时对胃肠有刺激作用，过量食用防腐剂还可诱发癌症[2]。GB/T 5009.28-2003等[3-5]只能检测一种或几种添加剂，测定多种时需要变换仪器条件，耗时费力。为提高检测效率，对食品安全质量进行有效控制，建立同时检测多种食品添加剂的方法显得尤为重要。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

SHIMADZU LC-20ATvp高效液相色谱仪，二极管阵列检测器，SHIMADZU LCsolution色谱工作站；安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠（国家标准物质，浓度均为1.0 mg/mL）；色谱甲醇，天津化学试剂厂；乙酸铵、氢氧化钠、亚铁氰化钾和乙酸锌等均为分析纯，实验用水均为二次水。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱，SHIMADZU-PACK VP-ODS（250 L×4.6，5 μm）；流动相，V（甲醇）∶V（0.02 mol/L乙酸铵）=8∶92；检测波长，230 nm；流速，1.0 mL/min；进样量，10 μL。

1.2.2 主要溶液配制

安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠为国家标准物质，浓度均为1.0 mg/mL，分别配制成浓度为0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10 mg/mL的标准使用液。

0.02 mol/L乙酸铵溶液：称取1.54 g乙酸铵溶于1 000 mL容量瓶，溶解后加水稀释至刻度，调节pH值为6.5。

0.02 mol/L氢氧化钠溶液：称取0.8 g氢氧化钠，用水溶解，定容至1 000 mL容量瓶中。

亚铁氰化钾溶液：称106.0 g亚铁氰化钾，加水溶解并定容至1 000.0 mL。

乙酸锌溶液：称219.0 g二合水乙酸锌，加水溶解并定容至1 000.0 mL。

实验样品：红茶饮料、盐渍蕨菜、绿豆饼、牛腊巴。

1.2.3 样品制备

称取5.00 g样品，用热水溶解，用氢氧化钠调节pH值至中性，分别加5 mL亚铁氰化钾和乙酸锌溶液，用水定容至100 mL。静置，离心过滤，取上清液用0.45 μm滤膜过滤，进样。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

实验中选用的流动相为甲醇和乙酸铵溶液，分别采用不用比例的流动相，如5∶95、8∶92、10∶90、15∶85，分别在流速1.0 mL/min进样分析。结果表明，在体积比为8∶92的分配比下，运行时间为13 min，时间较短，各组分分离效果好，故本实验采用此流动相体系对样品进行测定。标准溶液中各组分出峰时间的先后顺序为安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。标准浓度为0.1 mg/mL的谱图、样品谱图，分别如图1、2所示。

图1 4种标准液相色谱图（从左依次为甜蜜素、苯甲酸、山梨酸、糖精钠）

图2 牛腊巴样品液相色谱图（山梨酸检出）

2.2 线性范围及检出限

在本实验条件下，安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠在0～0.10 mg/mL具有良好的线性关系，见表1。按3倍基线噪声（S/N=3）计算，该方法的检出限分别为 0.004、0.001 8、0.001 2、0.003 g/kg。

表1 4种添加剂的线性范围表

2.3 重复性实验

准确称取6份样品加标回收，分别按照1.2.3方法进行供试品前处理，并按1.2.1设定的色谱条件进行色谱分析。对安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的峰面积的重现性进行分析，结果各组分的RSD（n=6）分别为 1.56%、2.13%、1.13%、1.82%。

2.4 加标回收率实验

取红茶饮料样品5 g，分别在0.15、1.20 mg两个加标水平下平行测定3次，加标回收率和相对标准偏差见表2。由测定结果可知，1.20 mg加标水平的回收率高于0.15 mg，4种添加剂的回收率为86.7%～100.0%，相对标准偏差（RSD）均小于4%。

表2 回收率实验结果表

2.5 样品的测定

对本所常检测的红茶饮料、盐渍蕨菜、绿豆饼、牛腊巴分别按照1.2.3方法进行供试品前处理，并按1.2.1设定的色谱条件进行分析，每个样品平行测定2次，结果见表3。

表3 样品的测定结果表（单位：g/kg）

3 结语

本文建立了同时检测食品中4种添加剂（安赛蜜、糖精钠、苯甲酸和山梨酸）的高效液相色谱法，通过流动相比例的优化，选定了合适的流动相比例，确定了色谱条件。测定结果表明，该方法分离度好，对称性好，结果准确，操作简单，可用于食品中多种添加剂使用的测定，大大提高了工作效率。

[1]许旭传，刘 华.高效液相色谱法测定饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠[J].分析仪器，2008（4）：67-69.

[2]马红梅，王 静.高效液相色谱法测定熟悉中山梨酸[J].中国卫生检验杂志，2007（11）：1936-1937.

[3]中华人民共和国卫生部.GB/T5009.28-2003 食品中糖精钠的测定[S].北京：中国标准出版社，2003.

[4]中华人民共和国卫生部.GB/T5009.29-2003 食品中苯甲酸、山梨酸的测定[S].北京：中国标准出版社，2003.

[5]中华人民共和国卫生部.GB/T5009.140-2003 食品中安赛蜜的测定[S].北京：中国标准出版社，2003.