电针内关穴对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠的影响

萨喆燕 ，万 隆 ，黄倩茹 ，许金森

（1.福建省中医药研究院，福建 福州 350003；2.福建省经络感传重点实验室，福建 福州 350003）

冠状动脉性心脏病，简称冠心病，是全球死亡率最高的疾病之一，严重威胁人类健康和生活质量，据统计全球每年约有1700万人死于冠心病［1］，我国也是冠心病发病率和病死率上升较快的国家之一［2］。临床研究显示，针刺治疗冠心病有一定疗效［3-4］，但其机制仍不明确。本研究采用多点位皮下注射盐酸异丙肾上腺素（isoproterenol，ISO）建立大鼠急性心肌缺血模型，通过电针内关穴，观察治疗前后大鼠心肌缺血程度的改变。

1 实验材料

1.1 实验动物 成年雄性SD大鼠18只，清洁级，体质量（250±20）g，购自福建医科大学实验动物中心，许可证号：SCXK（闽）2012-0001。实验前7天适应性饲养于福建省中医药研究院实验动物中心，饲养条件：温度（22±2）℃，湿度（55±15）%，12 h 明暗交替，自由进食与饮水。

1.2 实验仪器 PowerLab多导数据采集分析系统（澳大利亚埃德公司）；小动物麻醉呼吸系统（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；Varioskan Flash全波长扫描式多功能酶标仪（美国Thermo公司）；SDZ-Ⅱ型华佗牌电子针疗仪（苏州医疗用品厂有限公司）。

1.3 实验试剂 ISO购于美国Sigma公司；肌酸激酶（CK）活性检测试剂盒（货号 MAK116-1KT）、谷草转氨酶（AST）活性检测试剂盒（货号MAK055-1KT）均购自美国Sigma公司。

2 实验方法

2.1 模型制备 采用随机数字表法将SD大鼠分为对照组、模型组、电针组各6只。将大鼠连接至小动物呼吸麻醉机，吸入异氟烷，在麻醉状态下，通过PowerLab多导生理记录仪记录正常状态下大鼠心电图（electrocardiogram，ECG）。对照组采用皮下多点位（大鼠四肢内侧根部和背部）注射生理盐水（85 mg／kg），模型组和电针组皮下多点位注射ISO（85 mg／kg），分别注射2次，间隔24 h。确认造模成功的ECG变化为T波由正向变为负向或呈双相，并伴有ST段抬高。

2.2 干预措施 电针组于第2次注射ISO后24 h开始干预，参考《实验针灸学》［5］选取内关穴，采用0.25 mm×13 mm华佗牌无菌毫针直刺0.1 cm，连接电针仪，电压5～10 V，以针体轻微抖动为度，疏密波，频率 2／10 Hz，每次 20 min，每日 1 次，连续治疗5 d。对照组和模型组给予同等条件抓取，不做任何治疗。

2.3 观测指标

2.3.1 体质量变化率 分别对第1天、第7天实验前3组大鼠进行称重，并计算体质量变化率。

体质量变化率＝（第7天体质量－第1天体质量）／第1天体质量×100%。

2.3.2 ECG分析 治疗结束后分别记录3组大鼠的ECG，各取5个心动周期，以T波终点至P波起点连线，即TP连线为基线，测量ST段电位偏移变化，作为评价心肌缺血程度的指标。

2.3.3 CK、AST活性检测 在治疗结束后经大鼠腹主动脉采血3 mL，静置30 min后，3500 r／m常温离心15 min，提取血清，按照试剂盒说明，用多功能酶标仪测定心肌激酶（CK）、谷草转氨酶（AST）的活性。

2.4 统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件进行分析处理，计量资料符合正态分布以（）表示，采用方差分析、LSD检验。

3 实验结果

3.1 3组体质量变化率比较 见表1。

表1 3组体质量变化率比较（）%

表1 3组体质量变化率比较（）%

注：与对照组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.01。

组别对照组模型组电针组大鼠／只6 6 6体质量变化率19.31±0.78 8.72±1.201）13.26±0.801）2）

3.2 3组ST段电位偏移值比较 见表2。

表2 3组ST段电位偏移值比较（） μV

表2 3组ST段电位偏移值比较（） μV

注：与对照组比较，1） P＜0.01；与模型组比较，2） P＜0.01。

组别对照组模型组电针组大鼠／只6 6 6 ST段偏移值104.30±23.56 396.18±47.421）182.01±34.452）

3.3 3组CK、AST活性比较 见表3。

表 3 3 组 CK、AST 活性比较（）U／L

表 3 3 组 CK、AST 活性比较（）U／L

注：与对照组比较，1） P＜0.01，2） P＜0.05；与模型组比较，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

组别对照组模型组电针组大鼠／只6 6 6 CK 129.02±17.61 194.17±11.001）112.29±14.173）AST 52.56±4.65 70.62±5.582）53.33±5.324）

4 讨论

急性心肌缺血模型的制备方法包括冠脉结扎法、微量直流电刺激法、球囊堵塞法以及药物注射法等［6］。本研究采用多点皮下注射ISO造成大鼠急性心肌缺血损伤。大剂量注射ISO可激活心肌细胞β1受体，使心肌收缩加强，代谢旺盛，增加耗氧量；同时激活心肌细胞β2受体，扩张外周血管，减少回心血量，造成动脉压下降、冠脉血流减少，导致心肌缺血、缺氧，引发缺血性心肌病。这种损伤与人急性心肌缺血比较相似，因此常作为急性心肌缺血的动物模型之一［7］。

ISO造成心肌缺血的主要指标可用Ⅱ导联心电图ST段的偏移值来评价［8］。本研究结果也提示皮下注射ISO后，模型组大鼠ST段偏移值显著高于对照组。体质量变化可直观反映大鼠生理机能状况，造模后模型组大鼠体质量变化率降低，表明注射ISO影响大鼠生理机能状况。血清心肌酶活性水平与心肌细胞坏死程度密切相关，可用于判断心功能和心肌细胞的受损程度，心肌酶活性降低成为对心肌细胞起保护作用的指标之一［9］。注射ISO后模型组大鼠血清CK、AST活性较对照组显著升高，这些结果在一定程度上反映出注射ISO导致大鼠心功能改变及心肌缺血损伤。

内关穴不仅是动物实验取穴的常用穴位，也是临床治疗冠心病的常用穴位。内关穴首见于《灵枢·经脉》，是手厥阴心包经的络穴，又是八脉交会穴之一，通于阴维脉，与心包络、心之间相互关联，存在着不可分割的内在联系［10］。针灸临床疗效产生的关键在于：作用特定经络、特定腧穴产生特定效应，因此临床上的取穴原则，都是以穴位-经络-脏腑为核心［11］。 因此，本研究遵循“经脉所过，主治所及”，循经选取内关穴作为针刺穴位，研究电针治疗心肌缺血的特异性。结果发现，电针组大鼠体质量变化率显著高于模型组，提示电针后大鼠生理机能状态好转。此外，电针组大鼠ST段偏移值明显低于模型组，心肌酶CK活性及AST活性均显著下降，均提示电针内关穴可以改善心肌缺血大鼠的心功能，减轻大鼠心肌缺血程度，起到对抗心肌缺血的作用。

本研究通过ECG、心肌酶等指标观察了电针内关穴治疗心肌缺血的疗效，为丰富针刺疗效提供了更加详实的实验依据，也为今后课题组进一步研究电针治疗心肌缺血的机制奠定了基础。

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