PR-SET7在食管癌中表达及其临床意义

郑建，陈建，叶钢

（武警江苏省总队医院 胸外科，江苏 扬州 225003）

PR-SET7是现今发现唯一能够特异性单甲基化组蛋白H4赖氨酸20位（histoneH4 lysine20，H4K20）的赖氨酸甲基转移酶（Lysinemethyltransferase）[1-2],PR-SET7又称SETD8、SET8、KMT5a，与人类肿瘤的发生、生长、转移等多个环节密切相关[3]，TAKAWA等[4]研究发现PR-SET7在肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等多种肿瘤组织中的表达均增强，与肿瘤的发生、发展呈正相关。本研究通过免疫组织化学法检测食管癌组织中PR-SET7的表达，探讨食管癌组织中PR-SET7的表达及其与临床特征的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

标本取自2010年6月-2011年2月武警江苏省总队医院胸外科行手术治疗，经病理读片确定为食管鳞状细胞癌患者32例。其中，男性19例，女性13例。年龄48～73岁，平均62岁。所有患者术前均未行放化疗治疗。

1.2 免疫组织化学染色及评估

所有标本均取自该院病理科，组织经10%甲醛固定、石蜡包埋，切成4μm切片，65℃烘片24 h，常温储存备用。取组织石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，超纯水洗3次，甲醇+H2O2去过氧化物；PBS洗5 min；柠檬酸缓冲液修复10 min，室温自然冷却，PBS洗2次；羊血清封闭2 h；加一抗孵育，一抗为鼠抗人PR-SET7多抗（1∶300，武汉Abcam公司），4℃过夜；1%PBS-T洗2次，PBS洗1次5 min；二抗为鼠兔通用型二抗[基因科技(上海)有限公司]，室温1 h，PBS洗3次，切片经二氨基联苯胺（DAB）显色，蒸馏水终止，苏木素复染，盐酸酒精分化，45℃水浴返蓝，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，PR-SET7阳性基因判断标准以癌组织或癌旁组织的胞浆及胞核出现棕黄色为阳性,免疫组织化学评分采用H-score评分系统法[5]，H-score=阳性强度×100个细胞中阳性细胞数目。阳性强度分为阴性（0分）、弱阳性（1分）、中等阳性（2分）和强阳性（3分）。本研究将评分0～200分的组织定义为低表达，＞200分的组织定义为高表达。结果由2位资深病理科医师阅片，取所得的H-score均值纳入统计。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析。计数资料以百分率（%）表示，运用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PR-SET7在食管癌组织中的表达

PR-SET7主要在细胞核中表达，在食管癌组织中高表达，在癌旁组织中低表达（见附图）。统计学分析表明PR-SET7在食管癌组织中的高表达率为81.25%，在癌旁组织中的高表达率为15.62%，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

附图 PR-SET7在食管癌组织及癌旁组织中的表达（免疫组织化学染色 ×200）

表1 食管癌组织及癌旁组织PR-SET7蛋白的表达量 [n=32，例（%）]

2.2 PR-SET7表达与食管癌临床特征的相关性

PR-SET7在食管癌组织中的表达量与肿瘤细胞分化程度、TNM分期和淋巴结转移相关（P＜0.05），肿瘤分化程度低、Ⅲ期伴淋巴结转移的癌组织PRSET7具有高表达率。与患者的性别、年龄无相关（P＞0.05）。见表2。

表2 PR-SET7在食管癌组织中的表达与临床特征的相关性 例（%）

3 讨论

研究表明，PR-SET7在细胞周期、DNA复制起始、基因组稳定、DNA损伤修复及细胞凋亡等多方面发挥作用[6-10]，涉及到肿瘤的发生、发展及预后等多个环节。多种研究表明，PR-SET7的rs16917496位点单核苷酸多态性有可能成为肿瘤发病和预后的指标之一[3]，其通过相关癌基因及抑癌基因进行转录调控，在肿瘤发生、发展中起重要作用。例如PR-SET7介导的p53K382me1修饰可增强L3MBTL1与p53的相互作用，抑制p53的转录作用。然而当DNA损伤时，PR-SET7表达降低，导致p53K382me1水平下降，L3MBTL1与p53的结合作用减弱，L3MBTL1从p53靶基因解离，促使p53靶基因转录活化增强[11]。

本研究通过免疫组织化学方法检测PR-SET7在食管癌组织及癌旁组织中的表达，证实癌组织中PRSET7强表达，主要位于食管癌肿瘤细胞的胞核中，在胞浆中也有表达。根据统计结果，其在食管癌肿瘤细胞中的表达量高于癌旁组织，其与食管癌的肿瘤分化程度、病理学分期及淋巴结转移情况密切相关，提示PR-SET7的异常表达与食管癌的进展、转移及预后密切相关，但其在食管癌中的调控机制尚不明确。

在当前肿瘤生物学研究中，表观遗传学改变已经成为热点，通过DNA甲基化、非编码RNA调控、染色质重塑等领域的研究，对肿瘤预后评估提供了诸多有价值的分子标志[12]。目前研究提示在食管癌组织中存在多条异常激活的信号传导通路[13]，进一步研究PR-SET7在食管癌中调控机制，了解PR-SET7在食管癌中是否有其专属的调节通路，以及该通路上所存在的相关靶基因，对食管癌的预测、早期诊断、病情发展及预后等方面具有重要的价值，可作为一个评估食管癌潜在风险的重要因素，为食管癌的治疗及药物研发提供新的方向。

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