电针不同腧穴配伍对心肌缺血损伤大鼠心肌功能的影响

张丽+艾霞+彭页

[摘要] 目的 探討电针不同腧穴配伍对心肌缺血损伤大鼠心肌功能的影响。 方法 按随机数字表法将60只雄性Wistar大鼠分为正常组、模型组、腧穴配伍组、常规配穴组四组，每组各15只。造模方法：盐酸异丙肾上腺素皮下注射（5 mL/kg）。正常组注射同等剂量的0.9%氯化钠溶液，1次/d，连续1周；模型组造模；腧穴配伍组取造模成功的大鼠，电针其双内关穴、双足三里穴及关元穴，每天各1次，连续2周；常规配穴组取双内关、双神门及膻中，余法同腧穴配伍组。观察各组大鼠心电图变化及心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。 结果 与正常组比较，模型组心率（HR）加快明显，S-T段振幅抬高显著，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；电针干预后，腧穴配伍组及常规配穴组HR有所减慢，S-T段振幅抬高降低，与模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。与正常组比较，模型组大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性显著降低，MDA含量显著升高，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；电针干预后，腧穴配伍组及常规配穴组大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性显著升高，MDA含量降低，与模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；与常规配穴组比较，腧穴配伍组心肌SOD、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 腧穴配伍针刺法具有很好的保护心肌缺血的效果，能够有效减轻心肌细胞变性及心肌组织的损害，为临床运用针灸治疗心肌缺血性疾病提供依据。

[关键词] 腧穴配伍；电针；心肌缺血损伤；心肌功能

[中图分类号] R245 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）01（c）-0134-04

[Abstract] Objective To explore the effect of different acupoints of electroacupuncture on myocardial function in rats with myocardial ischemia injury. Methods Sixty male Wistar rats were randomly divided into four groups by random number table method： normal group， model group， acupoint compatibility group， normal distribution group， with 15 rats in each group. Building methods： subcutaneous injection of Isoproterenol Hydrochloride （5 mL/kg） was given. Normal group： the same dose of 0.9% sodium chloride solution was injected， once a day， for one week. Model group was made the model. Acupoint compatibility group： the successful rats of the model were taken， and each day， the electric needle of the double “neiguan”， double “zusanli” and “guanyuan” were performed respectively for two weeks. Normal distribution group： "neiguan"， double "shenmen" and "danzhong" were performed respectively， the followed method was as the same as the acupoint compatibility group. The changes of electrocardiogram in rats， and the activities of superoxide dismutase （SOD）， glutathione peroxidase （GSH-Px） and malondialdehyde （MDA） were observed. Results Compared with normal group， the heart rate （HR） in model group was accelerated significantly， and the amplitude of S-T segment was significantly enhanced， the differences were highly statistically significant （P < 0.01）. After the electroacupuncture intervention， the HR of the acupoints in the acupoint compatibility group and normal distribution group was decreased， and the amplitude of S-T was decreased， which had statistically significant differences compared with those of model group （P < 0.05）. Compared with the normal group， the activities of myocardial SOD and GSH-Px in the model group were decreased significantly， and the content of MDA was increased significantly， the differences were highly statistically significant （P < 0.01）. After the electroacupuncture intervention， the activities of SOD and GSH-Px of the myocardium of the rats in the acupoint compatibility group and normal distribution group were significantly increased， and the content of MDA was decreased， which had statistically significant differences compared with those of model group （P < 0.05）. Compared with normal distribution group， the activities of myocardial SOD and GSH-Px in the acupoint compatibility group were significantly increased， and the content of MDA was decreased significantly， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Compatibility of acupuncture acupoints method has very good protection effect for myocardial ischemia， which can effectively reduce the myocardial cell degeneration and the myocardial tissue damage， and it can provide basis for clinical controlling the myocardial ischemic diseases with acupuncture.endprint

[Key words] Acupoint compatibility； Electroacupuncture； Myocardial ischemia injury； Myocardial function

心肌缺血是因心脏的血液灌注量小、心脏供氧能力弱而导致的心肌能量代谢异常，不能维持心脏正常运行的一种病理特征[1]。心肌缺血的发生机制较为复杂，目前较为集中的观点是自由基的大量产生、细胞内钙离子的超载、心肌细胞的凋亡、中性粒细胞的过度浸润、能量代谢的异常及内皮细胞功能异常等均参与其发生[2-3]。中医学认为心肌缺血属“胸痹心痛”的范畴，本虚标实为其基本病机，以补虚泻实为其治疗原则[4]。多项研究显示，内关穴是历代针灸医案治疗心胸疾病的首选要穴，电针“内关”可保护缺血的心肌细胞[5-6]。本研究在已有文献[7-8]的基础上，以“内关”为主穴泻标实，配伍“足三里”“关元”穴补本虚，并与对照常规配穴法进行对比，观察电针以“内关”为不同腧穴配伍对心肌缺血损伤大鼠的治疗效应。

1 材料与方法

1.1 实验动物及分组

Wistar大鼠60只，雄性，11～13周龄，体重180～220 g，SPF级，均购自西安交通大学医学院实验动物中心，合格证号：SCXK（陕）2016-0011，室温条件下适养1周。按随机数字表法将其分为正常组、模型组、腧穴配伍组、常规配穴组，每组各15只。本研究经动物伦理委员会审批通过。

1.2 仪器与试剂

主要仪器：BIOBASE TD-6M离心机（山东博科生物产业有限公司）；日立全自动生化分析仪7600（罗氏）；BL-420F生物功能实验装置（泰盟科技）；华佗牌Hans电针仪（深圳市百合医疗器械有限公司）；华佗牌毫针（苏州医疗用品厂有限公司，0.25 mm×15 mm）。

主要试剂：盐酸异丙肾上腺素（美国Sigma，批号：201621）；肌钙蛋白T（cTnT）试剂盒（美国Sigma，批号：201605）；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）试剂盒（南京建成，批号：A001、A003、A005）。

1.3 模型制作

取盐酸异丙肾上腺素100 mg溶于100 mL 0.9%氧化钠溶液中，以5 mL/kg皮下注射大鼠背部来制作动物心肌缺血损伤模型，1次/d，连续1周。以心电图S-T段变异幅度≥0.1 mV为评价模型成功的标准。

1.4 方法

正常组：于正常大鼠背部皮下注射0.9%氯化钠溶液（5 mL/kg），1次/d，连续1周；模型组：制作心肌缺血动物模型；腧穴配伍组：制作心肌缺血动物模型，取造模成功的大鼠，电针其双内关穴、双足三里穴及关元穴，每天各1次，后进行相同于正常组的皮下注射，连续2周；常规配穴组：制作心肌缺血动物模型，每天电针双“内关”、双“神门”及“膻中”各1次，后进行相同于正常组的皮下注射，连续2周。

1.5 取穴及电针方法

参照《小动物针灸技法手册》[9]及《大鼠穴位图谱的研制》[10]取穴。内关穴：大鼠前肢桡骨内侧，与尺骨接合部下方1/3处，即离腕关节3 mm左右的尺桡骨缝间，腕横纹上3～4 mm，针刺深度直刺2～3 mm，用毫针直刺穿皮达筋间，捻转60 s；足三里穴：在膝关节下的外侧，腓骨头下约5 mm，直刺3～5 mm即可；关元穴：取大鼠脐下正中2～5 mm，即脐与耻骨联合上缘中点连线的上3/5与下2/5的交界处，呈45°角向剑突方向斜刺3 mm；神门穴：前肢腕横纹侧，直刺约2 mm；膻中穴：动物两乳连线中间点位置，即前胸正中部，呈约15°角斜刺2 mm[11-15]。

腧穴配伍组和常规配穴组分别取穴，毫针针刺后接电针仪。其中腧穴配伍组同侧内关穴和足三里穴配为一组电极；浅刺腹部关元穴附近处皮肤，作为辅助电极，与关元穴配为一组电极。常规配穴组同侧内关穴和神门穴配为一组电极；浅刺胸部膻中穴附近皮肤浅刺，作为辅助电极，与膻中穴配为一组电极。连续波，频率80次/min，强度1 mA，通电15 min，以大鼠肢体和胸腹部有明显震颤为度，1次/d，连续3周。

1.6 观察指标

各组大鼠心电图的变化情况：具体操作：干预后第2天，10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）进行大鼠麻醉，仰卧位固定于操作台，用针状电极刺入动物肢体皮下，参考人体标准导联Ⅱ连接的方法，将左下肢接正极，右上肢接負极，行泰盟BL-420F生物功能实验系统检测所有大鼠的心率（HR）及S-T段电压的改变情况。

心肌SOD、GSH-Px和MDA检测：左心室其余心肌组织剪碎液氮冷冻，每组各取心肌组织0.2 g溶于9倍体积的0.9%氯化钠溶液中研磨；研磨液离心，3000～4000 r/min，10 min，取上清液；心肌组织总SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量的检测按照酶联免疫吸附测定（ELISA）法以试剂盒说明书进行操作。

1.7 统计学方法

采用SPSS 20.0对所得数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LDS-t检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

在实验过程中，除模型组死亡1只外，余下各组均无动物死亡。

2.1 各组HR和心电图S-T段振幅结果比较

与正常组比较，模型组HR加快明显，S-T段振幅抬高显著（P < 0.01）；电针干预后，腧穴配伍组及常规配穴组HR有所减慢，S-T段振幅抬高降低，与模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

2.2 各组大鼠心肌总SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量测定结果比较endprint

与正常组比较，模型组大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性显著降低，MDA含量显著升高（P < 0.01）；电针干预后，腧穴配伍组及常规配穴组大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，与模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；与常规配穴组比较，腧穴配伍组心肌SOD活性、GSH-Px活性升高，MDA含量降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

3 讨论

心肌缺血一旦发生，会严重影响到心室复极正常化进行，缺血区相关导联的S-T段会出现明显的异常[16]，本结果中模型组大鼠的心电图Ⅱ导联S-T段变异幅度达0.18 mV，提示心肌出现缺血损伤，造模成功。

心肌缺血在中醫辨证医学中属“心痛”“胸痹”，多为脏腑气血不足、心脉失养、闭塞不畅所致。其病位在心，病性为标实本虚。标实者，多为劳逸失度、膏粱厚味、七情内伤，致气血所瘀不通后致痛；本虚者，多因久病体衰、禀赋有缺、营血虚少，使得心之气血不足[17-18]。本研究以中医传统的“治未病”理论作为依据，采用“标本配穴”，即选用固护正气的关元穴、足三里穴为本，以祛除邪气的内关穴为标。

MDA是机体内氧自由基作用于脂质过氧化代谢的最终产物，其含量能反映细胞氧化损伤的程度[19-20]。SOD和GSH-Px是一类抗自由基损伤的活性酶，前者能反映机体清除氧自由基的能力，后者能保护细胞膜稳定性，减轻线粒体膜脂质过氧化程度和心肌线粒体不可逆损伤[21]。本研究提示心肌细胞受到氧自由基的过度攻击，细胞脂质过氧化程度较高，氧化损伤较为严重，与模型组电镜显示线粒体损伤的结果一致，再次从微观角度证实心肌缺血模型制作成功。

不同腧穴配伍间的差异一直是基础针灸学研究的重点，合理的腧穴配伍能提高针灸疗效。标本配穴法是根据中医“治未病”理论提出的腧穴配伍理论。“本”即正气之本，“标”即病邪之标，“本”穴与“标”穴配伍旨在扶正祛邪。本研究中所选的关元穴是元阴、元阳关藏出入之所，有补元气、益肾精、扶人体之功效；足三里为胃经合穴和胃腑下合穴，发挥调理脾胃，补益气生化血之功效。本研究中的两穴相配，可调脾补肾、补益正气。内关穴为八脉交会穴之一，发挥宁心定智、理气宽胸之效。

本研究中，注射盐酸异丙肾上腺素之后，模型组大鼠心肌组织受损伤严重，这与心脏超声及心肌病理检测一致，且腧穴配伍可显著升高心肌缺血大鼠心肌SOD活性、GSH-Px活性，降低MDA含量，提示腧穴配伍针刺法具有较好的保护心肌缺血的效果，电针标本配穴可有效减轻心肌细胞变性及心肌组织的损伤，其机制可能是针灸通过调控氧自由基作用来改善心肌缺血，这为临床运用针灸治疗心肌缺血性疾病提供理论基础和科学依据。

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（收稿日期：2017-08-22 本文編辑：张瑜杰）endprint