γ-干扰素释放试验在活动性结核病患儿诊断中的应用

陈莲姣,阎青青,王 丹

(1.海南省乐东黎族自治县妇幼保健院儿科 572500；2.海南医学院第一附属医院儿科，海口 570102)

结核病是威胁人类健康的一大传染病，相关研究显示，全世界有1/3的人口感染结核分枝杆菌[1-2]。世界卫生组织报道，截止2015年12月，全球新发结核病2 125万病例，其中有100万例为儿童。我国虽有较高的卡介苗接种率，但是每年仍然有60万左右的新发病例[3-4]。肺结核的发病率和病死率居于我国传染病首位，防治结核病的形势依然非常严峻。在重症肺结核和结核性脑膜炎中，儿童患者呈显著上升趋势。笔者综合分析γ-干扰素释放试验在儿童肺结核的诊断效果及对临床治疗的指导意义，为治疗肺结核患儿提供参考。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年2月至2016年10月海南省乐东黎族自治县妇幼保健院收治的100例肺结核患儿作为研究对象，其中男66例、女34例；年龄6～14岁，平均(10.21±3.21)岁；体质量(30～52)kg，平均(45.32±2.41)kg。疫苗接种：未接种卡介苗42例，接种卡介苗58例。纳入标准：(1)符合中华医学会儿科学分会呼吸学组制订的儿童肺结核临床诊断标准；(2)最终均确诊为儿童肺结核；(3)所有入组患儿以及患儿家属均对本次研究知情同意。排除标准：(1)排除原发性免疫缺陷性疾病和中途退出者；(2)合并严重心、肝、肾功能异常及明显精神异常者；(3)难以遵循医嘱完成相关检查者。

1.2 方法

1.2.1 试剂和设备 结核杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒购自武汉海吉力生物科技有限公司，结核菌素购自成都生物制品研究所，抗酸染色液购自珠海贝索生物科技有限公司。

1.2.2 γ-干扰素释放试验方法 采集所有患儿2～3 mL静脉血，采用肝素钠进行抗凝处理，在室温下进行运输和储存， 在5 h内进行样品刺激，严格按照试剂盒说明书进行相关操作。

1.2.3 结核菌素皮肤试验 所有患儿均于采血后24 h内在手臂上注射0.1 mL结核菌素， 由医院结核科的相关工作人员进行相关操作；3 d后检测出最终结果，采用直尺来量取硬结块平均直径；以红肿硬块直径>15 mm来判断卡介苗接种者和未接种者；以红肿硬块直径>5 mm作为判断感染结核分枝杆菌的标准。

1.2.4 抗酸染色法 用接种环挑取带血小块，制成厚涂片之后，将制好的涂片进行抗菌染色处理，加温使得菌体能够着色，再使用亚甲蓝溶液复染处理，在油镜下进行观察，抗酸性细菌呈现红色，非抗酸性细菌呈现蓝色。

1.3 观察指标 分析不同诊断方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值等参数指标。

灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%； 阳性预测值=真阳性/(真阳性+假阳性)×100%；阴性预测值=真阴性/(真阴性+假阴性)×100%。

2 结 果

2.1 不同诊断方法灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值比较 γ-干扰素释放试验的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值明显高于结核菌素皮肤试验(P<0.05)，见表1。

2.2 肺结核患者抗酸染色阳性率和阴性率比较 100例肺结核患者抗酸染色阳性有33例，阴性有67例，其中抗酸染色阳性肺结核患者的γ-干扰素释放试验阳性率为84.85%(28/33)，阴性肺结核患者的γ-干扰素释放试验阳性率82.09%(55/67)。

表1 两种研究方法灵敏度、特异度、阳性预测值、 阴性预测值比较(%)

3 讨 论

准确诊断结核病，并进行规范化的治疗，对控制结核病的流行非常重要。诊断结核病的过程比较复杂，由于卡介苗和结核分枝杆菌与其他肺结核分枝杆菌存在交叉反应，所以在过去几十年中所广泛使用的结核菌素皮肤试验在我国卡介苗的高接种地区使用价值非常有限。相比起结核菌素皮肤试验使用的纯化蛋白衍生物，γ-干扰素释放试验是近年来发展起来的新型结核病诊断手段[6-8]。

γ-干扰素释放试验是通过采用酶联免疫吸附试验定量检测外周血单核细胞在结核菌特异性抗原刺激下释放的γ-干扰素，再监测机体是否存在结核菌感染[9-11]。结核病高负担国家一直将卡介苗作为免疫规划中的重要疫苗之一，诊断潜伏性结核感染时排除卡介苗接种的交叉干扰能够提高肺结核疾病诊断的准确率。即使γ-干扰素释放试验很难排除卡介苗的交叉反应，但由于γ-干扰素释放试验具有价格低且经济实惠等特点，仍能够作为筛查结核病患者的参考标准。γ-干扰素释放试验通过对T细胞经结核特异性抗原刺激之后产生和释放γ-干扰素水平进行定量检测能够判断患者是否存在结核感染，在国际上被广泛使用。本文所采取的国产γ-干扰素释放试验方法与结核菌素皮肤试验方法基本相同，均通过直接刺激和培养外周血，从而区别抗原，明显减少卡介苗接种因素干扰。

本研究结果显示，γ-干扰素释放试验的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于结核菌素皮肤试验(P<0.05)。γ-干扰素释放试验对肺结核的检出率比较高，均超过80%[12-13]。本研究结果显示，100例肺结核患者抗酸染色阳性有33例，阴性有67例，其中抗酸染色法阳性肺结核患者的γ-干扰素释放试验阳性率为84.85%(28/33)，阴性肺结核患者的γ-干扰素释放试验阳性率82.09%(55/67)。临床中，当患者具有显著肺结核特点时，T细胞γ-干扰素释放试验为阳性时，肺结核的灵敏度和特异度均显著提高，因此能够为抗结核的治疗提供有力的指导。除此之外，γ-干扰素释放试验在提高肺结核诊断效率时，耗费的成本也应该引起高度重视。

综上所述，γ-干扰素释放试验比结核菌素皮肤试验诊断肺结核病有较高的灵敏度、阳性预测值、阴性预测值、特异度，对抗酸染色阴性肺结核有较高的检出率，有良好的临床应用前景。

[1]李红，唐神结，史祥，等．全血γ-干扰素释放试验对涂阴肺结核诊断价值的研究[J/CD]．中华临床医师杂志(电子版)，2012，6(16)：4894-4897．

[2]FORTUN J,MARTIN-DAVILA P,MENDEZ R,et al.CA-125:A useful marker to distinguish pulmonary tuberculosis from other pulmonary infections[J].Open Respir Med J,2013,20(3):123-127.

[3]宋其生，陈秀琴，赵琴，等．结核菌素纯蛋白衍生物试验净增值与γ-干扰素释放试验在结核病群体感染中的诊断价值[J]．中华结核和呼吸杂志，2012，35(9)：669-672．

[4]ALVAREZ N,OTERO O,CAMACHO F,et al.Passive administration of purified secretory IgA from human colostrum induces protection against Mycobacterium tuberculosis in a murine model of progressive pulmonary infection[J].BMC Immunol,2013,14(Suppl 1):1-4.

[5]邹琳琳，黎友伦．γ-干扰素释放试验在免疫受损合并肺结核患者中的应用[J]．中国免疫学杂志，2016，32(6)：878-881．

[6]MESSEROTTI BENVENUTI S,PATRON E,ZANATTA P,et al.Change in behavioral functional capacity is associated with preexisting cognitive function rather than with cognitive decline in patients 1 year after cardiac surgery[J].Gen Hosp Psychiatry,2013,35(2):117-121.

[7]万东勇，黄正谷，何静．抗结核抗体与γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的临床价值[J]．国际检验医学杂志，2016，37(20)：2912-2913．

[8]魏振宏，梁忠，马守叶，等．γ-干扰素释放试验诊断终末期肾脏病患者潜伏结核感染的荟萃分析[J]．临床检验杂志，2015，33(7)：550-553．

[9]袁凯，吴雪琼，张强，等．结核杆菌抗原特异性γ干扰素释放试验在脊柱结核辅助诊断中的应用研究[J]．实用医学杂志，2013，29(14)：2314-2316．

[10]赵磊，薛剑，杜君晓，等．干扰素释放试验在AIDS合并结核感染患者中的诊断价值[J]．重庆医学，2015，44(11)：1484-1486．

[11]母发光，何海兰，谭泰昌，等．γ-干扰素释放试验对儿童结核性脑膜炎的诊断价值[J]．临床儿科杂志，2015，18(3)：242-246．

[12]方明，陈海庚，李阿敏．γ干扰素释放试验联合胸水腺苷脱氨酶在结核性胸膜炎中的诊断价值[J]．安徽医学，2016，37(10)：1282-1283．

[13]KONDRUP J E,RASMUSSEN H H,HAMBERG O L,et al.Nutritional risk screening (NRS 2002):a new method based on an analysis of controlled clinical trials[J].Clinical Nutrition,2003,22(3):321-336.