趋化因子GRO-a在宫颈癌中的表达及意义

张隆英 叶永志 陈豪

宫颈癌是全球妇女仅次于乳腺癌的恶性肿瘤，在一些发展中国家其发病率居第1位［1］。我国每年新增宫颈癌病例＞11万，严重威胁女性的生命安全［2］。趋化因子是一类在生理条件下发挥重要作用的蛋白质，负责细胞骨架的重构、细胞迁移，参与免疫反应等，近年研究表明较多趋化因子还参与癌症的发生与恶化。其在肿瘤的生长、转化、局部浸润与远处转移等生物学行为中可能起重要作用［3-4］。趋化因子中生长相关癌基因（growth-related oncogene，GRO）表达与多种癌组织，如胃癌、结肠癌、黑色素瘤等存在相关性，但与宫颈癌的关系目前尚不清楚。作者通过检测手术后宫颈癌组织GRO-a的表达，探讨其与宫颈癌的相关性，为临床靶向治疗宫颈癌提供依据。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2012年1月至2016年1月台州市中西医结合医院宫颈癌患者23例，年龄28～75岁，平均年龄（48.45±12.57）岁。术后均经病理检查确诊。随机抽取慢性宫颈炎［年龄21～69岁，平均年龄（47.12±11.69）岁］及宫颈上皮内瘤变［年龄23～61岁，平均年龄（45.12±12.21）岁］患者活检组织各40例作为对照。三组患者年龄差异比较无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：（1）符合《中华妇产科学》中关于慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变及宫颈癌的临床表现及实验室影像学检查。（2）原发宫颈病变。（3）影像学资料齐全。（4）术前未行放化疗。排除标准：（1）宫颈转移性肿瘤。（2）影像学资料不全。（3）有明显手术禁忌证。

1.2 方法 多克隆兔抗人GRO-a抗体，购自Biomedical Technologies公司，即用型SP试剂盒（PV-6000）购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化方法：采用SP法测定GRO-a的表达。主要步骤包括标本经石蜡包埋切片，二甲苯脱蜡梯度酒精水化，3%过氧化氢灭活，抗原修复，兔血清液封闭，滴加Ⅰ抗、Ⅱ抗及链霉素抗生素蛋白-过氧化物酶复合物，DAB显色，苏木素复染，脱水封片。PBS代替Ⅰ抗进行阴性对照。抗体稀释浓度为1：50。

1.3 结果判定 光镜下观察细胞着色情况。阳性细胞的胞浆呈棕色或棕黄色，每张切片随机观察5个视野（×200），取其平均值为每张切片的观察结果。按阳性细胞所占比例判定结果分析。阴性（-）：阳性细胞＜5%；弱阳性（+）：阳性细胞数5%～24%；阳性（++），阳性细胞数为25%～50%；强阳性（+++）：阳性细胞数＞50%。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。计量资料用（x±s）表示，组间比较用t检验，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

免疫组化结果显示阳性细胞的胞浆呈棕黄色。GRO-a主要表达在宫颈癌组织和正常宫颈上皮组织的胞浆内。三组GRO-a蛋白的阳性率1次为（73.91%，45.00%，30.00%），三组阳性率比较差异有统计学意义（χ2=13.13，P＜0.05）。宫颈癌与上皮内瘤变比较差异有统计学意义（χ2=15.2，P＜0.05）；宫颈上皮内瘤变与宫颈炎比较差异无统计学意义（χ2=2.01，P＞0.05）。见表1。伴有淋巴结转移的患者GRO-a蛋白的表达阳性率也高于无转移组，差异有统计学意义（χ2=8.05，P＜0.05）。见表 2。

表1 GRO-a蛋白在病变宫颈组织中的比较

表2 伴或不伴有淋巴结转移的宫颈癌中GRO-a 蛋白的比较

3 讨论

趋化因子是对免疫细胞具有趋化作用的细胞因子，其分子量一般为8～10kD，氨基酸序列有20%～50%的同源性。几乎所有的趋化因子都含有两对相对保守的半胱氨酸残基形成的分子内二硫键，根据靠近N端的一对半胱氨酸残基的排列顺序将趋化因子分为CX3C、CXC、CC、XC四个亚家族，GRO-a属于CXC类［5］。GRO蛋白的受体为CXCR2，为鸟苷酸结合蛋白（guanylate binding protein，简称G蛋白）偶联受体。其是仅含一条肽链的糖蛋白，其N端在细胞外侧，C端在细胞内，中段形成七个跨膜螺旋结构［6］。GRO-a早期被发现主要趋化中性粒细胞至炎症部位参与免疫反应，近年来发现其对肿瘤的增殖与迁移起一定的作用，可能成为治疗肿瘤的靶点。

恶性肿瘤的本质是克隆性增殖和远处转移，趋化因子可能起着重要的作用。当GRO-a与CXCR2结合后，激发细胞内信号转导系统转而参与细胞的多种生物学过程，包括促进立早基因的表达，引起细胞的持续增生［7］。Owen等［8］发现黑色素瘤中 GRO-a，GRO-β，GRO-γ持续高表达，在体外应用抗GRO-a或抗CXCR2抗体可以抑制黑色素瘤的生长。Folkman［9］研究表明，GRO-a是潜在的血管生成因子，可以刺激内皮细胞的趋向性，促进肿瘤新生血管生长。Haghnegahdar［10］报道，GRO-a可通过自分泌或旁分泌促进肿瘤血管的形成而推动肿瘤的生长。Muller等［11］研究发现，肿瘤的转移是在趋化因子引导下的一个有序、分步骤进行的过程。首先，癌变组织克隆性增生，侵入局部组织，并诱导血管形成，同时在其表面表达相应受体；继之，癌细胞与原发瘤分离，通过血液或淋巴系统，定植与能产生高水平配体的器官，受体与配体结合，侵入远处组织，形成转移性肿瘤。

本资料结果显示，宫颈癌组织中GRO-a蛋白表达阳性率显著高于宫颈炎和宫颈上皮内瘤变的组织，这提示随着肿瘤细胞的形成，GRO-a蛋白表达增强，这也提示GRO-a可能参与宫颈癌的进程。本资料中，伴有淋巴结转移患者GRO-a蛋白的表达阳性率高于无转移组，这也提示GRO-a蛋白的高表达可能与肿瘤的转移也有一定的关系。

综上所述，宫颈癌组织中GRO-a蛋白表达水平增加，其可能参与宫颈癌组织生物进程，故针对GRO-a的免疫治疗有一定的价值，值得进一步研究。

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［11］ Muller YA,Christinger HW,Keyt BA,et al.The crystal structure of vascular endothelial growth factor(VEGF)refined to 1.93 A resolution:multiple copy flexibility and receptor binding.Structer,1997,5(10):1325-1328.