手足口病患儿体内免疫球蛋白、补体、C反应蛋白及刺激分析CD80、CD86水平的临床意义及其与丙种球蛋白治疗疗效的关系

覃艺+邓燕艺+赖昌生

摘 要：目的 探討手足口病患儿血清免疫球蛋白、C反应蛋白、补体C3、C4、刺激分子CD80、CD86水平的临床意义，及其与丙种球蛋白治疗疗效的关系。方法 观察对象为我院儿科2015年7月～11月收治的60例重症HFMD患儿及60例非重症HFMD患儿，同时收集30例正常儿童血清样本作为对照组。比较各组患者血清免疫球蛋白、CRP、补体C3、C4、刺激分子CD80、CD86水平的差异与患儿病情严重程度之间的关系。另将重症HFMD患儿分为A、B两个亚组，A组进行常规营养支持对症治疗，B组在A组的治疗基础上联用人丙种免疫球蛋白治疗，比较A、B两组患儿病情的进展情况及与各指标之间的关系。结果 治疗前，重症HFMD患儿血清IgA、IgM、IgG及补体C3、C4显著低于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），同时普通组IgA、IgM、IgG及补体C3显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组补体C4与对照组差异无统计学意义（P>0.05）；重症HFMD患儿血清CRP水平明显高于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。重症组患儿外周血CD80/CD86显著高于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组CD80/CD86显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，A、B组患儿各指标无统计学差异（P>0.05）。治疗后，A、B两组各指标相比治疗前均有显著性差异，差异有统计学意义（P<0.05）。A、B两组补体C3、C4水平未出现显著差异，差异无统计学意义（P>0.05），A组CRP水平显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）。A组外周血CD80/CD86显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HFMD患儿血清免疫球蛋白、补体C3及C4水平比相比正常人群显著下调，且随着病情的加重而降低；CRP及CD80/CD86相比正常人群显著上调，且随着病情的加重而升高，提示这些指标与患儿病情进展密切相关。联合应用丙种球蛋白治疗能够在对症支持治疗的基础上加快患儿康复进程。

关键词：手足口病；免疫球蛋白；补体；C反应蛋白；CD80/CD86；丙种球蛋白

中图分类号：R725.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.02.022

文章编号：1006-1959（2018）02-0063-05

Abstract：Objective To investigate the clinical significance of serum immunoglobulin，C-reactive protein，complement C3 and C4，stimulatory molecules CD80 and CD86 in children with hand-foot-mouth disease and its relationship with the therapeutic effect of gamma globulin.Methods The subjects were 60 children with severe HFMD and 60 children with non-severe HFMD admitted to our pediatric department from July 2015 to November 2015.Thirty normal children's serum samples were collected as control group.The relationship between serum immunoglobulin，CRP， complement C3 and C4，CD80 and CD86 levels in patients and the severity of illness in children were compared.Another severe HFMD children were divided into A，B two subgroups，Group A was treated with conventional nutritional support symptomatic treatment.Group B was treated with Group A immunoglobulin on the basis of group A treatment.The progress of the disease in group A and group B was compared with that of each index.Results Before treatment，serum IgA，IgM，IgG and complement C3，C4 in children with severe HFMD were significantly lower than those in normal group and control group，The difference was statistically significant（P<0.05）.At the same time，the levels of IgA，IgM，IgG and complement C3 in common group were significantly lower than those in control group，The difference was statistically significant（P<0.05），the normal group of complement C4 and the control group was no significant difference（P>0.05）；severe HFMD serum CRP levels were significantly higher than the normal group and the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.The levels of CD80/CD86 in peripheral blood of children with severe disease were significantly higher than those of control group and normal group（P<0.05），The common group of CD80/CD86 was significantly higher than the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Before treatment，there was no significant difference in each index between A and B groups （P>0.05）.After treatment，the indexes of A and B groups showed significant difference compared with before treatment，the difference was statistically significant（P<0.05）.A，B two groups of complement C3，C4 levels were not significantly different，the difference was not statistically significant（P>0.05），the CRP level of A group was significantly higher than that of B group，the difference was statistically significant（P<0.05）.A group of peripheral blood CD80/CD86 was significantly higher than the B group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion Serum immunoglobulin，complement C3 and C4 levels in children with HFMD were significantly lower than those in the normal population，and decreased with the progression of the disease；CRP and CD80/CD86 were significantly up-regulated compared with the normal population，and with the progression of the disease high，suggesting that these indicators are closely related with the progress of children's condition.The combination of gamma globulin therapy can speed up the rehabilitation process in children based on symptomatic and supportive treatment.endprint

Key words：Hand-foot-mouth disease；Immunoglobulin；Complement；C-reactive protein；CD80/CD86；Gamma globulin

手足口病（hand-foot-mouth disease，HFMD）是由柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）和肠道病毒71型（EV71）等肠道病毒引起的急性传染病，好发于学龄前儿童。多数患儿症状较轻，主要临床症状包括口腔腭咽等粘膜组织出现疼痛性水泡，四肢及臀部的皮疹、疱疹，同时伴有发热、纳差、咳嗽等消化呼吸系统症状，少数患儿合并心肌炎、病毒性脑膜炎、肺水肿等严重并发症，可致患儿死亡。对于重症手足口病，早期诊断并尽早对症治疗是临床工作的关键，有许多研究显示机体免疫状况与该疾病病情进展密切相关[1-2]。本研究拟通过观察120例患儿及30例正常儿童的血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）、补体、C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）及刺激分子CD80、CD86水平，探究相关指标与病情严重程度之间的关系，同时探究重症患者联合使用丙种球蛋白对相关指标的影响，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料 观察对象为我院儿科2015年7月～11月收治的60例重症HFMD患儿及60例非重症HFMD患儿，同时收集30例正常儿童血清样本作为对照组。重症HFMD患儿60例，男性34例，女性26例，年龄6个月～4岁，平均年龄（2.2±0.6）岁；其中A组患儿30例，男性17例，女性13例，年龄6个月～4岁，平均年龄（2.1±0.7）岁；B组患儿30例，男性17例，女性13例，年龄8个月～4岁，平均年龄（2.4±0.9）岁。非重症HFMD患儿60例，男性37例，女性23例，年龄7个月～5岁，平均年龄（3.2±1.2）岁。正常儿童30例，男性15例，女性15例，年龄10个月～7岁，平均年龄（3.2±1.4）岁。各组患儿男女比例、年龄之间差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2纳入标准 ①符合《手足口病诊疗指南》（2013年版）诊断标准；②患儿年龄为6个月～9岁；③所有患儿家属均知情此次研究并自愿参与，同时取得家属同意并在知情同意书上签字。排除标准为：①排除合并过敏、麻疹、水痘、风疹、带状疱疹、等出疹性疾病；②排除合并其他心肝肾造血系统疾病；③排除免疫缺陷疾病。

1.3对象分组 ①普通组患儿仅口腔腭咽等粘膜组织出现疼痛性水泡，手足及臀部的皮疹、疱疹，可伴发热、纳差、咳嗽等症狀；②重症组患儿在上述症状出现的同时，出现体温持续增高、精神萎靡、嗜睡、头痛头晕、恶心呕吐；肌张力增高；脑膜刺激征；心悸、心绞痛；呼吸困难等；③对照组为常规体检未出现异常的儿童。

1.4观察指标 患儿入院后2 h内检查项目包括血清免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）、C反应蛋白（C-reactive protein ，CRP）、补体C3、C4、刺激分子CD80、CD86，出院时或1周后复查各项指标。

1.5方法

1.5.1检测方法 取患者入院后2 h内4 ml静脉血，置于干燥离心管中进行离心，转速3000 r/min，时长10 min，分离上层血清。免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）采用免疫散射比浊法检测，所用仪器为贝克曼Immage 800型特种蛋白仪，检测试剂为英国The Binding Site公司生产。CRP采用胶乳免疫比浊法，检测试剂为elabscience公司生产补体C3、C4采用散射比浊法，检测试剂为四川迈克公司生产，均严格按照操作规程进行。对患儿清晨空腹采集2 ml静脉血，进行外周血CD80、CD86细胞检测，EDTA-K2抗凝。24 h内采用细胞流式仪CytoFLEX检测CD80、CD86细胞的阳性率，通过（%）表示，通过BD DIVA软件进行分析。

1.5.2治疗方法 普通组及重症组患者均对症营养支持治疗，A组病毒唑静滴，剂量10～15 mg/（kg·d），同时增加5%葡萄糖、小儿氨基酸、小儿电解质、甲基强的松龙1～2 mg/（kg·d），甘露醇等对症治疗；B组在A组的治疗基础上联用丙种球蛋白。

1.6统计学方法 数据采用SPSS19.0统计软件分析，计量资料采用（x±s）表示，并使用方差分析比较各组检查结果差异是否有统计学意义（α=0.05），SNK法进行组间比较。

2结果

2.1治疗前患儿血清免疫球蛋白水平差异 比较三组患儿入院时血清免疫球蛋白水平差异，方差分析比较各组之间差异。治疗前重症组患儿血清IgA、IgG、IgM水平低于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组血清IgA、IgG、IgM水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2治疗前后患儿血清补体C3、C4水平差异 比较三组患儿入院时补体C3、C4水平差异，方差分析比较各组之间差异。治疗前重症组患儿血清补体C3、C4水平显著低于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组血清补体C3水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。普通组补体C4与对照组差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2.3治疗前后患儿CRP水平差异 比较三组患儿入院时CRP水平差异，方差分析比较各组之间差异是否有统计学意义。治疗前重症组患儿血清CRP水平明显高于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组CRP水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

2.4治疗前后患儿刺激分子CD80、CD86水平差异显著 比较三组患儿入院时刺激分子CD80、CD86水平差异，方差分析比较各组之间差异。重症组患儿外周血CD80、CD86显著高于普通组及对照组，差异有统计学意义（P<0.05），普通组CD80、CD86显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。endprint

2.5治疗前后重症患儿A、B两组各指标差异 方差分析比较A、B两组患儿治疗前各指标水平的差异，治疗前A、B两组各指标无显著性差异，差异无统计学意义（P>0.05），见表5。

2.6治疗前后重症患儿A、B两组各指标差异 方差分析比较A、B两组患儿治疗后各指标水平的差异，采取治疗后3 d，A组补体C3水平显著低于B组，差异有统计学意义（P<0.05），A、B两组补体C4水平，差异无统计学意义（P>0.05）。A组CRP水平显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05）。A组外周血CD80、CD86显著高于B组，差异有统计学意义（P<0.05），见表6。

3讨论

手足口病是由肠道病毒引起的一种常见的传染病。病毒大多通过呼吸道及消化道感染机体，机体被病原菌感染后会发生炎症反应，表现为多种炎症因子的瀑布式释放并通过炎症反应来造成多种脏器功能的损伤[3]，从而出现多种并发症而发展为重症病例。实践证明[4]，在重症手足口病的患者中，早期及时应用大剂量丙种球蛋白能成功地阻止病情的进一步恶化，有效改善疾病的预后及减少死亡率。

手足口病患者均存在一定程度的体液免疫紊乱，体液免疫在抵抗肠道病毒感染的过程中发挥着重要的监视及预防病毒感染的作用，B淋巴细胞分泌IgA、IgG、IgM，补体活性升高，共同发挥免疫应答功效[5-6]。IgG是人体血清免疫球蛋白的主要成分，在初级免疫应答中最持久最重要，是抗感染过程中的主力军。它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用，与病毒蛋白结合使病毒失去侵入宿主細胞的能力[7-8]。IgM是机体体液免疫应答最早产生的免疫球蛋白，也是通过与病毒蛋白结合产生凝集作用而对抗病毒，在机体早期防御中起着重要作用[9-10]。血清中IgA没有直接结合病毒蛋白的能力，但其可激活抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用，介导NK细胞释放穿孔素及颗粒酶等，使病毒感染的细胞的细胞膜穿孔溶解[11]。本次研究中发现，对照组、普通组、重症组患者IgG、IgA、IgM水平呈梯度下降的趋势，且各组两两比较均存在统计学意义，此现象的发生可能是由于肠道病毒侵入机体时间还较短，并未引起机体IgG、IgA的显著表达，而IgM作为早期体液免疫应答的产物，产量并不高，加上病毒繁殖过快，血清IgG、IgA、IgM产出远远低于消耗，导致患儿血清IgG、IgA、IgM水平的降低。

补体系统在体内可辅助特异性抗体增强吞噬细胞的吞噬作用，另外其能够增强血管通透性，促进免疫细胞的趋化作用，并能够中和病毒、溶解被病毒感染的细胞、调节免疫反应。是体液免疫的重要组成部分[12]。本次研究中发现，补体的含量在对照组、普通组、重症组患者中也出现一定的梯度降低，结合IgG、IgA、IgM水平的变化，提示患儿体液免疫应答存在异常。

CRP是肝细胞合成的一类非特异性急性时相反应蛋白，一般情况下不升高，但在有炎性反应时会迅速增高与体内炎症反应的程度具有良好一致性[13]。在细菌感染所致的急性炎症中反应高度灵敏，其可以引发对侵入细胞的免疫调理作用和吞噬作用，而表现出炎症反应，是常用的炎性标志物[14]。本研究中，CRP随患儿病情严重程度而升高，检测CRP对患儿病情的进展有辅助价值，同时提示重型手足口病的患儿更易在病毒感染的基础上继发细菌感染。

CD80、CD86为抗原递呈细胞上重要的协同刺激分子，其能够增强抗原递呈细胞的功能，诱导Th0细胞分化为功能细胞，增强患儿的免疫能力[15]。本研究发现，重症组患儿CD80、CD86的表达明显高于其他两组，可能是由于过度的炎症反应导致患儿机体CD80、CD86过度表达，提示患儿机体处于体液免疫激活的过程中。

有报道显示，在常规治疗的基础上联合应用丙种球蛋白治疗可加快手足口病患儿的康复进程，减少并发症发生的几率[16]，与本次研究结果基本符合，联合应用丙种球蛋白治疗可直接升高重症患儿体内的免疫球蛋白水平，抑制病毒的增殖，更迅速有效地控制感染，使补体水平显著回升，CRP及CD80、CD86水平显著降低，减轻患儿的炎症反应，有利于患儿的病情及预后。

参考文献：

[1]Wang J，Jing P，Liu L，et al.Clinical and Associated Immunological Manifestations of HFMD Caused by Different Viral Infections in Children[J].Global Pediatric Health，2016，3（6）：237-244.

[2]Pathinayake P S，Hsu A C，Wark P A B.Innate Immunity and Immune Evasion by Enterovirus 71[J].Viruses，2015，7（12）：6613-6630.

[3]Qui P T，Khanh T H，Trieu H T，et al.Intravenous magnesium sulfate for the management of severe hand，foot，and mouth disease with autonomic nervous system dysregulation in Vietnamese children：study protocol for a randomized controlled trial[J].Trials，2016，17（1）：98.

[4]孙广超，杨思达，陶建平，等.重症和危重症手足口病患儿外周血淋巴细胞亚群分析[J].中国循证儿科杂志，2010，5（4）：251-255.

[5]徐媛媛.手足口病患儿外周血炎性标志物及体液免疫联合检测的临床意义[J].医学理论与实践，2016，19（11）：1420-1422.endprint

[6]陈大宇，覃培栩，郑敏，等.儿童手足口病免疫球蛋白与T淋巴细胞亚群的表达与价值[J].国际检验医学杂志，2014，35（7）：928-929.

[7]Corrales-Aguilar E，Trilling M，Reinhard H，et al.Highly individual patterns of virus-immune IgG effector responses in humans[J].Medical Microbiology&Immunology，2016，7（11）：1-16.

[8]Kim Y I，Song J H，Kwon B E，et al.Pros and cons of VP1-specific maternal IgG for the protection of Enterovirus 71 infection[J].Vaccine，2015，33（48）：6604-6610.

[9]Wu Y，Chen D，Zhou J，et al.Detection of cerebrospinal fluid anti-enterovirus 71 IgM in children with severe hand，food and mouth disease induced by enterovirus 71 infection and its clinical significance[J].Zhonghua Er Ke Za Zhi Chinese Journal of Pediatrics，2015，53（5）：355-359.

[10]Lim P Y，Hickey A C，Jamiluddin M F，et al.Immunogenicity and performance of an enterovirus 71 virus-like-particle vaccine in nonhuman primates[J].Vaccine，2015，33（44）：6017-6024.

[11]Taniuchi M，Platts-Mills J A，Begum S，et al.Impact of enterovirus and other enteric pathogens on oral polio and rotavirus vaccine performance in Bangladeshi infants[J].Vaccine，2016，34（27）：3068-3075.

[12]Ramirez-Fort M K，Downing C，Doan H Q，et al.Coxsackievirus A6 associated hand，foot and mouth disease in adults： clinical presentation and review of the literature[J].Journal of Clinical Virology the Official Publication of the Pan American Society for Clinical Virology，2014，60（4）：381-386.

[13]李士桂，付四毛，劉玉玲，等.手足口病患儿早期检测超敏C反应蛋白、肌钙蛋白和心肌酶谱的意义[J].海南医学院学报，2014，20（4）：552-554.

[14]Yuan A，Li J，Liu P，et al.Association of interleukin-6-572C/G gene polymorphism and serum or cerebrospinal fluid interleukin-6 level with enterovirus 71 encephalitis in Chinese Han patients with hand，foot，and mouth disease[J].Inflammation，2014，38（2）：728-735.

[15]Shi W，Hou X，Peng H，et al.MEK/ERK signaling pathway is required for enterovirus 71 replication in immature dendritic cells[J].Virology Journal，2014，11（1）：1-13.

[16]Ng Q，Fang H，Kwang J.Recent Progress towards Novel EV71 Anti-Therapeutics and Vaccines[J].Viruses，2015，7（12）：6441-6457.

收稿日期：2017-6-24；修回日期：2017-7-26

编辑/李桦endprint