宫颈脱落细胞中P16、Ki67联合细胞学检测在意义不明确的非典型鳞状上皮细胞诊断中的意义

张瑶，袁思梅，朱丹阳，卢彩玲，李立峰

宫颈癌的控制和预防关键是及时有效的发现和诊断宫颈上皮内瘤变，研究表明宫颈细胞学检查对临床筛查宫颈癌具有十分有效的作用。其中，意义不明确的非典型鳞状上皮细胞（ASCUS）是宫颈细胞学最常见的细胞异常，其可以有效提示宫颈低级别鳞状上皮内病变（LSIL）或宫颈高级鳞状上皮内病变（HSIL），因此临床检验和筛查ASCUS成为诊治与管理宫颈癌前期病变的重要原则[1-2]。近年来，超薄液基细胞学检查（TCT）可有效降低宫颈癌筛查的假阳性率和漏诊率，已成为宫颈癌早期筛查诊断的重要方法之一[3]。同时，抑癌基因P16和增殖抗原 Ki67呈过表达时可提示癌症的发生与发展，对于诊断鉴别恶性肿瘤具有较高的灵敏度和特异性。本研究选取病理结果为宫颈癌ASCUS的100例患者，采用TCT法检测细胞状态并采用免疫组化法检测组织中 P16和Ki67的含量，旨在探讨宫颈脱落细胞中P16、Ki67和细胞学检测在ASCUS诊断中的意义。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取浙江省台州市第一人民医院2015年6月至2017年5月收治的病理结果为ASCUS的100例患者为观察组；并选择由其他疾病切除子宫但TCT检查正常50例患者为对照组。观察组年龄 20～ 65岁，平均（39.24±3.76）岁；对照组年龄21～65岁，平均（40.31±3.59）岁。两组年龄差异无统计学意义（＞0.05）。本研究经医院伦理委员会的许可，患者资源签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 TCT 宫颈检查之前，要求患者48h内无阴道操作、检查，无性生活。充分暴露宫颈，用专用工具擦取宫颈周围的分泌物和脱落的上皮细胞，将其放在保存液中保存。用液基薄层细胞制片机（Thin-Prep 2000系统）制成切片进行巴氏染色。由专业细胞病理医生按照TBS诊断标准进行细胞学诊断和分析[4]。

1.2.2 免疫组织化学检验 P16和 Ki67在病变去进行定位检测，选取宫颈鳞柱彼此之间交接位置进行取样。活检组织用10%甲醛固定，石蜡包埋连续切片5m/张，共6张。用5%血清进行室温封闭40min后，分别加入1∶1000的P16和Ki67单克隆抗体4℃过夜孵育。隔天加入1∶1000的二抗37℃孵育30 min，PBS清洗后加入SP后进行恒温反应30min，加入DAB显色液进行显色，中性树胶封片后用10倍和40倍物镜显微镜进行观察。P16和 Ki67的阳性表达主要表现为细胞内出现棕黄色颗粒。阳性细胞所占百分比主要参考着色强度分级。（1）阴性（－）：无明显阳性细胞；（2）弱阳性（+）：阳性细数＜25%；（3）中度阳性（2+）：阳细胞数 25%～ 50%；（4）（3+）强阳性：阳性细胞数＞50%。以中度阳性和强阳性为P16或Ki67过度表达。

1.3 统计方法 采用SPSS 21.0统计软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差表示。计数资料采用2检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2.1 两组P16、Ki67检查结果 观察组宫颈内P16水平阳性细胞着色明显，阳性表达率为81.00%，明显高于对照组的2.00%（2=125.382＜0.05）。观察组宫颈内Ki67阳性细胞着色明显，阳性表达率为84.00%，明显高于对照组的4.00%（2=118.501＜ 0.05）。见表 1、2。

2.2 细胞学检查结果 对照组患者行TCT检查后发现宫颈细胞形态正常，无明显病理改变；观察组患者行TCT检查后发现宫颈细胞形态明显发生改变，鳞状细胞分化，细胞轮廓消失，模糊不清；细胞核着色较深核浆比增高，细胞核深染，染色质成块，不规则。见封四彩图8。

2.3 P16、Ki67与TCT检查结果 观察组P16的单独检出率、Ki67和TCT检查的单独检出率均低于联合检出率（2=3.979、6.366、11.031，均＜0.05）。联合检出率、特异度和灵敏度均高于P16、Ki67和TCT检查的单独检出率（2=6.373、3.979、11.033，均＜0.05）。见表3。

2 结果

3 讨论

TCT检查主要指采用TCT系统对宫颈细胞形态方面的检测来判断宫颈病变的程度[5]。与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比，明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率；但40%以上的涂片会因血液、黏液和炎症组织的影响而变得混浊不清，以及固定不及时所引起的人为假象，具有一定的假阳性率并且特异性不高，无法真实的反映宫颈的病变程度[6-7]。

P16基因，又称多肿瘤抑制基因（MTS）基因，是一种可直接参与调控细胞周期的抗癌基因。P16作为细胞周期蛋白激酶K（CDK）的抑制因子，主要负性调节细胞增殖与细胞分裂[8-9]。近年来大量学者认为P16可直接反应细胞癌变的效果与进程，是一种宫颈癌恶性程度的病变指标[11-12]。Ki67是一种与细胞增殖相关的核抗原，仅分布于核内，其功能与有丝分裂密切相关，是检测肿瘤细胞增殖活性的可靠指标[12-13]。Ki67在细胞中的阳性表达越高时，说明肿瘤细胞增殖分裂越快，癌组织分化程度越高，治疗及预后的效果越差[12-13]。研究表明，P16和Ki67蛋白在同一细胞异常过表达时，可明显提高肿瘤疾病诊断的灵敏度和特异度[14]，对于诊断、鉴别和筛查癌变具有重要的作用和意义。

宫颈癌患者癌变组织内P16和Ki67均呈现异常高表达状态，这提示肿瘤细胞的发生发展及异常增殖状态。本文结果还显示P16、Ki67和TCT检查的联合检出率、联合检测的特异度和灵敏度均优于单独情况，这说明P16、Ki67和TCT检查联合检测在宫颈癌的病变过程中具有较高的临床诊断价值。

表1 两组P16免疫组织化学检查结果 例

表2 患者Ki67免疫组织化学检查结果 例

表3 两组P16、Ki67与细胞学联合检测结果 %

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