γ-干扰素体外释放试验在结核病诊断中的应用价值*

刘 涛，冯晓梅（.运城市中心医院检验科，山西044000；2.运城学院，山西运城044000）

结核病由结核分枝杆菌感染所引起，是一种慢性呼吸道传染病，已严重危害人类的身心健康[1]。我国作为结核病高发病率的国家，已成为世界第三大高负担国家，每年新发结核病病例已高达130万例，死亡病例更是达到了13万例[2]。因此，我国结核病的控制形势非常严峻，急需采取有效措施进行遏制。对于结核病的预防和控制，诊断与治疗是核心。而结核病早期快速而准确的诊断，又是控制结核病蔓延、阻断传染源的关键环节，只有早诊断才能早治疗。

目前，结核病诊断“金标准”是痰涂片和培养，但痰培养因阳性率低、耗时长（培养4～8周），常不能满足临床早期诊断和及时治疗需求，而且结核菌的培养在操作规程和生物安全性要求方面非常严格，不利于在基层医院广泛开展；涂片镜检法作为实验室常用的检测方法，成本低、易取材，但敏感度低，又有非结核分枝杆菌的干扰，易漏诊[3-4]。结核菌素皮肤试验（TST）因其不能区分是陈旧感染还是新近感染，且与卡介苗及环境非结核分枝杆菌之间存在交叉免疫，容易引起误诊[4]。分子生物学方法如GeneXpert，敏感性和特异性均较高[5]，但仪器、试剂价格昂贵，限制了其在医疗卫生单位的推广应用。全血结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验（TB-IGRA）作为一种结核病诊断方法，以其早期快速且价廉、生物安全性较好等特点，在国外已得到广泛应用[6]。本文通过对在运城市中心医院进行TB-IGRA试验患者数据的回顾性分析，评估TB-IGRA在该地区结核病诊断中的应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2015年4月至2016年4月在运城市中心医院进行TB-IGRA检测的106例门诊和住院患者的病例资料，并进行随访。106例患者中，结核病患者51例（结核病组，男30例，女21例；年龄18～84岁），其中肺结核30例，肺外结核21例，诊断标准参照中华医学会《临床诊疗指南——结核病分册》[7]；疑似结核病例及非结核病例55例（疑似结核及非结核组，男37例，女 18 例；年龄 12～88岁）。排除标准：（1）已接受抗结核治疗；（2）人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体阳性；（3）有免疫系统疾病及使用免疫抑制剂的患者。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 北京天石酶标仪，型号：SM-3；BioTek洗板机，型号：ELX808IU；北京万泰TB-IGRA检测试剂盒，批号：TR20141001-1-10。

1.2.2 检测方法 全血TB-IGRA所有操作步骤均严格按照说明书执行。静脉采集4 mL以上新鲜抗凝全血，注入BD公司专用肝素锂抗凝采血管，每管1 mL，分装至测试刺激管（Test），阳性对照管（Positive），阴性对照管（Negative），37 ℃培养 22～24 h，3 000～5 000 r/min 离心10 min，分离上清液（注意避免吸到细胞层）进行酶联免疫吸附试验（ELISA）检测。根据ELISA标准曲线计算相应γ-干扰素水平。按照《结核病实验室标准操作规程》进行涂片镜检。

1.2.3 观察指标 观察两组患者的结核阳性检出率，并对TBTB-IGRA与涂片镜检2种检测方法的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值进行比较。

1.3 统计学处理 应用SPSS23.0统计软件进行数据分析；计数资料以率表示，采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组患者TB-IGRA的结核阳性检出率比较 结核病组结核阳性检出率显著高于疑似结核及非结核组（χ2=56.3，P＜0.01）；结核病组中，肺结核和肺外结核的检出率比较，差异无统计学意义（χ2=0.1，P＞0.05），见表 1。

表1 两组患者TB-IGRA的结核阳性检出率比较

2.2 TB-IGRA与涂片镜检结果比较 TB-IGRA对结核病诊断的敏感性明显优于涂片镜检，但特异性低于涂片镜检，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

表2 TB-IGRA与涂片镜检结果比较[%（n/n）]

3 讨 论

目前，结核病仍是全球一个棘手的重大公共卫生问题，是一种传染性强、致病性高的慢性传染病[8]。在结核病预防和控制体系中，诊断一直是困扰结核病防治工作的难题。传统细菌学方法（如涂片和培养）阳性检出率低，结果报告时间长，难以满足临床及时治疗的需求。一直以来，人们不断研究和探索更敏感、快速、简便的检测方法，已取得积极的成果。免疫学方法由于有较好的敏感性和特异性，且无须昂贵仪器、简便、价廉，易于在基层实验室推广使用，至今仍是热点研究方向。

全血TB-IGRA以T细胞为基础，是近年来新研制的一种结核病免疫诊断方法，其以特异性抗原[早期分泌抗原靶-6（ESAT-6）和培养分泌蛋白-10（CFP-10）]刺激T细胞，而这2种抗原仅存在于有致病性的结核分枝杆菌中，在接种卡介苗和非结核分枝杆菌中则没有表现，且这2种抗原均具有很好的免疫原性，机体T细胞若接触过结核菌抗原，则可诱导致敏的T细胞活化分泌高水平的干扰素γ（INF-γ），从而判断机体感染结核菌的情况[9]。但ESAT-6和CFP-10也同时存在于诸如堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌、转黄分枝杆菌和胃分枝杆菌等少数几种非结核分枝杆菌中。因此，IGRAs阳性并不能排除上述分枝杆菌感染的可能性[10]。

目前，随着对TB-IGRA应用经验的增加，其已被发达国家广泛接受和应用[6，11]，我国卫生部也将结核感染T细胞检测纳入《医疗机构临床检验项目目录》。因此，本文对运城市中心医院通过新技术申报引进该技术，收集引用该技术1年后的TB-IGRA检测结果进行分析，探讨其对运城地区结核病诊断的应用价值。

本研究结果显示，TB-IGRA在运城地区结核病诊断中具有较高的阳性检出率（94.1%），且对肺结核和肺外结核的检出率均较高（分别为93.3%和95.2%），这与蒋英等[12]的研究结果一致，证实了TB-IGRA的潜在应用价值。在对疑似结核及非结核病例的检测中，TB-IGRA仍有21.8%的阳性检出率。高坎坎等[13]研究结果也提示，TB-IGRA在非结核病组的检出率为23.08%，与本研究结果一致。分析原因可能有：（1）TB-IGRA可能存在一定的交叉反应；（2）尚不排除存在潜伏感染的可能，TB-IGRA不能区分结核潜伏感染者及结核病患者。与传统涂片相比，TB-IGRA检测阳性率明显提高，特异性略低。因TB-IGRA有一定的局限性，其检测结果易受机体免疫状态的影响，免疫力低下者（如HIV感染者、儿童和老年患者）易导致假阴性结果。

综上所述，TB-IGRA具有早期诊断、较高的敏感性及全血标本易获得等优点，而其作为一种结核病诊断的筛选试验和辅助诊断手段，通过本研究证明该技术在运城地区结核病的诊断应用中具有较高的价值。但在临床应用中，还需要结合患者的临床表现及其他辅助诊断方法，以提高结核病诊断的阳性率。

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