HPLC法测定镇宁百香果中维生素C的含量

◎ 杨 文，李小敬

（1.安顺市食品药品检验所，贵州 安顺 561000；2.安顺市人民医院，贵州 安顺 561000）

百香果（Passion fruit）又称西番莲、巴西果、鸡蛋果，是西番莲科多年木质藤本植物果实的通称。百香果是一种原产南美洲的热带水果，因其果汁具有蟠桃、石榴、菠萝、芒果、香蕉等多种水果的香气而得名[1-2]，1913年引入中国，现已在我国南方地区大面积种植，2018年被引进贵州安顺镇宁简噶乡，作为该地区的扶贫产业。百香果果肉为黄色，味微酸，气味芳香浓郁，含有17种氨基酸，丰富的蛋白质、脂肪、糖、维生素、钙、磷、铁、钾、SOD酶和超纤维等165种对人体有益物质，更被称为水果中的“维生素C之王”。维生素C又叫L-抗坏血酸，是一种含不饱和烯酯结构的酸性多羟基化合物，为水溶性维生素，分子式为C6H8O6，相对分子量质为176.13，维生素C具有不饱和共轭结构，在紫外-可见光区有吸收，紫外吸收最大波长在244 nm附近。维生素C呈无色无臭的片状晶体，易溶于水，不溶于脂溶剂。在酸性环境中稳定，遇空气中氧、热、光、碱性物质，特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时，具有抗氧化作用，是知名度最高的营养素[3]。

1 材料

1.1 实验材料

样品购于贵州省安顺市镇宁县简噶乡，属于2018年该地区新引进的扶贫产业，经贵阳中医学院药用植物栽培与鉴定教研室魏升华教授鉴定为西番莲科西番莲属（Passionfora edulisf. flavicarpa Deg）的草质藤本植物。

1.2 仪器与试剂

Agilent1260高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）、双光束紫外可见分光光度计T1901（北京通用仪器有限责任公司）、超声机（深圳市方奥微电子有限公司）、打浆机（九阳股份有限公司）、雷磁PHS-3CPH计（上海仪电科学仪器股份有限公司）、万分之一电子分析天平（AY-120，梅特勒-托利多）、十万分之一电子天平（梅特勒-托利多）、HPD-25无油真空泵（天津恒奥科技发展有限公司）。

维生素C对照品（批号100425-201504，中国食品药品检定研究院），娃哈哈纯净水（贵阳娃哈哈饮料有限公司），甲醇（色谱纯，美国天地），蒸馏水，亚硫酸钠，磷酸二氢钾。

2 方法

2.1 供试品的制备

把果汁取出，放到打浆机中打浆，混匀，称取样品约2 g，精密称定，置于50 mL容量瓶中，加入0.5%亚硫酸氢钠溶液40 mL，放到超声机中超声提取20 min，取出，放冷，用0.5%亚硫酸氢钠溶液定容，混匀，过滤，待测。

2.2 对照品的制备

精密称取维生素C对照品14.28 mg，放到50 mL容量瓶中，用入0.5%亚硫酸氢钠溶液溶解、定容，配制的对照品质量浓度为0.285 6 mg·mL-1对照品储备液。

2.3 最大吸收波长的确定

精密称取上述贮备液2 mL，放到25 mL的容量瓶中，用0.5%亚硫酸氢钠溶液定容，即得维生素C使用液（质量浓度为22.848 μg·mL-1），以维生素C标准使用液为待测样，以0.5%亚硫酸氢钠溶液作为空白，于200～350 nm波长范围内测定吸光度。

从吸收曲线上看，维生素C在244 nm附近有最大吸收波长（244 nm±2 nm都可取作为检测波长）。所以，选择246 nm作为检测波长。见图1。

图1 最大吸收波长测定图谱图

2.4 色谱条件

百香果中维生素C的最佳色谱条件为：Phenomenex-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：采用等度洗脱，甲醇与0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液（调pH至2.4）的比例为5∶95；流速为1.0 mL·min-1；检测波长246 nm；柱温20 ℃；进样量10 μL。

2.5 方法学考察

2.5.1 系统适用性

按照上述供试品制备条件下制备样品，并进样得到样品的色谱图如图2所示，其结果显示维生素C的分离度，均符合要求，其理论塔板数高于10 000。

图2 维生素C液相色谱图

2.5.2 标准曲线的配制

分别吸取维生素C使用液0、1、2、5 mL和10 mL到10 mL的容量瓶中，用入0.5%亚硫酸氢钠溶液定容，混匀。各浓度标准溶液按2.4色谱条件进样测定。以标准溶液的质量浓度为横坐标；对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归计算。研究得出回归方程为Y=30.448X-1.1883，R2=0.999 9。表明维生素C在0～22.848 μg·mL-1范围内线性良好。见图3。

图3 维生素C标准曲线图

2.5.3 精密度的测定

按照2.1项下供试品溶液制备样品连续进样测定6次，峰面积分别为134.803、130.364、134.715、129.691、125.433和130.497，计算精密度，其精确度RSD为2.68%，仪器符合实验要求。

2.5.4 重复性

按照2.1项下供试品溶液制备样品6份进样测定，分别记录峰面积，计算含量，分别为126.6、123.1、124.3、127.8、129.0 μg·g-1和 126.0 μg·g-1，其重复性RSD为1.73%，试验方法符合实验要求。

2.5.5 加标回收率的测定

称取样品1 g，精密称定，置于50 mL容量瓶中，加入5 mL维C标准使用液，加0.5%亚硫酸氢钠溶液35 mL，放到超声机中超声提取20 min，取出，放冷，用0.5%亚硫酸氢钠溶液定容，混匀，过滤，待测。计算加标回收率范围在94.43%～105.06%，见表1。试验方法符合实验要求。

表1 加标回收率及其结果表

3 结果与分析

通过在最大吸收波长246 nm处测定6个试样的峰面积，平行测2次，根据标准曲线回归方程计算百香果中维生素C的含量。百香果维生素C平均含量为12.61 mg/100 g[4]。本次实验采用高效液相法的测新鲜百香果中维生素C含量处于较低水平，而蒋红芝[2]测得百香果中维生素C含量高达50 mg/100 g，其原因可能是采摘时间与品种，亦或者是由于产地环境造成的。针对这一原因我们将进行下一步的跟踪分析，提升镇宁百香果，本文采用超声提取与高效液相色谱法测定了镇宁百香果果肉中维生素C的含量。百香果果肉经超声提取后，用反相高效液相色谱测定[5]。实验测得百香果果肉中的维生素C质量浓度为12.61 mg/100 g。这种测量方法具有高效便捷的特点，其测量结果更为真实准确，且溶剂用量少，节约环保，可为开发利用丰富的百香果资源提供理论参考。