丹黄散促进糖尿病足溃疡大鼠创面毛细血管新生

邸铁涛+张春玲+陈露+龙丽+侯丹+刘洹颖+宋庆娜+黄蔷

[摘要] 目的 将中药丹黄散外敷用于糖尿病大鼠足溃疡创面，观察其对溃疡创面的促愈作用，探讨其促愈机制。方法 建立糖尿病大鼠足溃疡模型，设12只中药组、12只西药组、12只空白组，另设12只正常组，空白组与正常组不添加干预方法，西药组采用生长因子凝胶外敷，中药组采用丹黄散外敷。测量不同时间点大鼠溃疡面的愈合面积，通过HE染色、Masson染色观察创面新生组织内毛细血管和成纤维细胞的增生情况。 结果 对4组大鼠不同时间点愈合率进行比较，差异有统计学意义（P<0.05）。中药组、西药组与空白组比较，能明显促进创面的愈合，加快创面愈合的速度，缩短愈合时间（P=0.001）。HE染色、Masson染色观察显示，中药组与西药组创面组织中炎性细胞较之空白组与正常组减少，新生毛细血管及成纤维细胞增多。结论 丹黄散可明显提高创面的愈合率，促进溃疡的愈合，其机制可能与促进创面新生毛细血管形成、促进成纤维细胞的增殖有关。

[关键词] 丹黄散；创面愈合；血管新生；成纤维细胞；中医药

[中图分类号] R259 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2017）08（b）-0165-03

糖尿病足的发病机制极其复杂且难以愈合，存在多种学说。有学者认为，糖尿病患者体内高血糖持续状态和晚期糖基化终末产物的大量蓄积可以造成血管的损伤，这可能是导致糖尿病足溃疡难以愈合的原因[1]。糖尿病足存在毛细血管与神经病变，中医脉络学说认为糖尿病足中血管的损伤尤其是微血管损伤可造成溃疡发生发展和迁延不愈。中药丹黄散由丹参、大黄、当归、沉香、松香、没药共6味传统中药组成，具有清热解毒、活血利湿，祛腐生肌等功效，可明显促进创面的愈合[2]。该实验将丹黄散外敷于糖尿病大鼠溃疡创面，观察不同时间的创面愈合率和新生创面的毛细血管增生情况，探讨丹黄散促愈糖尿病足溃疡的作用机制，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 实验动物 SPF级200 g左右雄性SD大鼠，购自重庆医科大学动物研究所。45只高脂高糖饲料喂养一个月，隔夜禁食后腹腔注射10%STZ 40 mg/kg，3 d后测空腹血糖大于16.7 mmol/L为成模糖尿病大鼠。选择大鼠背部较为平坦之处脱毛，龙胆紫标记约1.5 cm×1.5 cm大小面积，水合氯醛麻醉后在无菌条件下将造模区皮肤剪去，深达筋膜。

1.1.2 药物制备 丹黄散由该院药剂科统一制备，丹参、大黄、地榆、乳香、沉香、没药共6味中药按照1：1比例混合粉碎成粉过六号筛。对照药选用重组人表皮生长因子凝胶（批号：14020213）。

1.2 实验方法

1.2.1 给药方法 将糖尿病溃疡成模后大鼠随机分为3组，中药组、西药组、空白组各12只、另取正常SD大鼠12只设为正常组，空白组和正常组不进行药物干预。中药组创面外敷丹黄散，西药组创面外敷生长因子凝胶，1次/d观察30 d。

1.2.2 HE染色、Masson染色 创面中心点取新生肉芽组织（约3 g），平均分为2份分别进行HE、Masson染色，采用多功能荧光显微镜观察组织创面和周围组织的病理形态。

1.3 统计方法

采用SPSS 20.0统计学软件处理数据，实验数据以均数±标准差（x±s）表示，行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4组大鼠不同时间点愈合率比较

采用重复的方差分析对4组大鼠不同时间点愈合率进行比较，差异有统计学意义（P<0.05）。中药组与西药组比较，差异无统计学意义，说明丹黄散在促进糖尿病大鼠溃疡愈合上与生长因子凝胶具有同等作用；中药组、西药组与空白组比较，差异有统计学意义（P=0.001），说明丹黄散与生长因子凝胶均能明显促进创面的愈合，短愈合时间。4组大鼠不同时间点愈合面积从大到小具有相同趋势，可依次排列为：中药组>西药组>正常组>空白组。见表1。

2.2 组织HE染色与Masson染色

光镜观察结果：空白组可见较多炎性细胞，少见成纤维细胞，罕见新生毛细血管；正常组较空白组炎性细胞数量减少，成纤维细胞增多，可见散在的新生毛细血管；西药组和中药组较空白组，可见少量的炎性细胞，成纤维细胞数量较多，大量新生毛细血管。总体上看，中药组毛细血管增生明显，成纤维细胞较多且染色较深，炎性细胞少见，西药组、正常组居中，空白组最差，极少见血管增生，炎性细胞浸润明显。见图1。

3 讨论

糖尿病足（Diabetic Foot，DF）又称糖尿病肢端坏疽，属中医“消渴”“脱疽”“疮疡”范畴。WHO将糖尿病足定义为糖尿病患者由于合并神经病变及各种不同程度末梢血管病变而导致下肢感染、溃疡形成和（或）深部组织的破坏[3]。糖尿病足溃疡存在不同程度的血管和神经病变，中医脉络学说认为糖尿病足患者血管尤其是微血管损伤造成了足溃疡的发生和发展[4]，溃疡创面缺乏新生肉芽组织与毛细血管致使其迁延不愈，由新生毛细血管和成纤维细胞构成的肉芽组织形成在溃疡面愈合过程中至关重要，可直接影响溃疡面愈合过程及预后。新生毛细血管可改善创面微循环，提供营养物质和氧气，加速创面新陈代谢，促进溃疡面愈合；而成纤维细胞在皮肤损伤后可被激活，使胞质中出现张力纤维，从而促进溃疡面愈合。

中医治疗糖尿病足溃疡以“拔脓祛腐”“脱疮生肌”“补益气血”“活血化瘀”等法通畅气血、去腐生肌。丹黄散是该院十余年的经验总结，在中医“筋痈”理论指导下结合现代药理研究形成的院内制剂，主方为丹参、大黄、当归、沉香、松香、没药等6味中药按1：1：1比例组成的外用散剂，方中丹参为君药，性温味甘辛，具有扩张血管、改善微循环、抗菌及消炎等作用[5]。大黄共为君药，性寒味苦，具有清热解毒、凉血祛瘀、抗炎解毒等作用[6]，可抑制多种细胞和病毒；当归为臣药，性温味甘辛，具有抗血小板集聚、减少血粘度、提高单核吞噬细胞系统的吞噬功能等作用；没药为佐药，性温味辛苦，具有散血消肿、止痛生肌等作用，还能促进粘膜再生[7]；沉香共为佐药，性温味辛苦，具有行气镇痛、抗菌抑菌等作用；松香为使药，性辛甘，有镇静理气、拔脓祛腐、生肌止痛等效果，诸药合用具有清热解毒、活血利湿，祛腐生肌等功效，可明显促进创面愈合。该实验中HE染色和Masson染色结果均表明，丹黄散与重组人表皮生长因子凝胶均有促进新生毛细血管生长、增殖、升高成纤维细胞数等作用，中药组、西药组较空白组与正常组显微镜相同视野下可见成纤维细胞、新生毛细血管数量明显增多，从而促进溃疡创面新生肉芽组织生成，促进创面愈合，缩短愈合时间。推测，这很可能是丹黄散促进糖尿病溃疡创面愈合的作用机制。此外，不同时间点各组大鼠创面愈合率的比较也支持这一结论，中药组、西药组第7、15、21、28天创面愈合率均优于正常组与空白组，具有相同趋势，可依次排列为：中药组>西药组>正常组>空白组，中药组、西药组促进溃疡创面愈合疗效显著。

该研究将中药制剂丹黄散外敷用于糖尿病足溃疡模型大鼠，通过测量不同时间点大鼠溃疡面的愈合面积，计算、比较各组大鼠不同时间点溃疡创面的愈合率，观察HE染色、Masson染色中创面新生组织中毛细血管、成纤维细胞的增生情况，对比四组大鼠创面愈合情况。结果显示中药丹黄散可明显提高大鼠溃疡创面的愈合率，促愈糖尿病大鼠溃疡，其机制可能与促进创面新生毛细血管形成、促进成纤维细胞的增殖有关。

[参考文献]

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[7] 李曦，张丽宏，王晓晓，等.当归化学成分及药理作用研究进展[J].中药材，2013，36（6）：1023-1028.endprint