多囊卵巢综合征不孕患者卵泡液同型半胱氨酸水平检测及与葡萄糖、雌二醇水平的相关性探讨

黄娟娟， 张利平， 张 娟， 李 华， 高 霞， 曹 英

（1.延安大学附属医院产科，陕西 延安 716000；2.宝鸡市妇幼保健院产科，陕西 宝鸡 721000）

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是常见的女性内分泌疾病之一，在12～45岁的女性中发病率为5%～10%[1]，是导致女性不孕的主要因素。有研究认为，胰岛素抵抗和同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高可能是PCOS患者发生动脉粥样硬化等心血管疾病的危险因素[2]。Hcy是细胞和组织生长的必需氨基酸，且是蛋氨酸降解的中间产物。血清Hcy水平受多种因素影响，包括年龄、性别、营养、吸烟、慢性炎症、身体活动和胰岛素等[3]。卵泡液中的Hcy水平可能反映了全身的Hcy代谢情况，同时也为卵子的发育提供了重要的微环境[4]。现已证实在接受辅助生殖技术治疗的PCOS患者中，血清Hcy水平与卵子、胚胎的质量呈负相关[5]。PCOS患者代谢异常导致血清Hcy水平的变化可能会影响卵泡液中的Hcy水平，从而影响PCOS患者卵子和胚胎的质量。为此，本研究检测了行体外受精（in νitro fertilization，IVF）治疗的PCOS患者的卵泡液Hcy水平，并分析其与卵泡液中葡萄糖（glucose，Glu）、雌二醇（estradiol，E2）水平的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2014年3月—2015年9月在延安大学附属医院生殖医学中心及宝鸡市妇幼保健院生殖医学中心行IVF治疗的不孕患者100例，年龄20～42岁。诊断标准：夫妻可完成正常的性生活，且未避孕未育1年以上。其中有50例确诊为PCOS患者，入组标准：B超监测每侧卵巢有＞10个直径2～8 mm的卵泡且卵巢间质密度增强，月经稀发（月经周期＞45 d）或闭经，睾酮＞2.2 nmol/L或黄体生成素（luteotropic hormone，LH）/卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）比值≥2；排除患有其他系统性疾病的患者，如全身性炎性疾病、先天性肾上腺皮质增生症、高泌乳素血症及甲状腺疾病等，排除血性的卵泡液。另50例不孕妇女为非PCOS患者，不孕原因主要为男方因素或输卵管因素。入组标准：月经规律，月经初期卵泡数＜10个且大小正常；基础激素水平正常。男性不育的诊断参考世界卫生组织（World Health Organization，WHO）2010年标准。所有对象近3个月未服用激素类药物及叶酸、B族维生素等可能影响Hcy代谢的药物，且无吸烟、吸毒及酗酒史。该项研究经延安大学附属医院及宝鸡市妇幼保健院伦理委员会批准，所有参与者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 促排卵方案 患者在前一月经周期的20 d左右（黄体中期）注射促性腺激素释放激素激动剂（商品名为达必佳，0.1 mg/d）。下一个月经周期第3天检测血清激素水平，当FSH＜5 IU/ L、LH＜5 IU/L、E2＜50 pg/mL、子宫内膜＜5 mm时，给予重组人促卵泡激素或尿促卵泡素（75 U/ 支）进行控制性卵巢刺激。当3个及以上的卵泡直径达到18 mm时，检测血清性激素水平，当日20：00—21：00注射5 000～10 000 IU人绒毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）。注射HCG 36 h后在在阴道超声下取卵。

1.2.2 收集卵泡液 9：00—11：00收集患者捡卵后的卵泡液。通过肉眼观察判断是否存在血液污染，丢弃浑浊或着色样本。收集的卵泡液在4 ℃下3 000×g离心15 min，除去细胞成分，随即-80 ℃冻存，后续进行生化指标和激素检测。卵泡液从收集到冻存的时间间隔不超过30 min。

1.2.3 各项指标的检测 Glu采用己糖激酶法检测。E2和胰岛素采用ROCHE MODULAR E170全自动化学发光仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法）检测。Hcy采用循环酶法，试剂盒由北京九强公司生产，检测仪器为OLYMPUS AUS 5400全自动生化分析仪（日本奥林巴斯公司）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以x± s表示，组间比较采用t检验。采用Pearson相关分析评估卵泡液Hcy水平与生殖指标的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PCOS组和非PCOS组一般资料比较

PCOS组年龄、不孕年限、体重指数、原发性不孕比例、继发性不孕比例、不孕因素、促性腺激素与非PCOS组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），而注射HCG 当日总卵泡数、直径≥14 mm的卵泡数及平均直径、直径＜14 mm的卵泡数、血清E2水平2个组之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 PCOS组和非PCOS组卵泡液各项指标比较

PCOS组卵泡液Hcy、胰岛素水平均明显高于非PCOS组（P＜0.05），而卵泡液Glu、E2水平2个组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 PCOS组和非PCOS组临床结局的比较

非PCOS组获卵数明显低于PCOS组（P＜0.05），而优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均明显高于PCOS组（P＜0.05）。2个组之间受精率差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

2.4 卵泡液Hcy水平与生殖指标的相关性分析

Pearson相关分析显示，PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平与体重指数、年龄、获卵数及卵泡液E2、Glu水平均无相关性（P＞0.05）。见表3。

表1 PCOS组和非PCOS组卵泡液各项指标的比较 （x±s）

表2 PCOS组和非PCOS组临床临床结局的比较

表3 PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平与生殖指标的相关性分析

3 讨论

Hcy是细胞和组织生长必需的氨基酸，同时提供了卵子发育非常重要的微环境。外周循环的环境变化可能会影响Hcy水平。因此，分析Hcy水平有利于了解血清代谢变化的信息。目前，已证实接受辅助生殖技术治疗的PCOS患者Hcy水平与卵子及胚胎质量呈负相关[6]，但在接受辅助生殖技术治疗的PCOS患者中还未见有卵泡液Hcy与卵泡液E2相关性的报道。

本研究结果显示，PCOS患者卵泡液Hcy水平明显高于非PCOS患者（P＜0.05）。有研究结果显示PCOS患者血浆Hcy水平明显升高[7]。本研究还发现PCOS患者卵泡液Hcy水平与体重指数、年龄、获卵数及卵泡液E2、胰岛素、Glu水平均无相关性（P＞0.05），提示PCOS患者卵泡液Hcy水平不受这些因素的影响。因此，PCOS患者Hcy水平可能与胰岛素抵抗和相对高雄激素血症有关[8]，但还需要更多的研究来揭示PCOS患者食物或体质效应及高遗传因素与Hcy的关系。

本研究结果显示PCOS患者的总平均获卵数显著高于非PCOS患者（P＜0.003），但非PCOS患者的临床妊娠率（50%）明显高于PCOS患者（33%）。多数研究认为PCOS患者的卵子和胚胎质量较差，受精率低，从而导致妊娠率降低[9]，但有些研究则认为受精率不受影响[10]。在接受辅助生殖技术治疗的妇女中，卵泡液Hcy水平与卵子及胚胎质量呈显著负相关[11]。由此可见，卵泡液Hcy水平可能会影响PCOS患者的妊娠结局。本研究结果还显示PCOS组和非PCOS组之间卵泡液E2水平差异无统计学意义（P＞0.05），与文献报道[12]一致。有研究发现在IVF/胚胎移植周期中，PCOS患者与正常排卵的不孕妇女之间卵泡液E2水平差异无统计学意义（P＞0.05）[13]。VOLPE等[14]发现PCOS患者与正常排卵的不孕妇女之间卵泡液E2水平无明显差异。因此，促性腺激素刺激的PCOS患者卵巢存在正常的芳香化酶活性的固有潜能，PCOS并不是由遗传性卵巢芳香化酶活性缺陷导致的。

综上所述，尽管PCOS和非PCOS患者的卵泡液Glu和E2水平是恒定的，但PCOS患者卵泡液Hcy水平明显升高。

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