临床胰岛制备过程

王树森（天津市第一中心医院移植中心细胞移植科，卫生部危重病急救医学重点实验室，天津 300192）

胰腺在低温低压下原位灌注UW器官保存液后0～4℃保存，在最短的时间内转移至GMP实验室，胰腺经过消毒、修剪后插管灌入胶原酶，缓慢逐渐加压灌注直至胰腺组织充分膨胀。将灌注好的胰腺组织切成8～12块后转移至450 ml或600 ml的Ricordi消化罐中，迅速升温至37℃后机械震荡同时每分钟抽取组织，进行双硫腙染色，显微镜下观察胰岛分离情况，当胰岛与外分泌组织充分分离时，终止消化，迅速灌入4℃1640溶液，并将组织液收集至自配的缓冲溶液中。组织液离心洗涤2～3次后，依据IEQ计数（一个直径150 μm的胰岛为一个胰岛当量）。将消化后的胰岛置于UW液中静止30分钟以上，然后在COBE2991血细胞淘洗机上以连续密度梯度离心法纯化胰岛，根据每管中胰岛细胞的纯度将其分为高纯度、中等纯度和低纯度。离心后，进行双人计数，对胰岛大小、碎片、密度及形态进行量化评分，估算培养瓶数量，并置于5% CO2培养箱22℃培养移植。