女性宫颈HPV持续感染患者配偶HPV感染型别的调查

徐鲁蒙 李光芝 王振华

近年来，女性宫颈人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染呈逐年上升趋势，与宫颈癌的密切相关难以根治[1]。女性宫颈HPV感染上升的原因尚不清，国外研究发现夫妻双方或性伴侣之间HPV感染的型别具有一定相关性[2]，故降低男性HPV隐性感染率可预防或降低女性患者HPV感染率。为进一步探讨女性宫颈HPV感染的原因，我们对312例宫颈HPV持续感染女性患者的配偶或性生活>6个月的性伴侣进行了HPV型别检测，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 对2016年5～12月，312例由妇科门诊确诊为宫颈HPV持续感染(即经≥2次HPV检测阳性，且维持时间>6个月)女性患者的配偶或性生活>6个月的性伴侣进行HPV分型检测，其中男性被检测者年龄在20～45周岁，平均29.17岁，女性被检测者年龄在18～42周岁，平均28.35岁。所有患者均签署知情同意书。纳入标准：①经妇科门诊≥2次HPV检测为阳性的女性宫颈HPV感染患者，其配偶或性生活>6个月的性伴侣；②夫妻双方或性伴侣之间6个月内无不洁性交史；③患者年龄18～45岁，且依从性均较好。排除标准：①夫妻一方或双方6个月内有不洁性生活史；②有尿道、生殖器其他感染性疾病尚未治愈者；③夫妻一方或双方患免疫功能低下、代谢性疾病或其他慢性疾病等。

1.2 方法

1.2.1 取材 所有男性患者按照顺序依次取尿道口、冠状沟、龟头分泌物，将HPV拭子缓慢插入尿道口顺时针旋转4～5周取出拭子后沿患者龟头、冠状沟处顺时针摩擦1周取材，然后将拭子放入洗脱管中，沿刷柄折痕处折断，拧紧管盖，12 h内送检。

1.2.2 试剂及使用仪器 选用深圳亚能生物科技有限公司生产的人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒(PCR反向点杂交法)、分子杂交仪，由珠海黑马医学仪器有限公司的Hema9600基因扩增仪。

1.2.3 实验步骤 ①HPV DNA的提取：将洗脱液放入离心管中离心，留取管底的沉淀细胞。加入50 μL裂解液悬浮沉淀，沸水浴加热后离心，留取上清液待用；②PCR扩增：将反应液I及反应液II低速离心数秒后分别加入待测样品DNA 5 μL，阳性质控品和阴性质控品同步处理，按条件循环40次扩增；③杂交：将 A、B两液及所有对应的PCR产物，沸水浴10 min后放入杂交箱杂交。阳性质控品与阴性质控品同步处理；④洗膜：取出膜条至B液中洗涤5 min；⑤显色：将膜条放入孵育液浸泡，用A液、C液洗膜，后浸泡于显色液中避光30 min观察结果。

1.3 观察指标 设定观察指标为完全吻合、部分吻合、无相关性3个等级，完全吻合标准为：男女双方HPV感染型别完全一致；部分吻合标准为：男女双方HPV感染型别部分一致(即有≥1个型别不一致)；无相关性标准为：男女双方HPV感染无同一型别。

2 结果

2.1 配对后共检出176对男女双方HPV感染均阳性者，其中男性外生殖器发现疣体者15例，另外136例男性HPV检测显示阴性，HPV感染率为56.41%(176/312)。在176例男性HPV阳性患者中共检测到HPV型别21种，HPV 66型、81型别未检测到。其中65例HPV亚型完全吻合，单一亚型感染59例(33.52%)，双重亚型感染5例(2.84%)，多重亚型感染1例(0.57%)。另有36例(20.45%)亚型部分吻合，即双方感染型别种至少含有1种相同亚型。双方吻合率为57.39%(101/176)，其中完全吻合率为36.93%(65/176)，见表1。

表1 176对夫妻双方HPV感染分布情况 例

2.2 在吻合的101对患者中，16、18型别感染的吻合率最高，分别为29/101(28.71%)、28/101(27.72%)，其次为6/11型，分别为12/101(11.90%)、8/101(7.92%)。由此可见，HPV感染吻合率与型别具有一定相关性，见表2。

表2 101对夫妻双方HPV感染吻合情况 例

3 讨论

近年来，许多学者发现，HPV感染除了可以导致尖锐湿疣(condyloma acuminata，CA)外，还可与宫颈癌、阴茎癌、肛门癌、口咽癌等密切相关[3]。由于HPV病毒在宿主细胞内进行DNA复制、表达、组装，且存在免疫逃逸现象，故HPV存在亚临床感染或潜伏感染，临床上早期诊断困难，治疗后易复发[4，5]。Kokelj等[6]研究报道，女性HPV隐性感染者其男性性伴侣HPV感染率高达40%，且HPV隐性感染后在一定的条件下是可以发展成为CA的，故降低男性生殖器部位的HPV感染可同时减少男性和女性HPV感染率及其HPV相关疾病的发生概率。Abalos等[2]采用反向线印迹法对29对夫妻进行HPV型别检测发现，夫妻双方中至少部分类型一致率可达到66%，具有高度一致性，且完全吻合者达41%。我们研究发现双方吻合率为57.39%(101/176)，其中完全吻合率为36.93%(65/176)，与上述研究结论基本一致，说明夫妻或性伴侣同治具有非常大的必要性，也部分解释了女性宫颈HPV持续感染呈上升趋势这一现象。此外，通过对HPV型别进行吻合率分析发现，HPV吻合率与HPV型别具有一定相关性，16、18型别感染的吻合率最高，其次为11、6型。这可能与引起尖锐湿疣的主要HPV型别相关，但具体原因有待进一步探究。

[1] Li N, Franceschi S, Howell-Jones R, et al. Human papillomavirus type distribution in 30, 848 invasive cervical cancers worldwide: Variation by geographical region, histological type and year of publication[J]. Int J Cancer,2011,128(8):927-935.

[2] Abalos AT，Harris RB，Nyitray AG，et al. Human papillomavirus type distribution among heterosexual couples[J]. J Low Genit Tract Dis，2012，16(1)：10-15.

[3] Alemany L, Saunier M, Alvarado-Cabrero I,et al . Human papillomavirus DNA prevalence and type distribution in anal carcinomas worldwide[J]. Int J Cancer，2015，136 (1)：98-107.

[4] Best SR，Niparko KJ，Pai SI． Biology of human papillomavirus infection and immune therapy for HPV-related head and neck cancers[J]. Otolaryngol Clin North Am，2012，45(4):807-822.

[5] Wang HW，Wang XL，Zhang LL，et al． Aminolevulinic acid (ALA)-assisted photodynamic diagnosis of subclinical and latent HPV infection of external genital region[J]. Photodiagnosis Photodyn Ther,2008,5(4):251-255.

[6] Kokelj F, Baraggino E, Stinco G, et al .Study of the partners of women with human papillomavirus infection[J]. Int J Dermatol,1993,32(9):661-663.