少突胶质细胞缺血缺氧损伤模型的构建

孟赞

【摘 要】目的：以简单、高效的方法建立少突胶质细胞缺血缺氧模型。方法： 少突胶质细胞培养至70～80%融合，将24孔培养板每6孔划分为一组，分为：（1）对照组：细胞培养液换以常规培养液；（2）缺糖组：细胞培养液换以低糖培养液（3）缺氧组：细胞培养换以含Na2S2O4终浓度1mmol/L的常规培养液；（4）缺糖缺氧组：细胞培养液换以含Na2S2O4终浓度1mmol/L的低糖培养液。显微镜下观察各组细胞数量及形态的改变。Hoechst染色观察凋亡小体。结果：（1）缺血缺氧组比较于对照组，有大量漂浮的细胞，仅有少量的细胞散在分布于瓶底或玻片上，大量细胞形态不规则，而且细胞突起、胞体严重回缩。（2）缺血缺氧组比较于对照组细胞量少，且呈小圆形形态，胞质胞核深染。结论： 以含Na2S2O4终浓度1mmol/L的低糖培养液可以获得少突胶质细胞缺血缺氧模型。

【关键词】少突胶质细胞；缺血缺氧损伤模型

随着社会人口老龄化，神经退行性疾病的发病率日益增高，不仅使患者的预期寿命和健康预期寿命缩短，而且给家庭和社会带来了沉重的经济负担，而临床上目前对于这类疾病尚无有效控制病程进展的措施。瑞士研究者发现神经系统退行性疾病与髓鞘脱失有关，进一步研究证明少突胶质细胞退化导致脱髓鞘，研究表明少突胶质细胞对缺血缺氧损伤较其他胶质细胞敏感。因此，有学者提出少突胶质细胞的缺血缺氧损伤是神经退行性疾病重要原因。体外培养的少突胶质细胞系与其在体特性极其相关，通过体外培养可了解到少突胶质细胞系的存活、增殖、分化以及发育过程细胞的生物化学变化等。本研究参照相关文献，成功建立可行的少突胶质细胞缺血缺氧损伤模型，为研究少突胶质细胞的损伤修复及其分子机制奠定基础。

1.材料和方法

1.1 材料

器材：恒温培养箱、电冰箱、离心机、显微镜、超净工作台、吸管、胶头滴管、离心管、培养瓶、试管架、酒精灯。

试剂：DMEM培养液、血清、胰蛋白酶液，75%乙醇、DMSO、PBS、Na2S2O4。

B104 神经母细胞瘤细胞株为第三军医大学赠送。

1.2 实验分组及给药方式

少突胶质细胞培养至70～80%融合，将24孔培养板每6孔划分为一组，分为：

（1）对照组：细胞换以常规培养液；

（2）缺糖組：细胞换以低糖培养液；

（3）缺氧组：细胞培养换以含Na2S2O4终浓度1mmol/L的常规培养液；

（4）缺糖缺氧组：细胞换以含Na2S2O4终浓度1mmol/L的低糖培养液。

1.3 指标测定

（1）显微镜下观察

显微镜下观察各组细胞数量及形态的改变。

（2）Hoechst染色

Hoechst染色观察凋亡小体

2.结果

2.1显微镜下观察各组细胞数量及形态的改变

缺血缺氧组比较于对照组，有大量漂浮的细胞，仅有少量的细胞散在分布于瓶底或玻片上，大量细胞形态不规则，而且细胞突起、胞体严重回缩。

2.2 Hoechst染色显微镜下观察凋亡小体

缺血缺氧组细胞出现凋亡小体。（Fig.2）

随着神经科学的迅速发展，离体培养的少突胶质细胞将被越来越广泛的应用于包括细胞功能，神经发育，退行性疾病等在内的多领域，多层次的研究。本实验建立了可行的少突胶质细胞缺血缺氧损伤模型为实验的顺利进行打下基础。

参考文献：

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