非洲猪瘟病毒免疫逃逸机制探索：DP96R拮抗

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一种急性、热性、高度传染性疾病，可感染家猪、野猪和软蜱类等。ASFV是一种具有囊膜的核质大DNA病毒，在病毒分类中隶属于非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属，且为该病毒科唯一成员。ASFV的基因组大小介于170 kb～190 kb之间，大致分为中央保守区和左右两侧可变区，可变区多编码表达病毒复制非必需基因，其编码蛋白可影响病毒毒力或调控宿主免疫系统，包括多基因家族(MGF)360、MGF505/530、NL-S和L83L等。

近期发表于《Biochemical and Biophysical Research Communications》的一篇文章中，作者阐述了ASFV China 2018/1毒株编码的毒力蛋白DP96R对环状GMP-AMP合酶(cGAS)介导信号通路cGAS-STING-TBK1的调控作用。cGAS是近期报道的细胞质中一种关键DNA模式识别受体，在识别、结合胞质DNA后被激活，催化产生第二信使cGAMP，cGAMP激活 STING(干扰素基因刺激蛋白)。活化的 STING募集和磷酸化 TBK1、IRF3，pIRF3形成同源二聚体后进入细胞核并结合IFN启动子，诱导I型干扰素上调表达。作者将病毒DP96R与cGAS、STING共转染HEK293T细胞，荧光定量PCR实验结果表明，DP96R能够抑制cGAS和STING过表达引起的IFN-β和 TNF-α mRNA水平增加；通过双荧光素酶报告基因检测实验，作者发现DP96R能够抑制cGAS/STING、STING/cGAMP引起的 IFN-β、ISRE和 NF-κB启动子的激活。以上结果表明DP96R蛋白对cGAS-STING-TBK1信号通路具有显著抑制作用。

为了进一步研究DP96R的作用机制，研究人员将TBK1或IRF3-5D同DP96R、双荧光素酶报告基因共转染HEK293T，研究发现DP96R能够抑制TBK1过表达介导的 IFN-β-luc和 PRDIII-I-luc激活，且呈剂量依赖性；DP96R不抑制IRF3-5D和IFN-β蛋白诱导的ISRE启动子激活。此外，DP96R能够抑制TBK1、IKKβ而非p65过表达诱导的 NF-κB启动子激活。Western blot结果表明，DP96R可抑制TBK1外源性表达，也抑制cGAS/STING刺激引起的TBK1和IRF3磷酸化。抗病毒实验结果表明，DP96R可抑制TBK1而非IRF3-5D介导的抗病毒效应，促进VSV-GFP的表达。最后，该研究通过将DP96R分节段进行表达，鉴定出DP96R C端的30～96位氨基酸是其主要的免疫抑制功能区。

目前，我国16个省及直辖市已经呈散发出现非洲猪瘟疫情。ASFV尚无商品化疫苗问世，现有研究表明，研制基因缺失弱毒活疫苗是ASFV疫苗研发的首选策略。DP96R蛋白是ASFV毒力蛋白，DP96R基因缺失后病毒毒力减弱，该文章通过对DP96R抑制Ⅰ型IFN表达的机制进行了初步研究，发现DP96R通过抑制TBK1磷酸化，以及抑制TBK1的表达发挥其免疫抑制作用，但DP96R在细胞内的靶标作用蛋白仍需进一步鉴定。相信随着对非洲猪瘟病毒基因组的持续深入研究，以及对其免疫逃逸蛋白作用机制的进一步鉴定，必将对非洲猪瘟基因缺失疫苗的研发提供更多的理论指导。

评述论文来源：Wang Xi-xi,Wu Jing,Wu Ying-tong,et al.Inhibition of cGAS-STING-TBK1 signaling pathway by DP96R of ASFV China 2018/1[J].Biochem Biophys Res Commun,October 2018.DOI:10.1016/j.bbrc.2018.10.103