胚胎干细胞在培养过程中操作注意事项

答：(1)定期将未分化的细胞集落从已分化的细胞中分离出来并接种到新的培养基上。

(2)转移细胞时尽量快，以免细胞发生解离和死亡。

(3)分离细胞集落时使每个部分含5～10个细胞，否则细胞过多将导致分化，细胞过少则克隆的效率低。

(4)由于ESCs是对各种内毒素最为敏感的细胞，故要重视培养液和血清的质量。

(5)重视原始饲养层细胞的质量，没有原始饲养层细胞所在的胚胎干细胞将在7～10 d内分化或死亡，若原始饲养层细胞质量差，则不能有效地抑制ESCs的分化而导致培养增殖失败。