HPV感染基因型别在新疆克州柯尔克孜族女性人群中分布与宫颈癌早期筛查的相关性分析

汪咏新 ，于强 ，吴新华 ，高峰 ，如先古丽·热衣丁

宫颈癌的致病因素是多种复杂的，是多种诱因素作用的结果，但人乳头瘤病毒（HPV）是引起宫颈癌及宫颈癌前病变的主要病因[1]。为了了解克孜勒苏柯尔克孜自治州柯尔克孜族女性HPV感染状况、型别分布和多种感染状况特点，我们对前来妇科门诊就诊的123例柯尔克孜族女性进行PCRDNA杂交技术检测并进行分型，同时结合液基细胞学、宫颈病理活检进行临床分析，目的在于通过对新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州柯尔克孜族女性HPV-DNA基因分型检测来探讨柯尔克孜族女性HPV-DNA基因分型检测与宫颈癌早期筛查、早期防治方面的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2015年2月5日至2016年10月26日期间在克孜勒苏柯尔克孜自治州人民医院妇科门诊就诊的柯尔克孜族女性患者123例为观察对象，年龄最低的25岁，最高的83岁。

1.2 样本来源 由医院妇科门诊部医生用无菌生理盐水绵球去取宫颈外分泌物，再用HPV专用采样刷于宫颈管内2cm处采集标本，采集后将采样刷放入内有专用细胞保存液的采样管里，立刻送到PCR-DNA检测室检验。

1.3 仪器及试剂 使用美国ABI7300 PCR扩增仪进行扩增，人乳头瘤病毒基因分型（28型）检测试剂盒（PCR-反向点杂交）由中山大学达安生物基因有限公司提供的杂交试剂盒进杂交分型。

1.4 检测步骤

1.4.1 HPV-DNA的分离提取 试剂盒由中山大学达安生物基因有限公司供应，确保试剂盒在有效期内使用完毕，选用专业技术强的检验技术人员，认真仔细的按分离提取要求逐步提取HPV-DNA。提取最后阶段，取出20μl提取好的HPV-DNA模板用于PCR-DNA扩增，并把部分HPV-DNA样本冰冻在-20℃冰柜中以便备用。

1.4.2 HPV-DNA的扩增 使用美国ABI7300 PCR仪进行扩增，扩增产物放在-200C保存以备使用。

1.4.3 HPV-DNA杂交分型 使用达安生物基因有限公司提供的试剂盒并采取手工进行杂交分型。检测结果出现清晰可见的蓝色圆点即为阳性，杂交膜上的生物色素结合点、内控点必须显色，否则检测为无效检测。

1.5 统计学方法 运用SPSS 15.0系统软件统计计算，用百分率（%）表示。

2 结果

2.1 HPV-DNA检测结果 于123名门诊就诊柯尔克孜族女性人群当中，检测出22例HPV感染阳性患者，总阳性率达17.89%，在其中高度危险型感染有18例占81.82%，中度危险型感染3例占13.64%，低度危险型感染9例占40.91%。

2.2 HPV-DNA亚型分布 从表1中可以得出，22例女性HPV感染的各亚型分布中，其感染率居前几位为 HPV54型占 22.7%、HPV16型占 18.2%、HPV58型占13.6%、HPV31型占13.6%、HPV51型占9.0%、HPV52型占9.0%、HPV66型占9.0%。

表1 例柯尔克孜族女性HPV感染者HPV基因型别感染阳性率分布

2.3 HPV-DNA基因型单一及多重感染情况 表2可见，在22例感染HPV样本中，检测出来17例单一HPV基因型感染占77.3%，5例为HPV基因型多重感染，占22.7%。

表2 22例感染者HPV基因型单一、多重感染阳性率

3 讨论

本方法采用了反向点杂交原理检测28种HPV基因型别。率先检测多达28种HPV基因型别。28种基因型别包括15种高度危险型HPV(16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，68，73，8 2 型)、3 种中度危险型(26，53，66)和 10 种低度危险型 HPV(6，11，40，42，43，44，54，61，81，83 型)。 该方法具有多种优点如可检测多重感染、高通量、敏感性极强、特异性显著、精准性高等；只需要一次扩增就可以同时检测出28种高度危险型、中度危险型、低度危险型及国内人群常见型别。目前，国内外专家一致认为该检测方法是进行HPV DNA检测和分型非常好的方法[2，3]。本调查，共检测123例柯尔克孜族女性样本，检出HPV阳性者22例，总阳性率为17.89%，总阳性率低于其他文献关于新疆女性HPV感染状况的报道[4]。于22例感染HPV中，高度危险型HPV 18例，占感染率81.82%，中度危险型HPV 3例，感染率占13.64%，低度危险型HPV 9例，占感染率40.91%，混合感染HPV 5例，占感染率22.73%。本结果展示，新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州柯尔克孜族女性人群HPV型别分布特点：高度危险型基因型别主要是HPV16型，其次为HPV31、58、51、52 型，依次占总感染型别的 18.2%、13.6%、13.6%、9.0%、9.0%；检测出HPV 28种型别中的17种型别，高度危险型患者感染率由高到低依 次 为 HPV16、58、31、51、52、35、45、68、68 和 73型，中度危险型依次为HPV53、66，低度危险型依次为 HPV54、6、40、44、43 型。 高度危险型感染的问题严重，占总体感染病例的81.82%，尤为明显的是HPV16占感染率的18.2%；低度危险型感染也一定的比率达40.91%，其中尤为明显的是HPV54占总体感染率的22.7%，其危害性应予以重视，定期检测HPV、加强随访并进行临床医学干预很有必要。

从本调查可以看到，柯尔克孜族女性人群中HPV亚型多重感染率现已达到22.7%，这与其他科研人员研究中的发现相一致[5，6]。我们的研究数据及资料显示：单一HPV基因型感染占很大比例；在多重感染中，二重感染占18.2%之多，同时也存在HPV四种基因型别感染现象占4.5%。我们还发现柯尔克孜族女性人群中HPV亚型多重感染既有高度危险亚型与高度危险亚型的混合又有低度危险亚型与高度危险亚型的混合，并未发现低度危险亚型与低度危险亚型的混合，并且各亚型混合分布无特殊规律可言。经查阅有关宫颈癌研究资料显示，长期持续感染 HPV16、52、33、18型是直接导致宫颈癌的主要因素，而之外的其他型别多重感染则会有诱发宫颈癌发生的可能[7]。HPV的多重感染与宫颈癌的发生发展有着紧密的相关性，多重HPV感染会使宫颈癌患病风险巨增到30多倍，而单一HPV感染也可使宫颈癌患病的风险增加到近20倍[8－10]。故此，我们很有必要对柯尔克孜族女性HPV亚型多重感染者做到定期HPV-DNA检测及细胞液集，更有必要时可做阴道镜病理活检。

据相关临床资料报道，在新疆很多地区宫颈癌有一定的发病率[11－13]。而我们对新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州柯尔克孜族女性，123例样本中，检出HPV阳性者22例，总阳性率为17.89%，明显低于我国其它地区及新疆其它地区的HPV感染率。但22例HPV阳性病例中，高危型HPV 18例，占感染率81.82%，中危型HPV 3例，感染率13.64%，低危型HPV 9例，占感染率40.91%，混合感染HPV 5例，占感染率22.73%，仍需要引起我们的高度重视。通过分析新疆克州柯尔克孜族女性人群中HPV感染基因型别分布情况，对新疆克孜勒苏柯尔克孜自治州柯尔克孜族女性人群宫颈癌等疾病的预警和早期诊断具有重要的临床意义，早发现早诊断早治疗和在临床医学上加强主动精准干预有利于防止宫颈癌的发生发展，并对HPV感染的转归有着很大的帮助，从而做到降低宫颈癌的发病率和死亡率。