尿NGAL与血清Cys-C联合检测在糖尿病肾病早期诊断中的应用

胡军红，谢建红，曾利球，邓灼斌，黄燕莉，曹证福

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是一种以糖代谢异常为主要原因导致的肾小球微血管病变的疾病，是目前引起终末期肾病（end stage renal disease，ESRD）的首要原因。DN早期给予适当的干预治疗能有效缓解病情，但中晚期由于病情过度恶化导致不可逆转，因此早期诊断、预防与延缓糖尿病肾病的发生发展对提高糖尿病患者存活率，改善其生活质量具有重要意义[1]。糖尿病肾损伤传统的检验指标有尿素和肌酐等项目，但这两个指标对早期肾损伤不够灵敏，目前比较常用的糖尿病早期肾损伤检验指标是尿微量白蛋白，但由于尿微量白蛋白在某些情况下容易出现假阳性，如溢出性蛋白尿[2，3]，所以有时对诊断糖尿病肾病的特异性不足，对预测病情的转归也存在局限性，所以我们有必要寻找一些其他的糖尿病肾病早期检测指标来克服这些局限。近年来，一些研究发现中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）和胱抑素C（Cys-C）等检验项目可能是比较好的糖尿病肾病早期诊断的指标，本文旨在通过检测几组观察对象的尿NGAL与血清Cys-C水平，并分析这两个项目联合检测在DN早期诊断中的临床价值，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 观察对象 选择2016年7月至2017年4月在本院经临床确诊的Ⅱ型糖尿病患者117例为观察对象，诊断标准符合2010版中国Ⅱ型糖尿病防治指南，其中男 62例，女 55例，平均（56.36±10.9）岁。根据其尿微量白蛋白/肌酐比值（ACR）将其分为3组，分别为单纯糖尿病组（A组）63例，ACR≤30mg/g；早期 DN组 （B组）30例，30mg/g

1.2 方法

1.2.1 样本收集 清晨用普通干燥试管采集研究对象空腹静脉血液 3～5ml， 以 3000r/min离心 5～10min分离血清备用。同时用塑料离心管收集清洁中段尿 5ml，以 1500r/min速率离心 5min，取上清液备用。

1.2.2 仪器和试剂 应用日立7600全自动生化分析仪检测血清Cys-C、血清肌酐、尿NGAL及尿微量白蛋白和尿肌酐水平。尿微量白蛋白和尿NGAL及血清Cys-C采用乳胶增强免疫比浊法测定，血、尿肌酐采用酶法测定，以上试剂均由宁波美康生物技术股份有限公司提供，以上实验均严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.3 检测指标及评定标准 男性血清Cr>104μmol/L为异常，女性血清Cr>84μmol/L为异常；血清Cys-C>1.19mg/L为异常；尿NGAL>96μg/L为异常。

1.4 统计学分析 试验结果计量资料以均值±标准差（x±s）表示，多组计量资料均数的比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 尿NGAL水平与血清Cys-C与DN进展关系随着DN病程进展，患者尿NGAL和血清Cys-C水平逐渐上升，各组尿NGAL及血清Cys-C水平见表1，各组间尿NGAL水平比较差异有统计学意义（F 值＝22.628，P＜0.01），各组比较，单纯糖尿病组尿NGAL水平高于健康对照组，但差异没有统计学意义（t＝1.816，P>0.05），早期 DN 组 NGAL 水平高于单纯糖尿病组，差异有统计学意义（t=3.173，P<0.01），DN组尿NGAL水平高于早期DN组，差异具有统计学意义（t=2.588，P<0.05）。各组间血清Cys-C水平比较差异有统计学意义 （F值＝23.697，P＜0.01），各组比较单纯糖尿病组血清Cys-C水平高于健康对照组（t＝4.034，P＜0.01），早期 DN 组血清 Cys-C水平高于单纯糖尿病组 （t＝4.561，P＜0.01)，DN组血清Cys-C水平高于早期DN组 （t＝2.683，P＜0.05)。

表1 各组实验室指标比较（x±s）

2.2 各组观察对象血清Cys-C、血清Cr和尿NGAL的检测结果及血清Cys-C与尿NGAL联合检测异常率比较 A组尿NGAL与血清Cys-C联合检测阳性率明显高于单项检测血清Cr、Cys-C及尿 NGAL 阳性率 （χ2=24.912、4.787、3.889；P=0.000、0.029、0.049）；B 组联合检测阳性率明显高于单项检测血清Cr、Cys-C及尿NGAL阳性率（χ2=38.571、6.667、4.320；P=0.000、0.010、0.038）；C 组联合检测阳性率明显高于单项检测血清Cr阳性率（χ2=9.6；P=0.002），但与血清 Cys-C 及尿 NGAL 阳性率相比差别不明显 （χ2=2.087、1.021；P=0.149、0.312）。通过以上几组数据分析发现，单项检测指标中血清Cys-C及尿NGAL检出率明显优于血清Cr，而在 DN 早期（B 组，30mg/g

表2 各观察组血清Cys-C、血清Cr和尿NGAL异常检出率比较[n(%)]

3 讨论

目前病理诊断是糖尿病肾损伤诊断的金标准，但做病理诊断需要肾穿刺活检，由于具有创伤性，所以在DN早期，患者较难接受，尿微量白蛋白是一个以反映肾小球病变为主的检测指标，但尿微量白蛋白易受到其他因素干扰，在感染、发热、充血性心力衰竭以及血压和血糖控制欠佳的状态下，都会影响其测定结果，而且还有部分DM患者在发生肾功能损害前没有出现白蛋白尿，部分患者出现白蛋白尿而没有出现肾功能损害[4-7]。正因为尿微量白蛋白检测在早期糖尿病肾病的诊断中还有一定的局限性，所以我们需要寻找其他对早期DN诊断特异性高的生化指标来弥补白蛋白尿的不足。

中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)属于载脂蛋白超家族，结构上属于分泌蛋白，是一种中性粒细胞继发性颗粒蛋白。NGAL在一般情况下比较低水平的表达于人的肾脏、肺脏、胃和结肠，当疾病发生后，相应器官上皮细胞受损时NGAL会被诱导大量表达。在动物实验中，早期缺血后的大鼠和小鼠肾脏，NGAL在多个肾单位节段中表达上调，并大量积聚在增生的近曲小管细胞上。在缺血或中毒的肾病模型中，NGAL也会在早期大量表达，而且急性肾损伤后NGAL很快就可以在血液和尿液中检测到，因此NGAL可以作为反映早期肾小管损害的指标[8-11]。

胱抑素C(Cysatin C)是一种半胱氨酸蛋白酶抑制剂，由有核细胞持续合成并释放到血液中，肾小球自由滤过，近端肾小管完全重吸收且不分泌[12，13]，由于其在血液中的水平受年龄、性别、种族、肌肉总量等影响不明显，当肾小球出现轻微损伤时，其滤过率便会下降，血中CysC浓度即可出现升高，并随着病情的加重而逐渐增高，所以CysC被认为是反映肾小球滤过率变化的理想内源性标志物[14，15]。

本结果显示，尿NGAL和血清CysC浓度水平在病理性蛋白尿出现之前就开始升高，都可作为DN早期的标志物，各观察组间尿NGAL和血清CysC浓度水平随着DN的进展而逐步增加，差异有显著意义。单独使用血清Cys-C或尿NGAL作为检测早期DN的生物学指标灵敏性显著高于血清CR，但检测阳性率仍在66.67%～73.3%之间左右，而血清Cys-C+尿NGAL联合应用于早期DN检测，阳性率可达93.3%，因此尿NGAL和血清CysC都可作为早期预测和监测糖尿病肾功能损伤的标志物，而这两项标志物联合检测则可显著提高早期DN检测的阳性率。