196例抗核抗体谱检测对自身免疫病的诊断意义

刘及生 ，谭福燕 ，焦安君 ，冯晓晶 ，谭立明 ，刘文华 ，胡志辉 ，张 嵘

自身抗体是自身免疫性疾病(autoimmune disease，AID)的重要标志[1]，患者血液中存在高效价自身抗体是AID的特点之一，也是临床确诊AID的重要依据[2]。AID多为慢性病，如系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus，SLE）、 干燥综合征(Sjogren Syndrome，SS)和类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）等。任何性别、年龄均可发病，以女性为多见；常累及多器官、多系统、反复发作、慢性迁延[3]。AID的诊断标准之一是检测出疾病特异性或相关性自身抗体，这些自身抗体是AID的重要标志，每种AID都伴有特征性的自身抗体谱。现对196例患者血清进行了抗核抗体 （ANA）谱检测，对其检测结果进行分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 自2011年1月至2017年1月在江西省宜春市宜丰县中医院检测抗核抗体谱的患者196例，年龄7月12d～80岁，平均51岁。其中男性74例，女性122例。男女比例为0.61：1。其中SLE 20例，男 2例，女 18例，年龄 9～73岁，平均41岁。SS 9例，男1例，女8例，年龄33～80岁，平均57岁。硬皮病 (Progressive Systemic Sclerosis，PSS)8例，男 1例，女 7例，年龄 23～65岁，平均45.1岁。RA 5例，男2例，女3例，年龄14～80岁，平均55.76岁。多发性肌炎/皮肌炎(Polymyositis/dermatomyositis，PM/DM）7 例，男 1 例，女 6 例，年龄9～76岁，平均49.7岁。60例健康体检者为对照组，男性22例，女性38例，年龄18～56岁，平均28岁。所有入选者自愿接受实验并签署知情同意书。

1.1.1 诊断依据 ⑴SLE按1997年修订的SLE分类标准并成为国际通用的诊断SLE的标准[4]。⑵SS按2012年美国风湿病学会发表的SS诊断标准[5]。⑶RA按2015年美国风湿病学会/欧洲抗风湿联盟痛风分类标准[6]。⑷PM/DM的诊断依据：90%患者有肌电图异常；尿肌酸排出量增多，尿肌酐排量明显减少；肌活检90%异常，表现为肌纤维或空泡性坏死，肌纤维粗细不一，有再生现象，间质有炎性细胞浸润和纤维化。⑸PSS的诊断依据：掌指关节近端的硬皮变化，可累及整个肢体、面部、全身及躯干；双肺基底纤维化；手指间有凹陷性瘢痕和指垫消失。

1.1.2 纳入标准 ⑴自愿参与且进行ANA谱检测者；⑵符合诊断标准且有完整临床、影像学、组织学病理资料；⑶健康对照同时满足以下条件：①无自身免疫疾病；②心、肝、肾功能基本正常。

1.1.3 排除标准 ⑴不符合纳入标准者；⑵检测期间发烧、女性月经和妊娠期等；⑶合并严重心、肝、肺、肾脏等系统疾病、甲状腺疾病者；⑷健康对照组者血常规、乙肝、血压、血糖血脂、肝肾功能、胸片、肝胆胰检查出现异常。

1.2方法

1.2.1 标本处理 采集受检者静脉血3.0ml左右，1028g/15min离心后分离血清备用。

1.2.2 仪器与方法 ⑴仪器和试剂：EUROBlotMasterⅡ免疫印迹仪、ANA谱（IgG）检测试剂盒，均购自德国欧盟公司。⑵方法：线性免疫印迹法（LIA）检测抗核抗体谱，检验方法[7]：检测结果的解释：在ANA谱检测膜条彻底干燥后，根据膜条上抗原带着色深浅来判定结果。ANA谱检测抗AMA M2、抗AnuA、抗 Histon、抗 Jo-1、抗 CENP、抗 PCNA、抗dsDNA、抗 PM-Scl、抗 Rib P、抗 Ro-52、抗 SS-A、抗 SS-B、抗 Scl-70、抗 Sm、抗 RNP/Sm 抗体，只要有一种抗体阳性，即视为ANA-LIA检测阳性。

1.3 统计学方法 用SPSS 13.0软件进行统计学分析，分布资料阳性率的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义，P＜0.01差异具有显著统计学意义。

2 结果

2.1 抗核抗体谱分布情况及性别差异情况 在196例ANA谱检测结果中，抗SS-A抗体阳性率最高为15.3%，抗J0-1抗体阳性率最低为1.0%，15种自身抗体中除抗J0-1、抗PCNA抗体外，其余抗体阳性率在男女性别上存在明显差异。见表1。

表1 196例ANA谱不同性别阳性率分布表[n（%）]

2.2 ANA谱阳性检出情况 在196例标本中共检出ANA谱阳性61例，阳性率为31.1%。其中两个及以上抗体同时阳性的患者明显高于单项抗体阳性患者。见表2。

表2 61例ANA谱阳性患者中部分临床诊断结果[n（%）]

2.3 不同AID中抗核抗体阳性率分布 在51例AID中，15种抗核抗体在不同疾病中阳性率有差别，在SLE中抗SS-A抗体阳性率最高，达70.0%，在PM/DM中，抗Ro-52抗体阳性率最高，达42.9%。见表3。

3 讨论

AID是指机体的免疫效应或免疫效应分子，针对自身组织或细胞产生的一系列病理性免疫应答反应，导致自身组织器官损伤的一大类自身抗体多样化，谱型范围广的疾病[8]。ANA谱广泛应用于各种AID的临床诊断[9]，其中抗Sm抗体和抗dsDNA抗体阳性可作为诊断SLE的特异性指标[10]。SS是一种侵犯外分泌腺体的慢性自身免疫性疾病。抗SS-B抗体和抗SS-A抗体，抗Ro-52抗体阳性与 SS有很大的相关性[11，12]。 RA，是一种慢性、系统性的AID，以对称的多关节炎为主要表现[13]，自身抗体与RA的发生发展存在密切关联[14]。PM/DM是以横纹肌受损为主的系统性炎性肌病，抗Jo-1抗体是临床诊断PM和DM比较特异性的实验室指标[15]。

笔者回顾分析196例ANA谱检测结果，ANA谱阳性率达31.1%，与国内报道[16]基本一致，15种特异性抗体的阳性率在人群中存在明显差异，其中抗SS-A抗体的阳性率最高，为15.3%，是目前ANA谱分布最广，最常见的一种抗体，其与各种AID相关，最常见于SS。抗Ro-52抗体的阳性率次之，为13.3%，此抗体没有疾病特异性，在PM/DM，PSS和其他风湿性疾病中均可出现阳性。抗Jo-1抗体阳性率为1.0%，抗Jo-1抗体是PM/DM的标志性抗体。各抗核抗体（除抗Jo-1抗体、抗PM-Scl抗体和抗PCNA抗体外）在性别上存在显著差异，女性阳性率最高的前两项依次为：抗SS-A抗体、抗Ro-52抗体，阳性率分别为：41.0%，36.1%。男性阳性率最高的前两项依次为：抗SS-A抗体、抗Ro-52，阳性率分别为：8.2%，6.6%。自身抗体女性阳性率明显高于男性，这在很大程度上与性激素水平有关，有研究认为，人类易患性与年龄，性别，激素水平均有一定的关系，一般来说，雌激素的作用是增强免疫功能，可以影响抗体类别转换，而睾酮的作用是降低免疫功能。性激素影响B淋巴系统产生Ig的量，女性比男性能分泌更多的循环抗体量，尤其当女性患AID时，会产生更高滴度的自身抗体[17]。由此可见，与抗核抗体相关的疾病好发于女性人群。

表3 51例AID抗体血清IGg检测结果[n（%）]

在61例ANA谱阳性抗体阳性率检测结果中，单项抗体阳性占47.5%，两个及两个以上抗体同时阳性占52.5%，两者差异具有统计学意义（P＜0.05），由此说明各特异性抗体常联合出现在人体，这与研究报道[18]相符，抗SS-A抗体和抗SS-B抗体共同阳性占13.1%，抗SS-A抗体和抗R0-52抗体共同阳性占34.4%，抗Sm抗体和抗dsDNA抗体共同抗体阳性占4.9%，抗ds-DNA单项、抗ds-DNA+nRNP/Sm+Sm平行联合对SLE的诊断具有最好的诊断效率[19]。51例AID患者ANA谱的检测结果显示，抗 SS-A 抗体在 SLE、PM/DM、RA、PSS、SS中的阳性率普遍较高。抗SS-A抗体与各类AID有关，最常见于干燥综合征，也见于系统性红斑狼疮和原发性胆汁性肝硬化中，在SLE中，各种自身抗体的阳性率普遍较高，说明SLE中存在多种自身抗体，抗SS-A抗体、抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗Ro-52抗体、抗RNP/Sm抗体均是SLE的标志性抗体[20]，其阳性率分别为：70.0%、25.0%、45.0%、55.0%。抗dsDNA抗体不仅可以作为SLE患者的诊断标准还对其活动性的评估有着指导作用[21]。抗Jo-1抗体在PM/DM中的阳性率最高，达28.6%，而其在RA、PSS、SS及健康对照组中的阳性率为0.0%，由此说明某些抗体只特定存在于某些疾病中，Jo-1抗体是诊断PM/DM的特异性抗体。在RA中各抗核抗体阳性率均较低，其与ANA谱无明显相关性。在PSS中，抗Scl-70的阳性率最高，达62.5%，这与文献报道相符[22]。在SS中，抗SS-A抗体的阳性率与抗Ro-52抗体的阳性率均很高，由此发现，抗SS-A抗体、抗SS-B抗体、抗Ro-52抗体与SS存在明显的相关性，结果与文献中报道：抗SSA、SSB抗体是诊断SS的标志性抗体[23]相符。 61 例 AID 中除 RA、PM/DM 外，SLE、PSS、SS中的ANA谱阳性率均具有统计学意义 （P＜0.05），说明这三种AID均与ANA谱有较大的相关性。

总之，ANA谱检测各抗体阳性率在不同性别间存在差异，一种抗体能存在多种AID中，一种AID也可表现出多种自身抗体，所以在临床检测中应采用多种自身抗体的联合检测，防止漏检，以提高AID的诊断率。ANA谱检测对临床疾病的诊断具有重要意义。