α-羟丁酸脱氢酶与乳酸脱氢酶比值在发现α-羟丁酸脱氢酶和转氨酶底物耗尽中的应用研究

万祥辉 ，杨细媚 ，银天娇 ，文灿

在动力学法检测的生化反应中，由于标本酶含量过高，导致反应体系中酶的底物短时间内消耗殆尽，使得从开始读数点之前至反应终点的吸光度反应曲线的一段或整段为一平坦曲线，导致结果偏低甚至为“0”或负值，与实际值不符的现象称为底物耗尽。底物耗尽是生化实验室日常工作中常遇到的情况，丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、α-羟丁酸脱氢酶（HBDH）是最常见底物耗尽的酶类项目。本实验室生化试剂为河北艾欧路生物有限公司提供，按照说明书上参数设置乳酸脱氢酶（LDH）检测上限可以达到 10000U/L，肌酸激酶（CK）、碱性磷酸酶（ALP）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）和淀粉酶（AMY）检测上限可以达到3000U/L以上，这几种酶线性范围宽临床上不易出现底物耗尽；而HBDH、ALT、AST线性范围上限只能达到1000U/L，容易出现底物耗尽。当结果为负值或两个相关项目结果相差过大时的底物耗尽容易被发现，但当结果为正常值或相关项目结果没有明显冲突时则不易被发现[1]。虽然可以通过设置仪器参数对底物耗尽报警提示[2-4]，但当实验室信息系统（LIS）不具备接收仪器报警信息功能时，底物耗尽结果存在误审的可能性。笔者在实际工作实践中发现，利用HBDH/LDH的比值可以用于发现HBDH和转氨酶的底物耗尽，尤其是有利于发现容易被忽略的转氨酶底物耗尽情况。

1 材料与方法

1.1 临床资料 收集我院240例肝功能、肾功能、心功能指标均正常的参考人群的LDH、HBDH结果，男女比例1：1。同时收集了2017年7月至10月生化实验室日常工作中遇到的HBDH和转氨酶底物耗尽29个案例。

1.2 仪器与试剂 日立7600（210）全自动生化分析仪，ALT、AST、LDH、HBDH 生化分析试剂盒 （河北艾欧路生物有限公司），校准品（英国朗道），质控品（英国朗道）。

1.3 仪器参数设置及质量控制 试剂参数均按照试剂说明书设置。四个项目的室内质控变异系数（CV）控制在WS/T403-2012规定的室内质控偏倚范围内[5]，室间质评合格。

1.4 HBDH/LDH比值在发现底物耗尽中的应用用SPSS18软件分析240例参考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信区间。评价比值在实际工作中发现HBDH和转氨酶底物耗尽的应用价值。

2 结果

240例参考人群年龄分布为10岁至83岁，平均年龄52岁。参考人群的HBDH/LDH比值的95%的置信区间为 0.80～0.82，均值为 0.81，性别差异无统计学意义（t=0.583，P＞0.05）。 以 0.80 为判断阈值，HBDH/LDH小于0.8，LDH升高其组织来源主要为肝脏、红细胞或多种组织器官混合型；HBDH/LDH大于0.80，LDH升高其组织来源主要为心肌。HBDH线性范围上限可以做到1000U/L，因此当LDH测量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值小于0.8时，LDH升高可能为肝脏损伤引起，需要同时查看HBDH、AST和ALT反应曲线，确认是否存在底物耗尽；当LDH测量值大于1250U/L且HBDH/LDH比值大于0.8时，LDH升高可能为心肌损伤引起，需要同时查看HBDH和AST反应曲线，确认是否存在底物耗尽。

我们将上述规则作为发现底物耗尽的一个筛查指标。实践证明2017年7月至10月发生的29例HBDH、ALT、AST底物耗尽案例均可通过HBDH/LDH比值关系推断发现，敏感性达100%，并且发现了多例容易被忽略的转氨酶底物耗尽情况。表1为容易被忽略的转氨酶底物耗尽5个案例。

表1 通过HBDH/LDH发现容易被忽略的转氨酶底物耗尽案例

3 讨论

当人体肝脏、心脏等器官发生严重损伤时，ALT、AST、HBDH等酶的大量释放使血中浓度急剧升高，有时超过正常水平的几百倍甚至几千倍[6]，若此时底物耗尽未能及时被工作人员发现，采取稀释重测的纠正程序，则可能最终报出与实际酶活性相差甚远的假结果[7]。因此，对检验人员来说发现底物耗尽是一项非常重要的工作。表1 5个案例中ALT、AST稀释前的结果未出现负值，两者的趋势也未出现不符合临床的可疑情况，仪器虽然有字符报警”W”，但LIS不具备接收仪器字符报警的功能，此时若只查看HBDH的反应曲线，则ALT、AST的底物耗尽不能被发现，容易出现误审，影响患者的诊疗。

LDH几乎存在于所有组织中，以心肌、骨胳肌、肾脏和肝脏最为丰富，红细胞中也含量丰富。LDH包含5种同工酶，根据电泳迁移率快慢，依次为 LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，心肌和红细胞含量以LDH1、LDH2为主，肝脏以LDH5为主，HBDH反应的是LDH1和LDH2的活性[8]。因此当心肌损伤为主时，HBDH活性显著增高，HBDH/LDH比值大于0.8；当肝脏损伤或多器官组织损伤为主时，HBDH/LDH比值小于0.8。根据HBDH线性范围及HBDH/LDH比值发现HBDH底物耗尽不难，但容易忽视可能同时存在的AST、ALT底物耗尽。

HBDH、LDH作为传统心肌酶已经被新的心肌损伤标志物取代[9，10]，也有人认为没有必要联合检测HBDH和LDH[11]。本文29例底物耗尽案例显示，当心肌、肝脏或多组织器官严重损伤时，HB-DH、LDH活性会显著性增高，虽没有新心肌损伤标志物的敏感性高、特异性强，但依然可以成为临床协助诊断和疗效监测指标。此外研究显示HBDH、LDH还可以应用于多种疾病的辅助诊断，例如妊娠肝内胆汁淤积症[12]、白血病[13]、淋巴瘤骨髓侵犯[14]、精神分裂症[15]等。

有研究认为HBDH/LDH与精子活力和精液质量密切相关[16]，但未见HBDH/LDH用于发现底物耗尽方面的报道。本文给出的HBDH和转氨酶底物耗尽筛查规则实践证明可以发现HBDH和转氨酶的底物耗尽，防止HBDH和转氨酶底物耗尽的误审，不失为HBDH和LDH的新用途。