浅谈影响血清学实验因素

韩贞珍 （辽宁省葫芦岛市动物疫病预防控制中心 125000）

随着现代诊断技术的发展，免疫动物或感染动物的血清型中特有的免疫抗体或感染抗体，可以通过血清学进行检测，识别出抗体的种类和血清中的抗体量。

血清学鉴定最有效广泛使用的试验包括：凝集反应 （包括玻片凝集、试管凝集、乳胶凝集）补体结合试验、琼脂免疫扩散试验和间接酶联免疫吸附试验。影响血清学试验数据的因素主要有以下几个方面：电解质、温度、酸碱度、振荡、时间、杂质和异物。

1 电解质

在血清学反应试样中，玻片凝集是直接凝集，定量的血清和等量的抗原反应，不需要电解质。但试管凝集是间接凝集试验需要有电解质参与，当抗原与抗体发生结合后，由亲水胶体变为疏水胶体的过程中，须有电解质参与才能进一步使抗原抗体复合物表面失去电荷，水化层破坏，复合物相互靠拢聚集形成大块的凝集或沉淀，若无电解质参加，则不出现可见反应。为了促使沉淀物或凝集物的形成，在禽流感抗体检测试验中常用0.85%氯化钠 （pH7.4，121℃高压灭菌15min，4℃保存备用）作为抗原和抗体的稀释液或反应液。但电解质的浓度不宜过高，否则会出现盐析现象。

2 温度

抗原与抗体的结合除本身特有的特异性外，再结合反应过程受温度影响，温度对结合的效果至关重要。但在一定温度范围内，温度越高，抗原、抗体分子运动速度越快，这可以增加其碰撞机会，加速抗原抗体结合和反应现象的出现，如凝集和沉淀反应通常在37℃恒温箱 （即将试验材料加盖密封膜，起到保湿作用），以促进反应现象的出现，若用56℃水浴则反应更快。但并不是所有的抗原抗体反应都是温度越高反应越快，效果越好。有的抗原抗体结合需长时间在低温下才能使反应完成的比较充分、彻底，如有的补体结合试验，口蹄疫液相阻断-ELISA试验，在0～4℃冰箱结合效果更好。

3 酸碱度

任何微生物的生存都有自己的生存环境，环境的pH直接影响微生物的生存和死亡。在血清学反应中，适宜的pH能使血清中的抗体与诊断液中的病毒 （细菌）抗原有机的结合。因此，血清学试验要求在一定的pH下进行，常用的pH为6～8，过高或过低均可使已结合的抗原抗体复合物重新解离。若pH降至抗原或抗体的等电点时会发生非特异性酸凝集，造成假象。

4 振荡

抗原和抗体在适宜的温度、酸碱度条件下发生反应。为使抗原抗体结合的效果更好，增加抗原抗体的结合速度，采用人工辅助的方法机械振荡，适当的机械振荡能增加分子或颗粒间的相互碰撞，加速抗原抗体的结合反应，但强烈的振荡可使抗原抗体复合物解离。

5 杂质和异物

试验中的待检血清中如有与反应无关的杂质、异物 （如蛋白质、类脂质、多糖等物质）存在时会抑制反应的进行或引起非特异性反应，故在每次试验都应设立阳性和阴性对照。以便于发现检测血清学试验血清的质量问题。

6 时间

试验时间有反应时间和判定时间，发应时间受电解质、温度、酸碱度、杂质和异物的影响。试验判定时间影响判定结果。实验过程中观察时间的不同可能会看到不同结果，时间因素主要由反应速度来体现，反应速度取决于抗原抗体亲和力、反应类型、反应介质、反应温度等因素。试验的观察时间影响结果判定。在试验中应按照试验说明书要求和步骤操作，按规定时间进行判断。