生活饮用水微生物检验方法及评价标准探讨

□ 程 贺 本溪满族自治县疾控中心

在民生问题中，饮用水卫生受到了大众的关注，政府以及相关部门均十分重视居民的饮用水的卫生，多次修改、颁布饮用水的卫生标准[1]。人体中70%是由水构成的，正常人可以一周不进食，但是一天之内不可无水，因此干净的饮用水变得尤为重要。饮用水微生物污染在我国是最大的污染问题之一，在贫困地区尤为明显。

1 饮用水微生物指标

生活中的饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，因此微生物含量很少，但当水源水不洁或者在进行处理的适合水质并未达到制定的相关要求，因此饮用水仍含有很多致病性微生物或者一定量的微生物。供水管破损、二次供水环节之中也极有可能导致饮用水污染。我国制定的生活饮用水水质标准规定细菌总数每毫升低于100个，总大肠菌群不可检出[2]。

2 总大肠菌群进行检验的相关方法

2.1 应用多管发酵法进行总大肠菌群检验

多管发酵法适用于总大肠菌群的测定，总大肠菌群多是在37 ℃下进行24 h产酸产气、发酵乳糖、兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌，多管发酵法需要应用试剂和培养基，乳糖蛋白动培养液、伊红美蓝培养基、二倍浓缩乳糖蛋白培养液、革兰氏染色液。检验需要应用显微镜、培养箱、天平、试管、冰箱、平皿、分度吸管、锥形瓶、载玻片以及小倒管。将10 mL的水样接种至10 mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1 mL的水样加入9 mL灭菌生理盐水，将试管混匀后，将1 mL水样加入单料乳糖蛋白胨培养液（共10 mL）中，每一稀释度均需要接种5管。取处理的出厂自来水作为水样，每日进行一次检验，直接取5份10 mL的双料培养基，每一份均需要接种10 mL水样。若检测的水源污染比较严重，则需加大实验的稀释度，接种 1 mL、0.1 mL、0.01 mL， 每 一个稀释度据均需要接种5管，每一份水样接种15管。在接种1 mL水样时，需进行10倍递增稀释，之后接种1 mL，每递增均需要一次稀释，并且需要灭菌刻度吸管的更换。接种管置入35～37 ℃培养箱中培养24 h，乳糖蛋白胨培养管在试验结果中不产酸产气，则总大肠菌群的检测结果呈阴性；若结果产酸产气，需要将发酵罐转种在伊红美蓝琼脂板上，在35～37 ℃培养箱中培养18～24 h，观察菌落形态，挑选出有金属光泽、深紫黑色的菌落；紫黑色或稍带金属光泽菌落、淡紫红色中心较深的菌落[3]。经过染色镜显示未革兰氏阴性无芽孢杆菌，接种的同时乳糖蛋白胨培养，在35～37 ℃培养箱中培养22～26 h，若产酸产气，则证实有总大肠菌。

2.2 滤膜法

滤膜法也适用于生活饮用水和水源水中总大肠菌群的测定，总大肠菌群应用滤膜法进行测量需要应用孔径为0.45 μm微孔滤膜过滤水样，之后把滤膜贴于添加乳糖选择性培养基上37 ℃培养24 h，可形成特征性菌落需氧、革兰氏阴性无芽孢杆菌应用在水中展开总大肠杆菌群的检测。选用培养基、有品红亚硫酸钠培养基以及乳糖蛋白胨培养液。应用滤膜、无齿镊子、滤器、抽滤设备以及其他仪器通多管发酵法。①水样灭菌，分为滤器灭菌、滤膜灭菌两种灭菌方式。滤膜灭菌主要是把滤膜放置在烧杯中，在试验之中加入蒸馏水，至于沸水浴之中煮沸灭菌3次，每次时间约15 min。前两次煮沸之后需要用水洗涤2～3次，将残留溶剂去除。滤器灭菌主要是点燃酒精棉球火焰灭菌，在蒸汽灭菌器中高压灭菌20 min。②水样过滤。应用无菌镊子夹取灭菌滤膜的边缘部位，时刻将粗糙面保持向上，将贴于已灭菌滤床，进行滤器的固定，将100 mL水样注入滤器，将滤器阀门打开，在-0.5大气压的状态下展开抽滤[4]。③水样的培养。水样过滤之后，需要再抽气5 s，把滤器的阀门关好，取下滤器，并且应用灭菌镊子夹取滤膜的边缘部分，并移动其放置在品红亚硫酸钠培养基上，将滤膜截留于细菌面，滤膜需与培养基完全贴紧，不可留有气泡，将平皿倒置，放置在37 ℃的恒温箱中培养。

3 结语

多管发酵法和滤膜法均可应用在饮用水总大肠菌群的检测，多管发酵法适合应用多种样品的检测中，实验时间长。滤膜法则适合杂质较少的水样，操作简单，结果精密，两种检验结果数值和数目不同，因此需要按照实际状况选择检测方式，或者两种方式相结合，以便于取得准确的检验结果。