超高效液相法测定凉果类食品中的EDTA-2Na含量

□ 高 恒 朱玲玲 王 姣 曹程程 王秀娟 杨桂霞 山东中质华检测试检验有限公司

1 引言

EDTA-2Na又叫做乙二胺四乙酸二钠，是一种络合能力很强的食品添加剂和重要的人造有机多元酸[1]，其主要功能是作为稳定剂、凝固剂和防腐剂，因其能与各种金属阳离子稳定络合，防止金属引起的变质和氧化损失，另外还可提高油脂的抗氧化性[2]，进而延长食品的存储周期。

凉果类食品是指经腌制、糖熬浸渍、干燥后的瓜果制品，是传统美食，深受喜爱。但最近食品安全通报部分食品中EDTA-2Na违法添加的事件，引人关注。国家标准《食品添加剂使用标准》（GB2760-2014）详细规定了酱菜、罐头及饮料等食品的EDTA-2Na限量值；明确指出果脯食品仅地瓜果脯允许添加[3]。对于EDTA的测定，常见有比色法、滴定法[4]和高效液相色谱法、离子色谱法等。数据结果显示，滴定法和比色法很难将EDTA和金属离子的络合物和其他络合物区分开，达不到测定精确[5]。液相色谱法是通过检测络合物计算样品中EDTA的含量。通过比对两种常见络合物发现，EDTA-Fe在液相中的检测灵敏度远大于EDTA-Cu， 如图1所示，故本文选取EDTA-Fe作为络合剂。

2 试验部分

2.1 仪器和试剂

2.1.1 试剂

甲醇、正己烷，色谱纯；氯化铁、无水乙酸钠、四丁基溴化铵、磷酸；EDTA-2Na标 准 品（CAS：6381-92-6）；水均为超纯水。

2.1.2 仪器设备

Agilent 1260 Infinity II超高效液相色谱仪（配紫外检测器）、电子天平（0.01 mg/kg/0.01 g）、 XW-80A旋涡混合器、KQ-500V型超声波清洗器、振荡混合器、超纯水仪、3-18KS冷冻离心机。

2.2 试验方法

2.2.1 溶液配制

氯化铁溶液：称取0.2 7g三氯化铁，溶于90 mL水，加入0.05 mL盐酸，转移到100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。

缓冲液：称取6.45 g四丁基溴化铵、1.64 g乙酸钠，加1 000 mL水超声搅拌溶解，用磷酸调pH值为3。

图1 两种络合物液相色谱图的比对

EDTA-2Na标液：准确称取0.100 0 g标准品，用水定容至100 mL，得到1 000 mg/L的标准储备液，冷藏避光保存。

2.2.2 色谱条件

色谱柱Venusil SAX（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相为甲醇∶缓冲液15∶85；流速1.0 mL/min；检测波长258 nm；进样量10 μL；柱温30 ℃。

2.2.3 前处理

将去核后的凉果类试样均匀捣碎，准确称取2.500 g试样于50 mL离心管中，加入水和正己烷，旋涡超声离心各5 min，冷却至室温。将正己烷层弃去，将水层转移至50 mL容量瓶中。向管中加入20 mL水复提取离心一次，并将提取液并入容量瓶中。向容量瓶中加入5 mL氯化铁溶液，用水定容至刻度线。摇匀后旋涡10 min静置，过0.45 μm微孔滤膜，待测。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择

在溶液中，金属离子与EDTA发生螯合反应。条件稳定常数l g KMY值是体现螯合过程中产物生成的标志。文献显示，在pH值为3～6时，Fe3+的l g KMY值达到最大[6]。Fe3+结合氢氧根的能力较强，且在酸性环境中不产生沉淀，故选取缓冲液的pH值为3。对比甲醇∶缓冲液分别为15∶85、20∶80、25∶75条件下，发现目标物随着流动相中甲醇所占比例的提高，出峰时间会发生后移，且在峰面积基本相同的情况下，峰高逐步降低，如图2所示。由此本试验最终选取流动相比例为甲醇∶缓冲液=15∶85。试验通过对螯合物EDTA-Fe进行扫描后，得出目标物在波长258 nm处有最大吸收。

图2 流动相比例为15∶85，20∶80，25∶75下目标物的响应

3.2 衍生化方式以及时间的确定

本试验选取超声、振荡、漩涡三种辅助衍生方式进行对比。如图3所示，旋涡提取的回收率要高于其他方式的回收率。当旋涡时间达到10 min后回收率无明显提高。因此本试验选取最佳衍生方式为涡旋，衍生时间10 min。

3.3 线性关系

以EDTA-2Na标准品含量为横坐标，以峰面积为纵坐标，制标准工作曲线如图4所示。

3.4 方法检出限、回收率和精密度

采用空白基质进行加标，分别进行回收率和精密度试验，以S/N=3计算方法检出限，得EDTA-2Na的检出

图3 不同衍生方式和时间对试验回收率影响

图4 EDTA-2Na标准品的标准曲线

表1 凉果食品样品的空白基质加标回收率

限为5.0 mg/kg。准确称取同一种基质空白的凉果食品样品，平行称取21份，每份2.500 g，进行三个水平的加标试验，每水平做7次平行试验。按上述前处理方法进行处理，最终定容体积为50 mL，结果见表1。平均回收率和标准偏差分别在97.1%～99.6%和1.104%～3.872%。

3.5 实际样品的测定

选取30份市面上的凉果类食品利用本试验方法进行测定，其中两个样品检出值分别为7.35 mg/kg、9.15 mg/kg为阳性。结果表明，本试验方法适用于凉果类食品中EDTA-2Na的含量测定。

4 结论

本实验采用高效液相色谱法检测凉果类食品中的EDTA-2Na添加量，利用紫外光谱进行定性和外标法定量。乙二胺四乙酸二钠在5～100 μg/mL的浓度范围内，其线性相关系数为0.999 97，加标回收率在97.1%～99.6%，相对标准偏差在1.104%～3.872%的相关范围内。该方法快捷、准确、实用性高，为凉果类食品中添加剂乙二胺四乙酸二钠的高效快速检测提供了试验依据，为保障食品安全检测的顺利实施提供了准确数据。